全 文 ：第４３卷第５期
２０１５年１０月
浙 江 工 业 大 学 学 报
ＪＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＺＨＥＪＩＡＮＧ ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ ＯＦ ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ
Ｖｏｌ．４３Ｎｏ．５
Ｏｃｔ．２０１５
收稿日期：２０１５－０３－２６
基金项目：国家自然科学基金资助项目（２１２０６１４８）
作者简介：梁现蕊（１９７５—），女，山东临沂人，副教授，博士，主要从事药物结构分析研究，Ｅ－ｍａｉｌ：ｌｉａｎｇｘｒｖｉｃｋｙ＠ｚｊｕｔ．ｅｄｕ．ｃｎ．
静态顶空－气相色谱法用于柳叶蜡梅挥发油
指纹图谱研究
梁现蕊，肖钦钦
（浙江工业大学 药学院，浙江 杭州３１００１４）
摘要：建立柳叶蜡梅挥发油的气相色谱指纹图谱分析方法，为全面控制柳叶蜡梅质量提供参考．采
用 ＨＰ－ＩＮＮＯＷＡＸ毛细管柱（３０ｍ ×０．２５ｍｍ×０．５０μｍ），顶空平衡温度８０℃，顶空平衡时间
５０ｍｉｎ，进样口温度２００℃，检测器温度２５０℃，程序升温静态顶空－气相色谱（ＨＳ－ＧＣ）分析条件，
对１２批柳叶蜡梅样品进行指纹图谱分析，标定了２５个共有峰，结合相似度软件、聚类分析和主成
分分析对１２批样品进行系统的比较与归类，将不同批次的柳叶蜡梅样品分为两类．该方法精密度
好，简单快速，为柳叶蜡梅品种的鉴定与质量评估提供了可靠的依据．
关键词：柳叶蜡梅；静态顶空－气相色谱（ＨＳ－ＧＣ）；指纹图谱；挥发油；鉴别
中图分类号：Ｒ２８４．１ 文献标志码：Ａ 文章编号：１００６－４３０３（２０１５）０５－０５６７－０６
Ｒｅｓｅａｒｃｈ ｏｎ ｔｈｅ ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｓ ｏｆ ｖｏｌａｔｉｌｅ ｏｉｌ ｉｎ Ｃｈｉｍｏｎａｎｔｈｕｓ ｓａｌｉｃｉｆｏｌｉｕｓ
ｂｙ ｓｔａｔｉｃ ｈｅａｄｓｐａｃｅ－ｇａｓ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ
ＬＩＡＮＧ Ｘｉａｎｒｕｉ，ＸＩＡＯ Ｑｉｎｑｉｎ
（Ｃｏｌｅｇｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｚｈｅｊｉａｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｈａｎｇｚｈｏｕ ３１００１４，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ ａｉｍｅｄ ｔｏ ｅｓｔａｂｌｉｓｈ ａ ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｓ ａｎａｌｙｓｉｓ ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ ｖｏｌａｔｉｌｅ ｏｉｌ ｉｎ
Ｃｈｉｍｏｎａｎｔｈｕｓ ｓａｌｉｃｉｆｏｌｉｕｓ ｆｏｒ ｑｕａｌｉｔｙ ｃｏｎｔｒｏｌ ｂｙ ｓｔａｔｉｃ ｈｅａｄｓｐａｃｅ－ｇａｓ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ（ＨＳ－ＧＣ）．
ＨＳ－ＧＣ ａｎａｌｙｓｉｓ ｗａｓ ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ ｏｎ ｔｈｅ ＨＰ－ＩＮＮＯＷＡＸ ｃａｐｉｌａｒｙ ｃｏｌｕｍｎ（３０ｍ ×０．２５ｍｍ ×
０．５０μｍ）ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｉｎｌｅｔ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ａｔ ２００℃ａｎｄ ｔｈｅ ＦＩＤ ｄｅｔｅｃｔｏｒ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ａｔ ２５０℃．Ｔｈｅ
ＨＳ ｏｖｅｎ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｗａｓ ８０ ℃，ａｎｄ ｔｈｅ ｖｉａｌ ｅｑｕｉｌｉｂｒａｔｉｏｎ ｔｉｍｅ ｗａｓ ５０ｍｉｎ．Ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ
ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ａｐｐｌｉｅｄ ｔｏ ｔｈｅ ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｓ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ １２ｓａｍｐｌｅｓ ａｎｄ ２５ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ ｐｅａｋｓ ｗｅｒｅ
ｐｉｃｋｅｄ ｏｕｔ．Ｔｈｅ ｄａｔａ ｗａｓ ａｎａｌｙｚｅｄ ｂｙ ｃｈｅｍｏｍｅｔｒｉｃｓ ｍｅｔｈｏｄｓ ｓｕｃｈ ａｓ ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ ａｎａｌｙｓｉｓ，
ｈｉｅｒａｒｃｈｉｃａｌ ｃｌｕｓｔｅｒ ａｎａｌｙｓｉｓ ａｎｄ ｐｒｉｎｃｉｐａｌ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ ａｎａｌｙｓｉｓ．１２ｓａｍｐｌｅｓ ｗｅｒｅ ｄｉｖｉｄｅｄ ｉｎｔｏ ２
ｇｒｏｕｐｓ．Ａ ｎｅｗ，ｒａｐｉｄ ａｎｄ ｓｉｍｐｌｅ ＨＳ－ＧＣ ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ．Ｉｔ ｐｒｏｖｉｄｅｓ ａ ｎｏｖｅｌ
ｓｔｒａｔｅｇｙ ｆｏｒ ｔｈｅ ｏｒｉｇｉｎ ｄｉｓｔｉｎｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｑｕａｌｉｔｙ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｈｉｍｏｎａｎｔｈｕｓ ｓａｌｉｃｉｆｏｌｉｕｓ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｃｈｉｍｏｎａｎｔｈｕｓ ｓａｌｉｃｉｆｏｌｉｕｓ；ｓｔａｔｉｃ ｈｅａｄｓｐａｃｅ－ｇａｓ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ （ＨＳ－ＧＣ）；
ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｓ；ｖｏｌａｔｉｌｅ ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ；ａｕｔｈｅｎｔｉｃａｔｉｏｎ
柳叶蜡梅（Ｃｈｉｍｏｎａｎｔｈｕｓ ｓａｌｉｃｉｆｏｌｉｕｓ）系蜡梅
科蜡梅属半常绿灌木川，在我国具有悠久的栽培历
史和药用价值，其产地主要分布于我国江西和浙江
等省［１］．用柳叶蜡梅的叶片和嫩芽为原料制成的绿
茶，在浙江丽水和江西婺源一带被称作“食凉茶”或
“黄金茶”，具有抗菌，消炎等作用，同时对防治感冒、
喉咙肿痛、慢性气管炎等也有较好的疗效［２－４］．此外，
柳叶蜡梅中含有丰富的挥发油成分，因此它将是精
油生产的一个重要来源［４－５］．然而，对于蜡梅属品种
的分类研究，一直以来都存在不同的争议．目前，蜡
梅属在我国中部和东南部就已有十种之多［６］，如蜡
梅、山蜡梅、柳叶蜡梅、西南蜡梅、贵州蜡梅、浙江蜡
梅、突托蜡梅、保康蜡梅、安徽蜡梅、簇花蜡梅．由于
蜡梅品种具有十分相似的外观和香味等特点，因此
很难通过其外在形态或气味将其一一区别开来．因
此，作为一种重要的中药材使用时，需要建立一个准
确的方法来区分这些品种，以避免造假和误用，同时
也为其产地识别提供科学依据．
目前，指纹图谱技术是国际公认的控制中药质
量的最常用手段，是一种综合的可量化的鉴定手
段［７］．但中药的指纹图谱相当复杂，为了能最大限度
地获取有关物质系统的化学信息，常常将其与化学
计量学技术结合起来，其应用更为准确可靠．其中，
相似度评价、主成分分析与聚类分析在中药指纹图
谱研究中最常使用．相似度评价是通过将谱学分析
法与化学计量学处理方法相结合，建立药材的特征
性指纹图谱，以其特征峰为依据对样本进行分类的
一种数据分析技术，采用色谱峰面积为分析对象，保
持了药材多成分信息的完整性，可为药材品质鉴定
提供了较详细的信息，是指纹图谱用于药材质量评
价和质量控制的一个重要环节．主成分分析是利用
降维的思想，根据贡献率的大小用少数几个具有代
表性的综合指标去解释原来资料中的大部分变量的
多元统计分析方法．聚类分析又称群分析，是根据
“物以类聚”的道理，对样品或指标进行分类的一种
多元统计分析方法．化学计量学技术已经广泛地运
用于中药指纹图谱的研究［８－１１］．静态顶空－气相色谱
采用气体进样方式，其分析速度快，操作简便，几乎
不需要对样品进行前处理就可以直接对液体或固体
样品中挥发性成分进行分析［１２－１３］．本实验旨在应用
静态顶空－气相色谱建立柳叶蜡梅中易挥发性成分
的分析方法，并结合相似度分析、聚类分析和主成
分分析对不同产地、采收时间的柳叶蜡梅中易挥
发性成分进行指纹图谱分析，从而为柳叶蜡梅的
质量鉴定及产地判别提供依据．
１ 仪器与材料
１．１ 仪器与设备
Ｍｅｔｔｌｅｒ ｔｏｌｅｄｏ ＸＳ２０５ＤＵ天平（瑞士）；Ａｇｉｌｅｎｔ
Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ ６８９０Ｎ气相色谱仪（美国），配有ＦＩＤ
检测器、安捷伦化学工作站及Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ
Ａｇｉｌｅｎｔ Ｇ１８８８顶空进样器；Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ
７８９０Ａ气相色谱－四级杆质谱联用仪，配有 ＥＩ源、
ＭａｓｓＨｕｎｔｅｒ数据软件、ＮＩＳＴ０８标准谱库．
１．２ 试剂与材料
α－蒎烯对照品（质量分数为９５％），购于广东松
林香料有限公司．
柳叶蜡梅样品分别采自于江西、浙江等地，１２
批样品信息如表１所示，所有样品经研磨、粉碎和过
筛后放入干燥洁净的样品瓶中，保存于２～８℃冰箱
中备用．
表１ １２批柳叶蜡梅茶叶样品信息
Ｔａｂｌｅ １ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ １２ｓａｍｐｌｅｓ ｏｆ Ｃｈｉｍｏｎａｎｔｈｕｓ ｓａｌｉｃｉｆｏｌｉｕｓ
产地 批号（采摘时间／品牌）
浙江开化
Ｓ１（２０１３－０５／龙顶），Ｓ２（２０１３－０３／高山）
Ｓ３（２０１２－０４／龙顶），Ｓ４（２０１４－０４／擎山坞）
Ｓ５（２０１３－０４／天韵），Ｓ６（２０１４－０４／天韵）
Ｓ７（２０１４－０４／洪福）
江西玉山
Ｓ８（２０１３－０４／葛博士），Ｓ９（２０１４－０４／葛博士）
Ｓ１０（２０１３－０５／农家），Ｓ１１（２０１４－０４／农家）
江西婺源 Ｓ１２（２０１４－０４／婺源绿茶）
２ 实验方法
２．１ 色谱条件
２．１．１ ＨＳ－ＧＣ条件
色谱柱为毛细管色谱柱ＨＰ－ＩＮＮＯＷＡＸ（３０ｍ×
０．３２ｍｍ×０．５μｍ）；载气：高纯氮气，流速１．０ｍＬ／
ｍｉｎ；柱温：程序升温，初始温度５０℃保持３ｍｉｎ，以１０
℃／ｍｉｎ的速率升温至１５０℃，保持１０ｍｉｎ，再以１
℃／ｍｉｎ的速率升温至１６０℃，保持６ｍｉｎ，最后以２０
℃／ｍｉｎ的速率升温至２２０℃，保持１７ｍｉｎ；进样口温
度为２５０℃；ＦＩＤ检测器温度为２８０℃；不分流模式；
顶空瓶体积２０ｍＬ；顶空平衡温度为８０℃；顶空平衡
时间５０ｍｉｎ；进样时间为１ｍｉｎ．
２．１．２ ＨＳ－ＧＣ／ＭＳ条件
色谱柱为毛细管色谱柱 ＨＰ－ＩＮＮＯＷＡＸ（６０ｍ
×０．２５ｍｍ×０．２５μｍ），进样口温度为２００℃，载气
为氦气，流速１．０ｍＬ／ｍｉｎ，进样时间１ｍｉｎ，ＥＩ源温
度２３０℃，电压７０ｅＶ，质量扫描范围３０～５５０ａｍｕ，
程序升温和顶空条件同２．１．１．
２．２ 对照品溶液的制备
取α－蒎烯对照品５ｍｇ，精密称定，至于５０ｍＬ
容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度．精密量取上述溶
液０．２ｍＬ至２０ｍＬ顶空瓶中，加入１．８ｍＬ水，压
盖密封，即得．
２．３ 供试品溶液的制备
取柳叶蜡梅粉末３００ｍｇ，精密称定，置于２０
ｍＬ顶空瓶中，加水２ｍＬ，压盖密封，即得供试品
溶液．
·８６５· 浙 江 工 业 大 学 学 报 第４３卷
３ 结果与讨论
３．１ 方法重复性、精密度和柳叶蜡梅供试品稳定性
取Ｓ３批次柳叶蜡梅样品６份，按２．３方法制备
供试品溶液，按２．１．１ＨＳ－ＧＣ条件进样测定进行重
复性考察．结果显示２５个共有峰的峰面积ＲＳＤ在
３．３％～４．９％范围内，说明该方法重复性好．取同一
批次样品５份，分别于第１天和第２天进行试验，按
２．３方法制备供试品溶液，按２．１．１ＨＳ－ＧＣ条件进
样测定进行精密度考察．结果显示２５个共有峰的峰
面积ＲＳＤ（ｎ＝１０）在２．４％～５．０％范围内，说明仪
器精密度良好．取同一批次样品８份，按２．３方法制
备供试品溶液，按２．１．１ＨＳ－ＧＣ条件，分别在０，２，
４，８，１２，２０，２４和４８ｈ进样测定进行稳定性考察．
结果表明：柳叶蜡梅供试品溶液在２４ｈ内２５个共
有峰的峰面积ＲＳＤ均小于５．０％，但从色谱图上来
看，样品在２０ｈ后出现了两个新物质，因此样品溶
液在２０ｈ内是稳定的．
３．２ 指纹图谱的建立
３．２．１ 指纹图谱共有模式的建立及相似度评价
取１２批柳叶蜡梅样品，按２．３方法制备供试品
溶液，按２．１．１ＨＳ－ＧＣ条件依次进样测定，记录ＧＣ
色谱图，１２批样品的ＧＣ色谱图如图１所示．将１２
批柳叶蜡梅挥发油的ＧＣ图谱以 ＡＩＡ格式依次导
入国家药典委员会中药色谱指纹图谱相似度评价系
统软件（２００４Ａ版）进行分析，以Ｓ１批柳叶蜡梅ＧＣ
谱图为参照谱图进行指纹匹配，确定了２５个共有
峰，生成共有模式指纹图谱，如图２所示，其中，以峰
１８在图谱中较稳定，峰面积较大，与各峰分离良好，
又为所有样品共有，因此确定峰１８为参照峰（Ｓ），则
其余各共有峰与峰１８的相对保留时间 ＲＳＤ见表
２．同时进行各批次样品与对照指纹图谱之间的相似
度计算，以夹角余弦法为测度，１２批样品相似度结
果依次为：０．９６４，０．８７９，０．７４５，０．８７０，０．９３１，
０．９６７，０．８９７，０．９１２，０．９３６，０．９１６，０．９９５，０．９０３．
图１ １２批柳叶蜡梅挥发油的ＨＳ－ＧＣ指纹图谱
Ｆｉｇ．１ ＨＳ－ＧＣ ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔ ｏｆ １２ｂａｔｃｈｅｓ ｏｆ ｖｏｌａｔｉｌｅ ｏｉｌ ｉｎ Ｃｈｉｍｏｎａｎｔｈｕｓ ｓａｌｉｃｉｆｏｌｉｕｓ
图２ 柳叶蜡梅挥发油的ＨＳ－ＧＣ指纹图谱共有模式及共有峰标识
Ｆｉｇ．２ Ｍｕｔｕａｌ ｍｏｄｅｓ ａｎｄ ｃｏｍｍｏｎ ｐｅａｋｓ ｏｆ ＨＳ－ＧＣ ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔ ｏｆ ｖｏｌａｔｉｌｅ ｏｉｌ ｉｎ Ｃｈｉｍｏｎａｎｔｈｕｓ ｓａｌｉｃｉｆｏｌｉｕｓ
·９６５·第５期 梁现蕊，等：静态顶空－气相色谱法用于柳叶蜡梅挥发油指纹图谱研究
表２ 柳叶蜡梅指纹图谱共有峰的相对保留时间
Ｔａｂｌｅ ２ Ｒｅｌａｔｉｖｅ ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ ｔｉｍｅ ｏｆ ｃｏｍｍｏｎ ｐｅａｋｓ ｉｎ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃ ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔ ｏｆ Ｃｈｉｍｏｎａｎｔｈｕｓ ｓａｌｉｃｉｆｏｌｉｕｓ
编
号
相对保留时间
Ｓ１ Ｓ２ Ｓ３ Ｓ４ Ｓ５ Ｓ６ Ｓ７ Ｓ８ Ｓ９ Ｓ１０ Ｓ１１ Ｓ１２
ＲＳＤ／％
１ ０．２７３ ０．２７３ ０．２７３ ０．２７３ ０．２７４ ０．２７３ ０．２７３ ０．２７４ ０．２７３ ０．２７３ ０．２７３ ０．２７３ ０．０９０
２ ０．２９３ ０．２９３ ０．２９３ ０．２９３ ０．２９３ ０．２９３ ０．２９３ ０．２９３ ０．２９３ ０．２９３ ０．２９３ ０．２９３ ０．０７２
３ ０．３４５ ０．３４６ ０．３４６ ０．３４６ ０．３４６ ０．３４６ ０．３４６ ０．３４６ ０．３４６ ０．３４６ ０．３４６ ０．３４６ ０．０４０
４ ０．３７２ ０．３７２ ０．３７２ ０．３７２ ０．３７３ ０．３７２ ０．３７２ ０．３７２ ０．３７２ ０．３７２ ０．３７２ ０．３７２ ０．０４７
５ ０．３８２ ０．３８２ ０．３８２ ０．３８２ ０．３８２ ０．３８２ ０．３８２ ０．３８２ ０．３８２ ０．３８２ ０．３８２ ０．３８２ ０．０４１
６ ０．４２２ ０．４２２ ０．４２２ ０．４２２ ０．４２２ ０．４２２ ０．４２２ ０．４２２ ０．４２２ ０．４２２ ０．４２２ ０．４２２ ０．０４５
７ ０．４３６ ０．４３６ ０．４３６ ０．４３６ ０．４３６ ０．４３６ ０．４３６ ０．４３６ ０．４３６ ０．４３６ ０．４３６ ０．４３６ ０．０４３
８ ０．４５６ ０．４５４ ０．４５５ ０．４５６ ０．４５３ ０．４５４ ０．４５５ ０．４５４ ０．４５５ ０．４５５ ０．４５６ ０．４５６ ０．２４４
９ ０．４６６ ０．４６４ ０．４６５ ０．４６６ ０．４６３ ０．４６４ ０．４６６ ０．４６４ ０．４６５ ０．４６５ ０．４６６ ０．４６６ ０．２３３
１０ ０．５０１ ０．４９９ ０．５００ ０．５０１ ０．４９８ ０．４９９ ０．５００ ０．４９９ ０．５００ ０．５００ ０．５０１ ０．５０１ ０．２４８
１１ ０．５４５ ０．５４３ ０．５４４ ０．５４４ ０．５４２ ０．５４３ ０．５４４ ０．５４３ ０．５４４ ０．５４４ ０．５４４ ０．５４４ ０．１７１
１２ ０．５６０ ０．５５９ ０．５６０ ０．５６０ ０．５５９ ０．５５９ ０．５６０ ０．５５９ ０．５５９ ０．５６０ ０．５６０ ０．５６０ ０．０６５
１３ ０．５８８ ０．５８７ ０．５８８ ０．５８８ ０．５８６ ０．５８６ ０．５８８ ０．５８７ ０．５８７ ０．５８８ ０．５８８ ０．５８８ ０．１１２
１４ ０．７７７ ０．７７８ ０．７７６ ０．７７６ ０．７７７ ０．７７５ ０．７７６ ０．７７８ ０．７７６ ０．７７８ ０．７７６ ０．７７６ ０．１１７
１５ ０．８４０ ０．８４０ ０．８４０ ０．８４０ ０．８４０ ０．８４０ ０．８４０ ０．８４０ ０．８４０ ０．８４０ ０．８４０ ０．８４０ ０．０１９
１６ ０．８９４ ０．８９４ ０．８９３ ０．８９４ ０．８９４ ０．８９４ ０．８９３ ０．８９４ ０．８９３ ０．８９４ ０．８９４ ０．８９４ ０．０４７
１７ ０．９６８ ０．９６８ ０．９６８ ０．９６８ ０．９６８ ０．９６８ ０．９６８ ０．９６８ ０．９６８ ０．９６８ ０．９６８ ０．９６８ ０．０１３
１８ １．０００ １．０００ １．０００ １．０００ １．０００ １．０００ １．０００ １．０００ １．０００ １．０００ １．０００ １．０００ ０．０００
１９ １．１３６ １．１３６ １．１３６ １．１３６ １．１３６ １．１３６ １．１３６ １．１３６ １．１３６ １．１３６ １．１３６ １．１３６ ０．０１３
２０ １．２１９ １．２２０ １．２１５ １．２１９ １．２２０ １．２１９ １．２１９ １．２１９ １．２１９ １．２１９ １．２１９ １．２１９ ０．０９８
２１ １．２３８ １．２３８ １．２３８ １．２３８ １．２３８ １．２３８ １．２３８ １．２３８ １．２３８ １．２３８ １．２３８ １．２３８ ０．０１６
２２ １．２７９ １．２８０ １．２８０ １．２７９ １．２７９ １．２７９ １．２７９ １．２８０ １．２７９ １．２７９ １．２７９ １．２７９ ０．０３９
２３ １．３２０ １．３２０ １．３２０ １．３２０ １．３２０ １．３１９ １．３２０ １．３２０ １．３１９ １．３２０ １．３１９ １．３１９ ０．０２８
２４ １．３３７ １．３３７ １．３３７ １．３３７ １．３３７ １．３３７ １．３３８ １．３３７ １．３３６ １．３３７ １．３３７ １．３３７ ０．０３０
２５ ２．１６２ ２．１６３ ２．１６４ ２．１６３ ２．１６４ ２．１６３ ２．１６３ ２．１６２ ２．１６３ ２．１６２ ２．１６３ ２．１６３ ０．０３４
一般情况下，当相似性低于０．８００，认为两个样
品之间有很大的不同．因此，从相似度结果来看，采
收年份最早的Ｓ３与其他样品差异较大，说明采收年
份对柳叶腊梅挥发油成分有一定的影响．对于同一
地区的样品，产自江西的５批样品之间质量差异较
小，产自浙江开化的７批样品之间相似性差异也较
小，除Ｓ３．通常，样品中的挥发性成分易受储藏条件
与存放时间的影响而导致其某些挥发性成分质量分
数的变化［７，１１］，同时也受采收时间的影响，如Ｓ３批
样品因采收时间早于所有其他批次的样品，且一直
存放于室温条件下而导致其与其他批次样品差距
较大．
３．２．２ 共有峰的归属
取Ｓ１批柳叶蜡梅样品，按２．３方法制备供试品
溶液，按２．１．２ＨＳ－ＧＣ／ＭＳ条件进样分析，采用对
照品对照与ＮＩＳＴ０８标准谱库对柳叶蜡梅挥发油指
纹图谱中的２５个共有色谱峰进行归属．各共有峰经
ＨＳ－ＧＣ／ＭＳ鉴定结果示见表３，谱库检索匹配度均
大于９０％，因此柳叶蜡梅茶叶中主要含有α－蒎烯、
桉油精、石竹烯、α－石竹烯、Ｄ－大根香叶烯和（－）－ｂ－杜
松烯等挥发性成分．从表３中可看出：１２批样品２５
个共有特征峰的相对峰面积（以峰１８为参照峰）变
化较大，表明不同批次柳叶和蜡梅之间化学成分的
质量分数存在一定差异．
·０７５· 浙 江 工 业 大 学 学 报 第４３卷
表３ 柳叶蜡梅指纹图谱共有峰的成分分析
Ｔａｂｌｅ ３ Ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｃｏｍｍｏｎ ｐｅａｋｓ ｉｎ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃ ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔ ｏｆ Ｃｈｉｍｏｎａｎｔｈｕｓ ｓａｌｉｃｉｆｏｌｉｕｓ
编号 保留时间／ｍｉｎ 化合物名称 分子式 分子量 相对峰面积 化合物类别
１ ５．３８２ 未鉴定 — — ０．０２～０．１６ —
２ ５．７７２ 未鉴定 — — ０．０１～０．１４ —
３ ６．８０７ 戊醛 Ｃ５Ｈ１０Ｏ ８６ ０．０１～０．０６ 醛类
４ ７．３２８ 未鉴定 — — ０．０１～０．２５ —
５ ７．５２６ α－蒎烯 Ｃ１０Ｈ１６ １３６ ０．０８～２．０４ 单萜
６ ８．３０６ 茨烯 Ｃ１０Ｈ１６ １３６ ０．０１～０．３１ 单萜
７ ８．５８２ 己醛 Ｃ６Ｈ１２Ｏ １００ ０．０１～０．０２ 醛类
８ ８．９５５ （１Ｓ）－６，６－二甲基－２－亚甲基－二环［３．１．１］庚烷 Ｃ１０Ｈ１６ １３６ ０．０２～０．５０ 单萜
９ ９．１５９ ４－亚甲基－１－（１－甲基乙基）－二环［３．１．０］己烷 Ｃ１０Ｈ１６ １３６ ０．０１～０．１３ 单萜
１０ ９．８４８ β－月桂烯 Ｃ１０Ｈ１６ １３６ ０．０２～０．５６ 单萜
１１ １０．７０１ Ｄ－柠檬烯 Ｃ１０Ｈ１６ １３６ ０．０１～０．４７ 单萜
１２ １１．０１５ 桉油精 Ｃ１０Ｈ１８Ｏ １５４ ０．０１～０．３４ 单萜
１３ １１．５６５ ３，７－二甲基－１，３，６－辛三烯 Ｃ１０Ｈ１６ １３６ ０．０２～０．２３ 单萜
１４ １５．２９２ 未鉴定 — — ０．０１～０．１ —
１５ １６．５３９ 古巴烯 Ｃ１５Ｈ２４ ２０４ ０．０１～０．３６ 倍半萜
１６ １７．５９７ 荜澄茄油烯 Ｃ１５Ｈ２４ ２０４ ０．０１～０．１２ 倍半萜
１７ １９．０５６ （－）－ｂ－榄香烯 Ｃ１５Ｈ２４ ２０４ ０．０２～０．６８ 倍半萜
１８ １９．６９０ 石竹烯 Ｃ１５Ｈ２４ ２０４ 一 倍半萜
１９ ２２．３７０ α－石竹烯 Ｃ１５Ｈ２４ ２０４ ０．０７～０．３５ 倍半萜
２０ ２４．００８ Ｄ－大根香叶烯 Ｃ１５Ｈ２４ ２０４ ０．１３～０．８８ 倍半萜
２１ ２４．３７３ α－衣兰油烯 Ｃ１５Ｈ２４ ２０４ ０．０１～０．２４ 倍半萜
２２ ２５．１８６ （Ｅ）－３，７－二甲基－２，６－辛二烯－１－醇－乙酸酯 Ｃ１２Ｈ２０Ｏ２ １９６ ０．０３～０．１７ 酯类
２３ ２５．９８４ （－）－ｂ－杜松烯 Ｃ１５Ｈ２４ ２０４ ０．１１～１．６３ 倍半萜
２４ ２６．３２４ β－倍半水芹烯 Ｃ１５Ｈ２４ ２０４ ０．０１～０．３９ 倍半萜
２５ ４２．５８０ １－羟基－１，７－二甲基－４－异丙基－２，７－芳癸二烯 Ｃ１５Ｈ２６Ｏ ２２２ ０．０２～０．０５ 倍半萜
３．３ 聚类分析
为了能更全面地了解柳叶蜡梅样品的质量和品
种之间的差异性，以柳叶蜡梅ＧＣ图谱中２５个特征
峰的相对峰面积（以峰１８为参照峰）为指标，采用
ＳＰＳＳ１９．０数据分析软件对１２批柳叶蜡梅样品进行
聚类分析．将相似度分析所得１２批样品的匹配数据
中２５个共有峰的相对峰面积导入该软件中，得到一
个Ａ１２×２５（１２批样品和２５个共有峰）的数据矩阵．聚
类分析采用组间联接法，平方Ｅｕｃｌｉｄｅａｎ距离作为
聚类对象相似度的距离公式，得到柳叶蜡梅样品系
统聚类树状图如图３所示，从图３中可清楚地看出：
Ｓ３批样品与其他批次距离较远，若将１２批样品分
为两大类，则Ｓ３可为第Ι类，其他１１批样品可为ΙΙ
类．两个样本之间的距离越短，它们的相似度就越
高，质量差异就越小．因此，该结果表明Ｓ３批次样品
与其他批次样品的质量之间存在明显差异，这与相
似度评价结果是一致的．
图３ １２批柳叶蜡梅样品使用平均联接的树状图
Ｆｉｇ．３ Ｄｅｎｄｒｏｇｒａｍ ｃｌｕｓｔｅｒｉｎｇ ｏｆ １２ Ｃｈｉｍｏｎａｎｔｈｕｓ
ｓａｌｉｃｉｆｏｌｉｕｓ ｓａｍｐｌｅｓ
·１７５·第５期 梁现蕊，等：静态顶空－气相色谱法用于柳叶蜡梅挥发油指纹图谱研究
３．４ 主成分分析
以柳叶蜡梅ＧＣ图谱中２５个特征峰的相对峰
面积为指标，采用ＳＰＳＳ１９．０软件对１２批柳叶蜡梅
样品进行主成分分析．基于特征值＞１为抽取标准，
得到前两个主成分的累积方差贡献率为９２．０％（第
一主成分的贡献率为８２．４％，第二主成分的贡献率
为９．６％），它代表了柳叶蜡梅样品中２５个元素质
量分数的９２．０％的信息量，具有较好的代表性，说
明主成分分析法在该研究中适用，降维成功，因此选
取前２个主成分即可进行评价．１２批柳叶蜡梅样品
的主成分得分图如图４所示，依据各样品在主成分
得分散点图上的位置，我们同样可以看到点Ｓ３与其
他多点聚集中心的距离偏离较远，因此，该结果与聚
类分析结果是一致的．
图４ １２批柳叶蜡梅样品的主成分得分图
Ｆｉｇ．４ Ｓｃａｔｔｅｒ ｐｌｏｔ ｏｆ １２ Ｃｈｉｍｏｎａｎｔｈｕｓ ｓａｌｉｃｉｆｏｌｉｕｓ ｓａｍｐｌｅｓ
４ 结 论
应用静态顶空－气相色谱法建立了柳叶蜡梅挥
发油的专属性指纹图谱，该方法简单快速，无需复杂
的样品前处理过程，样品用量少，精密度好，可用于
柳叶蜡梅挥发油的指纹图谱分析．结合相似度分析、
聚类分析和主成分分析等方法，对１２批样品的质量
进行了系统比较与分类研究，结果表明：１２柳叶蜡
梅样品可分为两大类，其中采收年份最早的Ｓ３批样
品为第Ι类，其他１１批样品为第ΙΙ类，说明不同产
地的柳叶蜡梅之间质量差异较小，而采收时间与存
放时间对其质量影响较为明显，三种分析方法得到
一致的结论，说明建立的柳叶蜡梅挥发油的指纹图
谱分析方法可靠，可为柳叶蜡梅的香气评价、质量控
制和产地识别等方面提供科学依据．
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（责任编辑：刘 岩）
·２７５· 浙 江 工 业 大 学 学 报 第４３卷