全 文 ：摘 要：建立了测定海南暗罗枝和叶中总三萜酸含量的方法. 以乌苏酸为对照品，以质量分
数5%香草醛-冰醋酸和高氯酸溶液系统为显色剂，采用紫外分光光度法在546 nm波长处测定样
品的吸光度. 乌苏酸对照品在 0.20~1.60 g·m L-1范围内呈良好线性关系，回归方程为 Y =
0.1548C+0.0286，r = 0.9993.海南暗罗枝和叶中的总三萜酸含量分别为0.72%和1.56%.本法操作
简便，结果可靠，重复性好，可用作海南暗罗中总三萜酸的含量测定.
关键词：海南暗罗；三萜酸；紫外分光光度法
中图分类号：R 284.1 文献标识码：A 文章编号：1674-4942（2010）04-0407-03
海南暗罗枝和叶中总三萜酸的含量测定
翟明君 1，刘冰晶 1，2，陈光英 1，2*，简 蓝 1，毕和平 1，2，鲍长余 1，2，孔杜林 1，2
（1.海海南师范大学 化学与化工学院，海南 海口 571158；
2.海南师范大学“省部共建-热带药用植物化学”教育部重点实验室，海南 海口 571158）
Abstract：A method for the determination of the total triterpenoidic acid in the stems and leaves of P. laui was estab⁃
lished. The total triterpenoidic acid in the stems and leaves of M. Paniculata Laui were determined by Ultraviolet Spec⁃
trophotometric method at 546 nm wavelength. The result showed a good linear relationship at the range of 0.20~1.60 μg·
m L-1, and the curve was Y = 0.1548 C +0.0286，r = 0. 9993. The content of stems was 0.72% and of leaves was 1.56%.
This spectrophotometric method is simple, reproducible and suitable for the determination of total triterpenoidic acid.
Key words:Polyalthia Laui；Triterpenoidic acid；Ultraviolet spectrophotometric method
Determination of the Content of Triterpenoidic
Acid in Stems and Leaves of Polyalthia laui
ZHAI Mingjun1，LIU Bingjing1，2，CHEN Guangying1，2*，JIAN Lan1，
BI Heping1，2，BAO Changyu1，2，KONG Dulin1，2
（1. College of Chemistry and Chemical Engineering，Hainan Normal University，Haikou 571158，China；
2. Key Laboratory of Tropical Medicinal Plant Chemistry of Ministry of Education，Hainan Normal University，
Haikou 571158，China）
收稿日期：2010-05-21
基金项目:海南省高校硕士研究生创新科研课题（Hxwsy2009-10）；国家大学生创新实验项目（101165815）
*通讯作者
海南暗罗（Polyalthia laui）隶属番荔枝科（An⁃
nonaceae）暗罗属（Polyalthia genus）植物，系海南岛
的特有种[1].国内外学者从暗罗属的20多种植物中
得到了多种萜类 [2-3]、生物碱 [4]等多种类型化合物.
三萜酸类化合物具有广泛的药理作用，如抗肿瘤、
保肝、解毒、抗衰老等作用 [5-7].目前未见海南暗罗
中总三萜酸的含量测定报道.药材中总三萜酸的测
定通常采用紫外分光光度法和高效液相色谱法
[8-9]. 本实验以乌苏酸为对照品，采用质量分数 5%
香草醛-冰醋酸和高氯酸溶液为显色系统，采用紫
外分光光度法测定海南暗罗枝中总三萜酸的含量，
为海南暗罗的进一步开发利用提供科学依据.
UV2600紫外可见分光光度计（上海国美科技
仪器有限公司）；EYEL4OSB-2100旋转蒸发仪（日
本，东京理化）.
95%乙醇，无水乙醇，香草醛，高氯酸，冰醋酸
1 仪器、试剂与材料
第23卷第4期 海南师范大学学报（自然科学版） Vol.23No.4
2010年12月 Journal of Hainan Normal University（Natural Science） Dec.2010
等均为国产分析纯，乌苏酸标准品购自上海顺勃生
物工程有限公司（纯度大于98.0%）.
海南暗罗采自海南省昌江县，经霸王岭自然保
护区陈庆工程师鉴定为番荔枝科暗罗属植物Poly⁃
althia laui，标本现存于海南师范大学省部共建-热
带药用植物化学教育部重点实验室.
2.1 对照品溶液制备
准确称取 105 ℃干燥至恒重的乌苏酸对照品
20.0 mg，置于 50 mL容量瓶中，加无水乙醇溶解并
稀释至刻度，摇匀，得浓度为0.400 g/L溶液，精确移
取溶液 2.5 mL，定容至 100 mL，得浓度为 0.01 g /L
的对照品溶液.
2.2 供试品溶液制备
将粉碎过的海南暗罗的枝和叶于50 ℃烘箱干
燥24 h，各准确称取2.00 g，分别用无水乙醇浸泡2
h，索式提取 8 h，提取液用TLC测定,至与浓H2SO4
不显紫色为止，提取液减压回收乙醇，放冷至室温，
用无水乙醇定容至 100 mL.枝和叶的提取液分别
准确吸取 5.0 mL和 2.5 mL于 100 mL容量瓶中，用
无水乙醇定容至刻度，摇匀，制得供试品溶液.
2.3 测定波长选择
取对照品溶液 5.0 mL，加质量分数为 5%香草
醛-冰醋酸0.2 mL和高氯酸0.8 mL显色后，进行全
波长扫描，随行空白对照.结果表明，对照品溶液在
546 nm处有最大吸收峰（见图1），故选择546 nm作
为样品测定的波长.
2.4 标准曲线绘制
准确吸取对照品溶液 0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，
1.2，1.6 mL分别置于 10 mL容量瓶中，沸水浴挥去
无水乙醇，冷却，加入 5%香草醛-冰醋酸溶液 0.2
mL，和高氯酸溶液0.8 mL，将容量瓶放人70℃水浴
中加热15 min，冷却至室温，用冰醋酸定容到刻度，
摇匀.在 546 nm波长处测定吸光度值A，随行进行
空白对照.以乌苏酸含量为横坐标，吸光度A为纵
坐标，作图得到标准曲线（见图 2），标准方程为Y=
0.1548C+0.0286，式中：C为浓度（μg·m L-1），Y为吸
收度值A.相关系数: r = 0.9993.
2.5 稳定性实验
取对照品和样品溶液各 5.0 mL，按照 2.4项下
方法进行，每隔 15 min测定一次，结果见表 1，RSD
值较小，分别为 3、7.4、1.07、1.51，表明本法在 1.5 h
内基本稳定.
2.6 精密度实验
取同一批样品液，进行 5次平行实验，测定含
量，结果见表 2,叶和枝的分别为RSD =1.07 %（n=
5）和RSD = 1.51%（n=5），精密度良好.
2.7 加样回收实验
准确量取 5份已知含量的海南暗罗叶和枝提
取液各 5.0 mL，准确加入一定量的的熊果酸对照
品，余下部分按 2.4项下方法操作，实验结果见表
3. 实验表明，叶提取物平均回收率 99.56%，RSD=
1.85%（n=5），枝提取物平均回收率100.76%，RSD=
1.95%（n=5）.
2.8 样品含量测定
准确量取各 3份海南暗罗叶和枝的样品溶液
5.0 mL于50.0 mL容量瓶中，沸水浴挥去无水乙醇，
冷却后加入5%香草醛-冰醋酸溶液1.0 mL，高氯酸
4.0 mL，容量瓶放人 70 ℃水浴中加热 15 min，冷却
2 方法与结果
0.30
0.25
0.20
0.15
0.10
0.05
0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.81.6
C（μg/mL）
A
408 海南师范大学学报（自然科学版） 2010年
图2 标准曲线图
Fig.2 Standard curve
0.35
0.30
0.25
0.20
0.10
0.15
0.05
0.00
吸
光
度
A
400 500 600 700 800
λ/nm
图1 对照品紫外可见吸收图
Fig.1 UV absorption spectrum of reference substations
至室温，用冰醋酸定容，摇匀，余下部分按 2.4项方
法操作.实验和计算结果见表 4，海南暗罗叶中总
三萜酸含量为 1.564%，RSD=0.12%（n=3），枝中总
三萜含量为0.717%，RSD= 0.21%（n=3）.
0/min 15/min 30 /min 45 /min 60 /min 75 /min 90 /min 平均值 RSD（%）溶液种类
吸光度（A）
对照品
叶提取物
枝提取物
0.1241
0.1497
0.1393
0.1284
0.1465
0.1425
0.1139
0.1481
0.1367
0.1248
0.1506
0.1386
0.1284
0.1471
0.1423
0.1214
0.1481
0.1386
0.1256
0.1509
0.1421
0.1238
0.1487
0.1400
3.74
1.07
1.51
表1 稳定性实验
Tab.1 Stability test
提取物 吸光度（A） 平均值 RSD（%）
叶提取物
枝提取物
0.1490
0.1369
0.1495
0.1396
0.1512
0.1412
0.1486
0.1397
0.1411
0.1421
0.1779
0.1399
2.369
1.265
表2 精密度实验
Tab.2 Precision test
提取物 样品中三萜酸含量（μg） 加入对照品量（μg） 测定量（μg） 回收率（%） 平均回收率（%） RSD（%）
叶
枝
782.3
778.9
792.2
776.7
794.3
715.2
724.3
719.3
722.6
711.4
500
500
500
500
500
500
500
500
500
500
1293.7
1284.5
1283.4
1287.1
1291.6
1201.6
1211.3
1244.6
1255.9
1184.3
101.37
96.53
99.32
101.598
99.02
98.88
98.94
102.08
102.72
97.76
99.56
100.76
1.85
1.95
表3 加样回收实验
Tab.3 Recovery test
样品 吸光度测定值 平均值 RSD（%） 总三萜含量（%） 平均值（%）
0.1498
0.1489
0.1489
0.1393
0.1389
0.1396
0.1503
0.1512
0.1519
0.1403
0.1396
0.1409
0.1487
0.1488
0.1493
0.1382
0.1411
0.1392
0.1496
0.1495
0.1500
0.1393
0.1398
0.1399
1.563
1.562
1.568
0.715
0.718
0.719
0.12
0.21
1.564
0.717
叶
枝
表4 样品测量结果
Tab.4 Determination results of samples
本文以无水乙醇作为溶剂，以香草醛-冰醋酸
和高氯酸溶液系统为显色剂，采用紫外分光光度法
测定总三萜酸，该法简便可靠，结果稳定，重复性
好. 本法与比色法[10]比较，减化了实验步骤，缩短了
实验时间. 本文测得海南暗罗枝和叶中总三萜酸含
量分别为0.717% 和1.564%，其中叶中总三萜酸含
量较多，为进一步开发利用海南暗罗提供了科学依
据.
参考文献:
[1]
[2]
3 讨论
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Choudhury M H, Mohammad A. Hossain Andmohammad
A. Rashid, Clerodane Diterpenoids from Polyalthia Iongi⁃
第4期 翟明君等：海南暗罗枝和叶中总三萜酸的含量测定 409
（下转第422页）
作用，对曲霉菌的抑制效果不明显.
A提取液（乙醇+冰醋酸提取）的抑菌效果好于
B（乙醇）提取液和C（正己烷）提取液.
pH值对竹叶提取物的抑菌效果有明显的影
响.酸性或中性条件下对细菌的抑菌效果好，碱性
条件下抑菌效果较差.
竹叶的A提取液（乙醇+冰醋酸提取）适合添加
到主要由细菌引起变质的食品中.
本研究为竹叶的开发利用提供实验数据，我国
竹叶资源丰富，若能大规模开发利用，将会带来巨
大经济效益和社会效益.
参考文献:
[1]
[2]
[3]
[4]
[5]
供试菌种 A号提取液 B号提取液 C号提取液
pH=5 pH=7 pH=8 pH=5 pH=7 pH=8 pH=5 pH=7 pH=8
大肠杆菌
枯草芽孢杆菌
金黄色葡萄球菌
根霉
曲霉
9.3
11.3
9.3
7.6
—
8.7
9.0
8.0
7.3
—
7.3
7.7
—
—
—
9.3
10.3
7.7
7.3
—
8.0
8.7
7.3
—
—
—
—
7.0
—
—
8.3
8.7
9.3
7.6
—
7.6
7.3
6.7
—
—
7.3
—
—
—
—
表2 竹叶提取液的pH对抑菌效果影响
Tab.2 Influence of pH on antimicrobial effects of extract of bamboo leaves
注 表中数字为抑菌圈直径mm，为3次重复的平均值，“—”表示效果不明显
大肠杆菌
枯草芽孢杆菌
金黄色葡萄球菌
根霉
曲霉
3.8
3.8
3.8
7.5
—
7.5
6.0
4.5
12.0
—
8.0
7.7
7.0
7.3
—
注 表中最小抑菌浓度为3次重复的平均值，“—”表示效
果不明显
供试菌种 A提取液 (％) B提取液 (％) C提取液 (％)
表3 竹叶提取液最小抑菌浓度(MIC)
Tab.3 The minimal inhibitory concentration (MIC) of
extract of bamboo leaves
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422 海南师范大学学报（自然科学版） 2010年