全 文 ：基金项目：国家自然科学基金项目（８１０６０３２８）；新疆维吾尔自治区自然科学基金项目（２０１０２１１Ａ２６）
作者简介：刘淑敏（１９７２－），女，硕士，研究方向：中药新制剂与新剂型研究。
通信作者：赵翡翠，女，副主任中药师，硕士生导师，研究方向：中药材资源开发及质量标准研究，Ｅ－ｍａｉｌ：ｚｚｆｆｃｃ＠１２６．ｃｏｍ。
分光光度法测定新疆乌头属植物总生物碱的含量
刘淑敏１，聂继红２，潘　荣２，赵翡翠２
（新疆医科大学１中医学院中药制剂教研室，２附属中医医院药学部，乌鲁木齐　８３００００）
摘要：目的　考察新疆乌头属植物总生物碱含量测定的方法。方法　用分光光度法测定新疆乌头属植物中
总生物碱的含量。以乌头碱为对照品，溴甲酚绿为酸性染料，缓冲溶液ｐＨ（３．０±０．１）条件下，三氯甲烷萃取
４５ｍｉｎ，于４１５ｎｍ波长处测定其吸光度。结果　乌头碱在１１．７６～２７．４４ｍｇ／Ｌ浓度范围内线性关系良好，回归
方程Ｙ＝２１．４０３　Ｘ＋０．００３　５，ｒ＝０．９９９　１，精密度良好，ＲＳＤ＝０．９９％；样品溶液显色后４ｈ内稳定，ＲＳＤ＝１．２７％。
本法测定的重复性良好，ＲＳＤ＝１．３７％；平均加样回收率为１００．８９％，ＲＳＤ＝１．８２％。新疆伊犁不同地区分布的白
喉乌头和准噶尔乌头较多，其总生物碱含量平均值分别为０．２３６％和０．２３８％。结论　分光光度法简便、准确，可
用于新疆乌头属植物中总生物碱的含量测定。
关键词：分光光度法；新疆乌头属；生物碱；乌头碱；含量测定
中图分类号：Ｒ２８４．１　　文献标识码：Ａ　　文章编号：１００９－５５５１（２０１２）０２－０１９３－０４
Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ａｌｋａｌｏｉｄ　ｉｎ　Ｘｉｎｊｉａｎｇ　ｇｅｎｕｓ　Ａｃｏｎｉｔｕｍ
ＬＩＵ　Ｓｈｕ－ｍｉｎ１，Ｎｉｅ　Ｊｉ－ｈｏｎｇ２，ＰＡＮ　Ｒｏｎｇ２，ＺＨＡＯ　Ｆｅｉ－ｃｕｉ　２
（１　Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｈｅｒｂａｌ　Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ，Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，２　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ
ｏｆ　Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ　Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｘｉｎｊｉａｎｇ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｕｒｕｍｑｉ　８３００００，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ　ｔｈｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｔｈｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ａｌｋａｌｏｉｄ　ｉｎ　Ｘｉｎ－
ｊｉａｎｇ　ｇｅｎｕｓ　Ａｃｏｎｉｔｕｍ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｕｓｉｎｇ　ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ　ｔｏ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ａｌｋａｌｏｉｄ　ｉｎ
Ｘｉｎｊｉａｎｇ　ｇｅｎｕｓ　ａｃｏｎｉｔｕｍ．Ｕｓｉｎｇ　ａｃｏｎｉｔｉｎｅ　ａｓ　ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ，ｂｒｏｍｏｃｒｅｓｏｌ　ｇｒｅｅｎ　ａｓ　ａｃｉｄ　ｄｙｅ，ｂｕｆｆｅｒ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ　ｐＨ
＝３ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ，ｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　４５ｍｉｎ，ｍｅａｓｕｒｅｄ　ａｔ　４１５ｎｍ　ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ　ａｂｓｏｒｂａｎｃｅ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　
Ａｃｏｎｉｔｉｎｅ　ｉｎ　１１．７６～２７．４４ｍｇ／Ｌ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｒａｎｇｅ　ａ　ｇｏｏｄ　ｌｉｎｅａｒ　ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ，ｔｈｅ　ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ　ｅｑｕａｔｉｏｎ　Ｙ
＝２１．４０３　Ｘ＋０．００３　５，ｒ＝０．９９９　１ｇｏｏｄ　ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ，ＲＳＤ＝０．９９％；ｃｏｌｏｒ　ｓａｍｐｌｅ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ　ｗａｓ　ｓｔａｂｌｅ　ａｆｔｅｒ
４ｈ，ＲＳＤ＝１．２７％．Ａｐｐｌｉｅｄ　ｔｏ　ｔｈｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｇｏｏｄ　ｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｉｌｉｔｙ，ＲＳＤ＝１．３７％；ａｖｅｒａｇｅ　ｒｅ－
ｃｏｖｅｒｙ　ｗａｓ　１００．８９％，ＲＳＤ＝１．８２％．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｔｈｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｉｓ　ｓｉｍｐｌｅ，ａｃｃｕｒａｔｅ，ａｎｄ　ｃａｎ　ｂｅ　ｕｓｅｄ　ｆｏｒ　ｔｈｅ
ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ａｌｋａｌｏｉｄｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｇｅｎｕｓ　ａｃｏｎｉｔｕｍ　ｏｆ　Ｘｉｎｊｉａｎｇ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ；Ｘｉｎｊｉａｎｇ　Ａｃｏｎｉｔｕｍ；ａｌｋａｌｏｉｄｓ；ａｃｏｎｉｔｉｎｅ；ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ
　第３５卷　第２期 新 疆 医 科 大 学 学 报 Ｖｏｌ．３５　ＮＯ．２
　２０１２年２月 Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｘｉｎｊｉａｎｇ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｆｅｂ．２０１２
　　乌头属植物是毛茛科 （Ｒａｎｕｎｃｕｌａｃｅａｅ）中的一
类重要植物，我国约有２００种，其中约７６种可供药
用［１－２］。其性味辛、苦、热，有大毒，有祛风除湿、温经
止痛的功能。生物碱类成分是乌头属植物的主要有
效成分和毒性成分，包括双酯型生物碱、单酯型生物
碱、氨醇型生物碱和其他类生物碱等［３］。乌头属药
用植物具有抗炎、镇痛、镇静、解热、免疫抑制、抗肿
瘤作用及强心、降血压、扩张血管等药理作用［４］。新
疆位处我国西北高寒地带，多风多寒，生态环境恶
劣，使风寒湿各类痹痛（风湿性关节炎、强直性脊柱
炎、风湿性心脏病等）成为新疆地区常见病、多发病，
且缠绵难愈，给患者带来极大的痛苦，严重影响患者
的生存质量。新疆产乌头属植物有１０种５个变种，
其块根大多具有镇痛、镇痉、祛风湿和解热等功能，
在治疗风寒湿各类痹痛方面，有其独特优势［５－６］，是
哈萨克民族及其他少数民族传统的民族药和中药
（草乌）的重要来源之一。近年尚未见针对新疆乌头
属药用植物资源的研究，本研究通过实地调查、标本
采集并结合文献，采用文献中应用较多的酸性染料
比色法测定新疆乌头属植物中总生物碱的含量，为
新疆乌头属植物的研究开发提供依据。
１　仪器、材料与试药
１．１　仪器　ＳＨＩＭＡＤＺＵ　ＵＶ－１６０１紫外可见分光光
度计（日本岛津公司），ＥＲ－１８２Ａ十万分之一电子天
平（Ａ＆Ｄ　Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｌｉｍｉｔｅｄ），ｐＨ　８６８型精密ｐＨ计。
１．２　试药　本课题组于２０１０年７－９月分别前往
新疆东疆地区（奇台、木垒、巴里坤、伊吾、哈密、鄯
善、吐鲁番）、伊犁地区（尼勒克、新源、特克斯、昭苏、
巩留）、乌鲁木齐南山、达板城等１４个地县实地调
查，采集标本，并经新疆医科大学附属中医医院药研
室李永和主任中药师鉴定为白喉乌头、准噶尔乌头、
林地乌头、伊梨乌头、空茎乌头５种。样品品种及来
源见表１。乌头碱对照品（中国药品生物制品检定
所），所用试剂均为分析纯。
表１　样品来源及编号
药用植物 产地或来源
白喉乌头 （Ａ．ｌｅｕｃｏｓｔｏｍｕｍ　Ｗｏｒｏｓｃｈ．） 伊犁地区尼勒克、伊犁地区新源、伊犁地区特克斯
准噶尔乌头 （Ａ．ｓｏｏｎｇａｒｉｃｕｍ　Ｓｔａｐｆ．） 伊犁地区巩留、伊犁地区尼勒克、伊犁地区新源
林地乌头 （Ａ．ｎｅｍｏｒｕｍ　Ｍ．Ｐｏｐ） 伊犁地区特克斯、乌鲁木齐南山西白杨沟
伊梨乌头 （Ａ．ｔａｌａｓｓｉｕｍ　ｖａｒ．ｖｉｌｌｏｓｕｕｍ　Ｗ．Ｔ．Ｗａｎｇ） 塔城托里县、东疆巴里坤县松树塘
空茎乌头 （Ａ．ａｐｅｔａｌｕｍ （Ｈｕｔｈ）Ｂ．Ｆｅｄｔｓｃｈ．） 伊犁地区特克斯
草乌 新疆奇康哈博公司，批号：２０１００９２３
１．３　试剂的配置　溴甲酚绿指示液配制：取溴甲酚
绿约２００ｍｇ，精密称定，加入０．０５ｍｏｌ／Ｌ氢氧化钠
３．５ｍＬ溶解，超声，加水至２００ｍＬ处，过滤，用
５０ｍＬ三氯甲烷萃取２次，每次１．５ｈ，除去脂溶性
杂质。醋酸盐缓冲液ｐＨ（３．０±０．１）：精密称取醋酸
钠０．３ｇ及准确量取冰醋酸１１．２ｍＬ，置１　０００ｍＬ
容量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀。
２　方法与结果
２．１　对照品溶液的制备　取乌头碱对照品约
４ｍｇ，精密称定，置５０ｍＬ容量瓶中，加ｐＨ值（３．０
±０．１）醋酸盐缓冲液至刻度，作为对照品液，备用。
２．２　供试品溶液的制备　取乌头属各植物中粉约
０．２０ｇ，精密称定，置三角瓶中，精密加入ｐＨ　３．０的
醋酸盐缓冲液２０ｍＬ，浸泡过夜，用干燥滤纸滤过，
取滤液１０ｍＬ，加入１０ｍＬ　ｐＨ　５．４的溴甲酚绿染
料溶液，充分振摇，静置１０ｍｉｎ，用三氯甲烷提取３
次（１０、１０、５ｍＬ），三氯甲烷层过滤于２５ｍＬ容量瓶
中，并用三氯甲烷液稀释至刻度，备用。
２．３　测定波长的选择　取对照品溶液、供试品溶液
２ｍＬ分别置于不同的分液漏斗中，加ｐＨ（３．０±
０．１）的醋酸－醋酸钠缓冲液 ８ ｍＬ，取三氯甲烷
１０ｍＬ置于另一个分液漏斗中作为空白对照。在
３个分液漏斗中均加入１０ｍＬ　ｐＨ（５．４±０．１）的溴
甲酚绿染料溶液，振荡５ｍｉｎ，静置１０ｍｉｎ，用三氯
４９１ 新 疆 医 科 大 学 学 报 第３５卷　
甲烷提取３次，每次１０ｍＬ，合并三氯甲烷层，用干
燥滤纸滤过于２５ｍＬ量瓶中，并用三氯甲烷稀释至
刻度。于１９０～６００ｎｍ处进行波长扫描。结果表
明，对照品溶液、供试品溶液在２５２、３２１、４１５ｎｍ处
均有较大吸收，其中在２５２ｎｍ处有最大吸收，但空
白溶液在２００～３００ｎｍ处也有吸收，因此在２５２ｎｍ
处对测定有干扰，而在可见光区空白溶液没有吸收，
故选择４１５ｎｍ作为检测波长。
２．４　标准曲线的制备　精密称取乌头碱对照品液
３、４、５、６、７ｍＬ分别置于不同的分液漏斗中，加ｐＨ
３．０的醋酸－醋酸钠缓冲液至１０ｍＬ，取三氯甲烷
１０ｍＬ置于另一个分液漏斗中作为空白对照。在６
个分液漏斗中均加入１０ｍＬ　ｐＨ（５．４±０．１）的溴甲
酚绿染料溶液，振荡５ｍｉｎ，静置１０ｍｉｎ，用三氯甲
烷提取３次（１０、１０、５ｍＬ），合并三氯甲烷层，用干
燥滤纸滤过于２５ｍＬ量瓶中，并用三氯甲烷稀释至
刻度。在４１５ｎｍ处测定吸光度，以乌头碱对照品
的质量浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲
线，并进行线性回归，得回归方程为：Ｙ＝２１．４０３　Ｘ
＋０．００３　５，ｒ＝０．９９９　１。实验结果表明：乌头碱在
１１．７６～２７．４４ｍｇ／ｍＬ范围内呈现良好的线性关系
（表２），标准曲线图见图１。
表２　乌头碱线性关系考察
编号 取样量／ｍＬ 浓度／（ｍｇ·ｍＬ－１） 吸光度
１　 ３　 ０．０１１７　６　 ０．２５４
２　 ４　 ０．０１５６　８　 ０．３４０
３　 ５　 ０．０１９６　０　 ０．４２４
４　 ６　 ０．０２３５　２　 ０．４９８
５　 ７　 ０．０２７４　４　 ０．５９６
２．５　稳定性试验　取供试品溶液，按照标准曲线制
备项下方法进行操作，测定吸光度值，１次／ｈ。结果
４ｈ内测定结果稳定，ＲＳＤ为１．２７％ （ｎ＝６）。
２．６　精密度实验　精密吸取对照品溶液６份，每份
３ｍＬ，按照标准曲线的制备项下方法进行操作，测
定吸光度，结果ＲＳＤ为０．９９％ （ｎ＝６）。
２．７　重复性试验　取同一批次的药材样品，平行取
样６份制备供试品溶液，按标准曲线制备项下方法
测定，得以乌头碱计的总生物碱平 均 含 量 为
１．３５８％，ＲＳＤ为１．３７％ （ｎ＝６）。
图１　标准曲线图
２．８　加样回收率实验　精密称取一定量的新疆乌
头属药材，精密加入一定量的乌头碱对照品，按以上
供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，依标准曲
线的制备项下的方法进行测定吸光度，计算平均回
收率为１００．８９％，ＲＳＤ为１．８２％。
２．９　样品测定　取新疆乌头属药材供试品溶液，按
照标准曲线的制备方法进行操作，测定吸光度，计算
总生物碱含量，结果见表３。
３　讨论
３．１　ｐＨ的影响　ｐＨ值是影响本实验测定结果准
确与否的重要因素。缓冲溶液在维持供试品溶液制
备过程中ｐＨ值的稳定性起到重要的作用。因此，
实验所使用的缓冲溶液配制必须严格、准确。实验
中对ｐＨ　３．０、４．４及６．０这３种醋酸盐缓冲液分别
进行了考察，其中ｐＨ　４．４及６．０的醋酸盐缓冲液
空白呈色较深且不稳定，而ｐＨ　３．０醋酸盐缓冲液
空白稳定，重现性较好。
３．２　染料的影响　本实验考察了溴甲酚绿和溴麝
香草酚蓝，其中溴甲酚绿呈色稳定，重现性较好，故
本实验选用溴甲酚绿作为染料。
本文对新疆东疆地区、伊犁地区和乌鲁木齐周
边地区的乌头属药用植物实地调查，共发现有５种
乌头属植物，其中以新疆伊犁不同地区分布的白喉
乌头和准噶尔乌头较多，且总生物碱含量平均值分
别为０．２３６％和０．２３８％，均符合《中国药典》中收载
的草乌药材的生物碱含量规定，值得进一步合理开
发利用。空茎乌头虽然生物碱含量较高，但仅于伊
５９１　第２期 刘淑敏等：分光光度法测定新疆乌头属植物总生物碱的含量
犁特克斯地区发现一株，其他地区未见有分布，数
据不具有代表性。由于新疆地域广阔，针对新疆
其他地区的乌头属植物的资源调查也有待于进一
步研究。
表３　新疆乌头属植物含量测定
序号 编号 吸光度 浓度／（ｍｇ·ｍＬ－１） 含量／（ｍｇ·ｇ－１） 含量／％ 平均值／％
１ 尼勒克白喉乌头 ０．４７８　 ０．０２２　２　 ２．２１０　 ０．２２１　 ０．２３６
２ 特克斯白喉乌头 ０．６０６　 ０．０２８　１　 ２．８００　 ０．２８０
３ 新源白喉乌头 ０．４４７　 ０．０２０　７　 ２．０６４　 ０．２０６
４ 尼勒克准噶尔乌头 ０．５０３　 ０．０２３　４　 ２．３２０　 ０．２３２　 ０．２３８
５ 尼勒克准噶尔乌头 ０．６２９　 ０．０２９　２　 ２．９０７　 ０．２９１
６ 巩留准噶尔乌头 ０．４６８　 ０．０２１　７　 ２．１６１　 ０．２１６
７ 新源准噶尔乌头 ０．４５８　 ０．０２１　３　 ２．１１５　 ０．２１２
８ 特克斯林地乌头 ０．４３４　 ０．０２０　１　 ２．００３　 ０．２００　 ０．２０１
９ 南山林地乌头 ０．４３７　 ０．０２０　３　 ２．０１８　 ０．２０２
１０ 塔城托里伊犁乌头 ０．４３８　 ０．０２０　３　 ２．０２２　 ０．２０２　 ０．２０２
１１ 巴里坤松树塘伊犁乌头 ０．４３６　 ０．０２０　２　 ２．０１３　 ０．２０１
１２ 特克斯空茎乌头 ０．７６７　 ０．０３５　６　 ３．５５０　 ０．３５５　 ０．３５５
１３ 草乌 ０．４５９　 ０．０２１３　 ２．１２０　 ０．２１２　 ０．２１２
参考文献：
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学报：自然科学版，２００５，２４（１）：１５－１７．
［５］　新疆生物土壤沙漠研究所．新疆药用植物志：第一册［Ｍ］．乌鲁
木齐：新疆人民出版社，１９７７：１６－１７．
［６］　新疆植物志编辑委员会．新疆植物志：第一卷，第二册［Ｍ］．乌
鲁木齐：新疆科技卫生出版社，１９９９：１２１－１２３．
［收稿日期：２０１１－０８－１１

］
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　　本试验采用单因素试验及正交设计试验，最终
确定１２倍量水，回流提取３次，每次１．５ｈ的方法
为最优工艺。验证试验结果表明优选得到的参浮益
气固表浓缩丸水提工艺简易、稳定、可行，为工业化
生产提供了一定的依据。
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［８］　国家药典委员会．中华人民共和国药典（一部）［Ｍ］．北京：化
学工业出版社，２０１０：４８１－４８２．
［收稿日期：２０１１－０８－１２］
６９１ 新 疆 医 科 大 学 学 报 第３５卷