全 文 ：陈 亮，张润民，王玉全，等． 超声波辅助法提取柳叶蜡梅叶总黄酮工艺的优化［J］． 江苏农业科学，2012，40( 7) : 258 － 259．
超声波辅助法提取柳叶蜡梅叶总黄酮工艺的优化
陈 亮，张润民，王玉全，石玉坤，唐 瑶，毕淑峰
( 黄山学院，安徽黄山 245041)
摘要: 以柳叶蜡梅叶为原料，在单因素试验的基础上，以乙醇浓度、料液比、提取时间 3 因素进行正交试验，研究
超声波辅助法提取柳叶蜡梅叶总黄酮的提取工艺，并用分光光度法测定了提取液中总黄酮的含量。试验结果表明，柳
叶蜡梅叶中总黄酮提取最佳工艺条件为乙醇浓度 70%、料液比 1 g ∶ 25 mL、提取时间 35 min。在最佳工艺条件下，总
黄酮的得率为 2． 469%。
关键词: 柳叶蜡梅; 总黄酮; 提取; 超声波
中图分类号: TS201． 1 文献标志码: A 文章编号: 1002 － 1302( 2012) 07 － 0258 － 02
收稿日期: 2012 － 02 － 07
基金项目:黄山学院博士启动基金( 编号: 2012xkjq002 ) ; 黄山学院大
学生创新项目( 编号: 2012xdkj016) 。
作者简介:陈 亮( 1991—) ，男，安徽安庆人，本科，从事天然产物研
究。E － mail: ppkaclka@ sina． com。
通信作者:毕淑峰，博士，副教授，从事天然产物研究。E － mail: bsfhs
@ yahoo． cn。
柳叶蜡梅 ( Chimonanthus Salicifolicus Hu) 为蜡梅科蜡梅
属半常绿灌木，仅分布于安徽东南部、江西西北部、浙江中南
部等山区，为中国特有植物。用柳叶蜡梅叶制成的“香风茶”
具有祛风散寒的功效，对防治感冒、喉咙肿痛、肠胃不适、慢性
气管炎等有较好的疗效［1 － 2］。蜡梅属植物含有多种黄酮类成
分［3 － 5］，黄酮是植物中最重要的活性成分之一，具有抗氧化、
抗菌、抗病毒、抗肿瘤、抗衰老等药理作用，在食品工业中可用
作功能食品添加剂和天然抗氧化剂［6 － 7］。超声波提取操作简
便快捷，无需加热，提取率高速度快，是一种高效、低耗的绿色
提取技术，在植物总黄酮的提取中有着广泛应用［8 － 10］。本研
究用超声波法提取柳叶蜡梅总黄酮，以芦丁为评价依据、总黄
酮得率为指标，以超声时间、乙醇浓度、料液比为影响因素，利
用正交试验确定柳叶蜡梅叶总黄酮最佳提取工艺，为柳叶蜡
梅资源的开发和工业利用提供科学依据。
1 材料与方法
1． 1 材料
柳叶蜡梅叶采集于安徽省黄山市齐云山山区，60 ℃烘
干，粉碎，过筛，装瓶备用。
1． 2 试剂与仪器
亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠、无水乙醇、石油醚等均为分
析纯，芦丁为标准品。
J2F － 06A型索氏提取器、7200H 超声波清洗器、UV754
紫外可见分光光度计、电子天平、荣华 800 － 1 离心机等。
1． 3 方法
1． 3． 1 柳叶蜡梅叶总黄酮的提取 精确称取 1． 000 g 的柳
叶蜡梅粉末置于索氏脂肪提取器中，加适量的石油醚回流浸
提脱脂约 5 h至无色，取出包有样品的滤纸挥干，按一定料液
比加入一定浓度乙醇，在超声条件下提取一定时间，离心，取
上清液定容至 50 mL，待测。
1． 3． 2 标准曲线的绘制 精确称取 0． 0250 g 干燥的芦丁，
用 50%的乙醇溶解并定容至 100 mL，准确吸取 0、1． 0、2． 0、
3. 0、4． 0、5． 0 mL 芦丁液于 25 mL 容量瓶中，加入 5%亚硝酸
钠 1 mL，混匀，静置 6 min，加 10%硝酸铝 1 mL，混匀，静置
6 min，加 4%氢氧化钠 10 mL，用 50%乙醇定容，静置 15 min。
以试剂空白为对照于 510 nm波长测吸光值，以吸光值 A 为横
坐标、芦丁浓度 C为纵坐标绘制标准曲线，用最小二乘法进行
线性回归，得回归方程为: C =0． 078 9D －0． 000 6，r =0. 9997。
1． 3． 3 柳叶蜡梅叶总黄酮含量的测定 准确吸取黄酮提取液
1 mL于 25 mL容量瓶中，其余操作与标准曲线操作“1． 2． 2”
相同，将测得的吸光值代入回归方程得总黄酮提取液的浓度，
并计算总黄酮的提取量和得率。
总黄酮的提取量 m1 ( mg) = C × V1 × V2
总黄酮的得率 = m1 /m2 × 100%
式中: C为测得吸光值带入回归方程计算出的总黄酮浓度
( mg /mL) ，V1 为总黄酮提取液体积( mL) ，V2 为测量总黄酮含
量时的定容体积( mL) ，m2 为柳叶蜡梅叶样品重量( mg) 。
1． 3． 4 单因素试验 分别探讨提取时间、料液比和乙醇浓度
3 个因素 5 个水平对总黄酮得率的影响，每个试验处理做 3
个平行，取平均值。
1． 3． 5 正交试验 在单因素试验基础上，设计 3 因素 3 水平
L9 ( 3
3 ) 正交试验以确定最佳提取工艺，因素水平见表 1。
表 1 柳叶蜡梅叶总黄酮提取 L9 ( 33 )正交试验因素水平
水平
因素
A:乙醇浓度( % ) B:料液比( g /mL) C:提取时间( min)
1 60 1 ∶ 20 25
2 70 1 ∶ 25 30
3 80 1 ∶ 30 35
2 结果与分析
2． 1 单因素试验
2． 1． 1 乙醇浓度对总黄酮得率的影响 随着乙醇浓度的增
加，柳叶蜡梅叶总黄酮的得率先增大后减少，在 75%浓度时
—852— 江苏农业科学 2012 年第 40 卷第 7 期
DOI:10.15889/j.issn.1002-1302.2012.07.021
得率达到最大值( 图 1) 。因此，适当的增加提取剂中乙醇的
含量可以更多的溶出黄酮。但乙醇含量过高时，进入提取液
的醇溶性杂质增加，使总黄酮的得率降低。初步确定乙醇合
适浓度为 75%左右。
2． 1． 2 料液比对总黄酮得率的影响 料液比 ( g ∶ mL) 在
1 ∶ 10 ～ 1 ∶ 40 之间随着料液比增加，总黄酮得率逐渐增加，
但增加幅度逐渐减少，继续增加料液比时，总黄酮得率有少量
降低( 图 2) 。当料液比到达一定时，提取剂量足够，再增加料
液比和提取剂量对总黄酮得率的作用不大。料液比过大会增
加提取液的杂质量和造成溶剂的浪费，不利于后续总黄酮的
浓缩和纯化。1 ∶ 30 左右的料液比较合适。
2． 1． 3 提取时间对总黄酮得率的影响 随着超声提取时间
的增长，总黄酮的得率呈现先增加后下降的变化规律( 图 3) 。
20 ～ 40 min时，总黄酮得率先逐渐增加后快速增加，这是由于
超声对原料产生效果需要一定的时间，超声产生效果后会快
速增加总黄酮的得率。但超声时间过长会破坏某些黄酮类化
合物，使总黄酮的得率降低。超声提取时间不宜过长，以
30 min 左右比较合适。
2． 2 正交试验
在单因素试验基础上，在各因素的合适范围内设计 3 个
水平进行正交试验，正交试验结果见表 2。不同的工艺条件
总黄酮得率存在一定的差异，最高得率是最低得率的 1． 44
倍。极差分析结果可知，3 种因素对总黄酮得率的影响大小
顺序为 A ＞ B ＞ C，即乙醇浓度 ＞料液比 ＞提取时间。利用超
声波辅助法提取柳叶蜡梅叶黄酮的最佳工艺为 A2B2C3，即在
70%乙醇、1 g ∶ 25 mL料液比条件下超声提取 35 min时黄酮
得率最高，达 2． 469%。
表 2 柳叶蜡梅叶总黄酮提取 L9 ( 33 )正交试验结果
试验号 A:乙醇浓度 B:料液比 C:提取时间 黄酮得率( % )
1 1 1 1 2． 107
2 1 2 2 2． 156
3 1 3 3 2． 205
4 2 1 2 1． 909
5 2 2 3 2． 469
6 2 3 1 1． 854
7 3 1 3 1． 716
8 3 2 1 1． 974
9 3 3 2 1． 854
k1 2． 156 1． 911 1． 978
k2 2． 077 2． 199 2． 004
k3 1． 848 1． 971 2． 130
R 0． 308 0． 288 0． 152
3 结论
影响总黄酮提取得率因素大小顺序为乙醇浓度 A ＞料液
比 B ＞提取时间 C，提取工艺的最佳组合为 A2B2C3，在此条件
下，总黄酮的得率为 2． 469%。
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