全 文 ：下降 ,细胞内的 Na+浓度升高 , 后者又激活细胞膜上 Na+-Ca2+
交换蛋白 , 使细胞内 Ca2+内流增加;Ca2+-ATP 酶活性下降 , 胞
内Ca2+泵出减少 , 胞内 Ca2+超载。 Ca2+是心肌细胞中许多重
要的信号传导通路的调节因子 ,胞内 Ca2+超载则可激活心肌细
胞的信号传导通路 ,导致心肌肥厚的发生[ 9 , 10] 。用 ISO 连续皮
下注射 , 可引起大鼠左心室心肌组织 NO 水平下降 , Na+ , K+-
ATP酶和 Ca2+-ATP酶活性降低 , 心肌肥厚增大。应用 PNS 治
疗后 ,可显著提高 NO水平 , 提高 Na+, K+-ATP 酶和Ca2+-ATP
酶活性 ,抑制心肌肥厚。
　　本实验提示 , PNS 可能通过抑制心肌局部 AngI I的产生 , 改
善 ATP 酶的活力 ,抑制细胞内 Ca2+超载 , 提高心肌组织中 NO
水平 ,抑制心肌胶原增生 、心肌肥厚和心脏重构 , 从而对 ISO 所
致的心肌肥厚具有保护作用。
参考文献
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Protective effects of Total Saponins of Panax notoginseng on
myocardial hypertrophy induced by isoproterenol in rats
Zhou Qing 1 , He Wei2 , Zhou Li1 , Lian Qisheng2
(1 Department of O rganic Experiment , 2Depar tment of Pharmacolo gy , Gannan Medical College , Ganzhou　341000)
　　Objective:To investigate the pro tective effects of to tal saponins of panax no toginseng(PNS)on myocardial hypertrophy induced by
isopro terenol(I SO)in rats.Methods:Myocardial hyper trophy model of rats were induced by injection of ISO 5mg/kg·d sc fo r 7d.F rom
day 2 , the rat were administered with PNS 25 and 50mg/ kg·d ip for 14d , the control and ISO model g roup w ere receiv ed saline injection.
Then , the heart-weight(HW), left ventricular weight(LVW), the ratio of HW/ BW and LVW/BW(LVI)were measured;the content
of hydroxyproline and angio tensin (AngI I), the level of nitric oxide(NO)and the activity of Na+, K+-ATPase and Ca2+-ATPase in left
v entricle were determined by spectropho tometry and radioimmunoassay respectively.Results:In ISO model g roup , HW/ BW , LVI and the
content of hydroxyproline and AngI I in left ventricle markedly increased;the level of NO and the activity of Na+ , K +-ATPase , Ca2+-AT-
Pase in the left ventricle w ere decreased.T reatment w ith PNS significantly reduced the HW/BW , LVI , decreased the Ang II and the hy-
droxyproline content , increased the level of NO and the activity of Na+, K +-ATPase and Ca2+-ATPase.Conclusion:PNS was shown to
prevent remodeling of myocardial hypertrophy induced by ISO in rats.
Key words　Total Saponins of Panax notoginseng;isoproterenol;myocardial hyper trophy
铁筷子多糖对 S180细胞周期及增殖能力的影响
刘维英1 ,潘兴斌 ,刘　昕
(1兰州大学第一医院;兰州大学基础医学院病理生理研究室 ,兰州　730000)
　　摘　要　目的:观察铁筷子多糖(HFPS)对体外培养的 S180细胞增殖能力及对细胞周期的影响。方法:建立 S180体外细胞培养
体系 ,用 M TT 比色法在 12h 、24h 、36h 、48h 时间点观察从 1 ～ 8g/ L 4个倍数浓度的 HFPS 对 S180细胞体外增殖的影响;用流式细胞
计量术检测 1g/ L 浓度的 HFPS 在不同作用时间点对 S180细胞周期的影响。结果:HFPS 对体外培养 S180肉瘤细胞的抑制率在 1 ～
8g/ L 内呈剂量依赖性 ,其抑制作用在 24h最为明显 , 24h 点 1g/ L 、2g/ L、4g/ L、8g/ L的 HFPS 体外抑瘤率(%)分别为 8.5±1.55 、10.
29中药药理与临床 2005;21(4)
DOI :10.13412/j.cnki.zyy l.2005.04.015
2±1.78 、58.6±3.25、75.5±3.54。HFPS 作用后 S180细胞周期 G0-G1 百分比增高 , S 期百分比下降 , 细胞多被阻断在 G0-G1 期 , 尤
以 24h 点最为明显。
　　关键词　铁筷子多糖;S180;细胞增殖;细胞周期
　　实验表明铁筷子多糖(HFPS)能抑制小鼠体内移植瘤生
长[ 1 ～ 4] , 激发细胞免疫功能 , 刺激淋巴细胞增殖 , 增加 IL-2、
TNF-α、IFN-γ等细胞因子的含量 , 增加淋巴组织中的巨噬细胞
数量 ,并提高其吞噬功能等[ 5 , 6] ;还能增加循环中的超氧化物岐
化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性 , 降低脂质过
氧化产物丙二醛(MDA)含量。
1　材料与方法
1.1　试验药物　HFPS 同前报[ 1 ～ 6] 。
1.2　抑瘤实验　体外细胞增殖能力测定:用 M TT 法。每孔
103 ～ 104个细胞接种于 96 孔培养板中 , 每孔体积 200μl , 分别加
入不同浓度(1g/ L、2g/ L、4g/ L、8g/ L)的实验药物(对照组用同
体积的生理盐水)。将培养板移入 CO 2 孵箱中 ,在 5% CO2 37℃
充分湿化条件下培养。分别在培养 8 小时 、20小时 、32 小时 、44
小时后每孔加入 MTT 溶液(5mg/ml , 10%)20μl , 37℃继续孵育
4 小时 , 1000rpm 离心 5 分钟然后弃去孔内培养液。每孔加入
150μl DMSO ,振荡 10min 使结晶充分溶解 ,在多功能酶联免疫
检测仪上测定光吸收值 , 测定波长为 490nm , 参考波长 630 ～
690nm , 测定各孔光吸收值 , 记录结果。共重复三批。
　　细胞存活率=试验组光吸收值/ 对照组光吸收值×100%
　　抑瘤率=1-细胞存活率
1.3　细胞周期检测　根据上述抑瘤实验结果 , 实验组 HFPS 采
用 1g/ L 及对照组(用同等剂量的生理盐水)细胞在培养 12h、
24h、36h及 48h 后分别离心收获 , 用 70%冷乙醇固定 24 小时 ,
后用 PBS 清洗除去乙醇 , 加 50μg/ ml PI 染液 1ml染色 30min ,
400 目网过滤后上流式细胞仪检测(美国 Coulter 公司 EPICS
XL型流式细胞仪)激发光 488nm , 发射光 585nm 测定 DNA 含
量 ,计算细胞周期各时相的百分比 , 按下列公式计算增殖指数 ,
以此衡量细胞的分裂活动:
　　PI+(S+G 2)/(G 0/G1+S+G 2/M)
2　结果
2.1　HFPS 对 S180细胞体外增殖能力的影响　HFPS 对体外培
养的 S180细胞增殖具有一定的抑制作用 , 在 1 ～ 8g/ L范围内呈
剂量依赖性;作用时间在 12 ～ 24 小时抑制率上升 ,但此后并未
延续这种趋势 , 36小时百分抑制率反而较 24 小时下降 , 48 小时
则更低;尤以小剂量的 HFPS(1g/ L、2g/ L)抑瘤率在 36 小时后
下降明显 , 1g/ L剂量组在 48 小时细胞存活率接近对照组(未用
药组), 抑瘤率近零 ,可能与药物半衰期有关 ,见表 1 、图 1。镜下
观察显示 ,对照组细胞的生长速度极快 , 在培养 24 小时集落形
成达高峰 ,镜下见细胞颗粒饱满 , 折光性强 , 表现了极大的生命
力。受 HFPS 作用的细胞生长速度明显受限 , 细胞大小不等 , 以
小细胞居多 ,胞膜皱缩 , 反光性差 ,集落形成率显著低于对照组。
　　表 1　HFPS 对 S 180细胞增殖的百分抑制率(%)( x ±s)
药物浓度
(g/ L)
作用时间(小时)
12 24 36 48
1 5.8±1.82 8.5±1.55 3.2±1.31 1.0±0.51
2 8.7±1.45 10.2±1.78 6.5±1.22 5.1±1.34
4 32.1±2.30 58.6±3.25 50.7±2.86 45.0±3.69
8 49.6±4.20 75.5±3.54 63.92±4.02 61.1±4.36
图 1　HFPS对体外培养细胞增殖能力影响曲线图
2.2　HFPS 对 S180细胞周期的影响　相同浓度 HFPS 作用于细
胞不同时间 ,药物作用四个时段与对照组相比 , G0-G1 期比例均
有升高趋势 , S 期比例下降 , 但两者只有在 24h 和 36h 有统计学
意义;G2-M 期比例无特定规律性 , 但在 24 小时下降明显;增殖
指数(PI)在 24h 及 36h 明显下降。HFPS 在不同的时间点对细
胞周期构成影响也有不同 ,以 24h 改变最为明显 , 与组内其他时
间点相比 , 24h G0-G1期比例上升 , G2-M 期 36h 百分比例下降 ,
但 S 期比例无明显差别。还可见在 24h 后 , 发生改变的各期比
例虽然渐有恢复 , 但 36h G0-G1 期 、S 期及 P I 与对照组相比有
显著差别;48h 时 S 期比例变化尚有统计学意义 , G0-G1、G2-M
比例及 PI 与对照组已无明显差别。综上所述 , HFPS 能使 S180
细胞周期 G1※S 转换受阻 ,细胞多被阻断在 G0+G1 期 , S 期比
例下降;而且药物在 24h作用最为明显 ,见表 2 ,图 2 、3 、4。
　　表 2　 药物对细胞周期构成比(%)的影响( x ±s , n=4)
作用时间
(小时)
对照组
G0-G1 S G2-M PI(%)
HFPS 组(浓度 1g/ L)
G0-G1 S G2-M PI(%)
12 22.80±3.60 54.30±5.46 22.68±2.99 76.98±3.35 28.45±3.68 50.30±5.11 21.25±2.88 71.55±3.68
24 20.05±3.20 64.53±4.18 15.25±3.71 79.78±2.99 43.55±4.40＊＊#45.35±5.43＊＊ 11.10±3.65＊# 56.45±3.40＊＊#
36 23.43±4.16 62.30±6.00 14.28±4.02 76.58±4.16 32.35±3.98＊ 46.19±6.93＊ 21.50±3.56 67.69±3.98＊＊
48 24.58±4.48 56.30±4.40 19.25±4.52 75.40±4.43 29.70±3.97 46.85±5.25＊ 23.45±3.15 70.30±3.97
　　与对照组相比 ＊P<0.05 , ＊＊ P<0.01;与用药组内其他时间点相比 #P<0.05
30 中药药理与临床 2005;21(4)
图 2　不同时间 HFPS 对细胞周期的影响
3　讨论
　　完整的细胞周期包括 DNA 合成前期(G1 期)、DNA合成期
(S 期)、DNA 合成后期(G2期)和有丝分裂期(M 期), 休眠期的
细胞(G0 期)。在真核细胞的一系列细胞周期检测点中 , G1/S
期检测点至关重要 , 细胞在该检测点对各类生长因子 、分裂原
以及 DNA 损伤等复杂的细胞内外信号进行整合和传递 , 决定
细胞是否进行分裂 、发生凋亡或是进入 G0 期 ,许多抗癌药物都
是通过抑制此关键点而起作用的[ 7] 。我们用流式细胞仪检测
HFPS作用后的S180细胞周期发现 , G0-G1百分比增高 , 细胞多
流式细胞仪下 S 180细胞培养 24h的DNA 含量(PI 染色)
图 3　对照组(未用药组)　　　　　　　　　　　　　　　　　　　图 4　HFPS 作用组
被阻断在 G0-G1期 , S 期百分比下降 ,可见 HFPS 可引起细胞周
期在特定点发生阻滞 , 但其分子机制并不明确。在本实验中 ,
药物作用24h 后 , 细胞周期的上述变化则不明显 , 甚至有恢复趋
势 ,其可能机理为 24h 后不再追加药物时 , 药物作用逐渐削弱 ,
处于G0-G1期的细胞 , 有机会进行损伤的 DNA 的修复 ,细胞的
分裂增殖能力再次增强;另外 , 损伤的细胞膜逐渐修复 , 暴露抗
原逐渐减少 ,细胞膜生化特性随之恢复 , 表现为 24h 后各周期百
分率渐接近于同期对照组;不能修复者则退出增殖周期 , 进入
凋亡阶段。此结果与 MTT 抑瘤实验结果相符。
　　本研究表明 ,HFPS 对 S180细胞多被阻断在 G0-G1 期 ,导致
细胞G1※S 期转换受阻 , S 期百分比下降 ,使得细胞 DNA合成 、
复制受到抑制 ,更多细胞的分裂循环过程被阻断 , 肿瘤细胞增
殖能力降低 ,此结果在体外 MTT 抑瘤实验中得到了证实。 可
见 ,HFPS 能通过影响细胞周期构成而改变肿瘤细胞特性。
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三七总皂苷对肝纤维化小鼠 TNFα及 IL-6活性的影响
余万桂 ,张恒文
(长江大学医学院 ,荆州　434000)
　　摘　要　目的:观察三七总皂苷对肝纤维化小鼠血清中 TNFα及 IL-6 活性的影响。方法:用 CCl4 复制小鼠中毒性肝纤维化
模型 , ELISA法测定血清 TNFα和 IL-6 , 并行肝脏病理检测。结果:三七总皂苷能减轻肝纤维化程度 , 降低肝纤维化小鼠血清中
TNFα和 IL-6 的水平。结论:三七总皂苷具有抗肝纤维化作用 , 其机理可能与降低血清中 TNFα和 IL-6 的水平有关。
　　关键词　三七总皂苷;肝纤维化;TNFα、IL-6
　　近年研究表明 , 活血化瘀中药可以逆转肝纤维化过程[ 1] 。 已有研究表明 , 三七总皂苷对四氯化碳(CCl4)诱发小鼠血清谷
31中药药理与临床 2005;21(4)