全 文 ：收稿日期:2015 － 04 － 03
作者简介:邓一平(1989 －) ，女(汉族) ，重庆人，硕士研究生，E －mail niaoxuanhuajing@ 126． com;* 通讯作者:路金
才(1971 －) ，男(汉族) ，黑龙江绥化人，教授，博士，主要从事中药资源的研究与开发，Tel． 024 － 23986500，E －mail
jincailu@ 126． com。
文章编号:1006 － 2858(2016)01 － 0087 － 06 DOI:10． 14066 / j． cnki． cn21 － 1349 /r． 2016． 01． 016
不同采收期兴安升麻中 3 种酚酸类成分和
总酚酸的含量测定
邓一平1，李 乔2，秦汝兰1，张海强1，王 晶1，路金才1*
(1．沈阳药科大学 中药学院，辽宁 沈阳 110016;2．辽宁中医药大学附属医院 制剂中心，辽宁 沈阳 110032)
摘要:目的 测定不同采收期兴安升麻根茎与须根中咖啡酸、阿魏酸、异阿魏酸及总酚酸的含量，考
察不同采收期兴安升麻中酚酸类的含量变化。方法 咖啡酸、阿魏酸和异阿魏酸的含量测定采用
HPLC法。色谱柱为 Thermo C18(250 mm ×4． 6 mm，5 μm)柱，流动相为乙腈 －体积分数 0． 1%磷酸
水溶液，进行梯度洗脱，检测波长为 316 nm，进样量为 10 μL，流速为 1． 0 mL·min －1，柱温为 25 ℃。总酚
酸的含量测定采用紫外 －可见分光光度法，以咖啡酸为对照品，质量分数 0． 5%K3［Fe(CN)6］－质量分
数 1%FeCl3(体积比 1∶1)混合溶液为显色剂，在 745 nm波长处进行测定。结果 在每年 6 至 10 月不同
采收期的兴安升麻中，咖啡酸在须根中的含量较少甚至检测不到(0 ～ 0． 035%) ，在根茎中的质量
分数为 0． 018% ～ 0． 054%;阿魏酸在根茎与须根中的质量分数分别为 0． 014% ～ 0． 066% 和
0． 013% ～0． 141%;异阿魏酸在根茎与须根中的质量分数分别为 0． 069% ～ 0． 206%和 0． 167% ～
0． 785%。总酚酸的质量分数在 0． 87% ～ 4． 56%内。结论 兴安升麻中总酚酸与 3 种酚酸的含量在
不同采收期变化较大，总体上兴安升麻中酚酸类成分含量较高，具有较好的研究和开发价值。
关键词:兴安升麻;咖啡酸;阿魏酸;异阿魏酸;总酚酸;采收期
中图分类号:R 28 文献标志码:A
兴安升麻(Cimicifuga dahurica(Turcz．)Max-
im．)习称北升麻，为毛茛科升麻属多年生草本植
物，秋季采挖，主产于我国辽宁、黑龙江、河北和山
西等地［1］。其根茎是《中华人民共和国药典》
2010 年版收载的常用中药升麻的主要来源之一，
具有发表透疹、清热解毒和升举阳气的作用，常用
于治疗风热头痛、齿痛、口疮、麻疹不透和子宫脱
垂等［2］68。兴安升麻中主要含有三萜及其苷类，
酚酸类及其衍生物，此外还有少量色原酮，挥发油
及其他化合物［3］。《中华人民共和国药典》2010年
版中以酚酸类成分异阿魏酸质量分数不低于 0．
1%作为其质量评价指标［2］69。研究表明，升麻属
中普遍含有的阿魏酸与异阿魏酸具有解热、镇痛、
抗炎作用，可明显抑制乙酸引起的小鼠扭体反应，
而异阿魏酸的抗炎活性强于阿魏酸［4］。升麻根
茎中总酚酸以及咖啡酸、阿魏酸、异阿魏酸对抗氧
化都有显著正相关［5］。目前已有的分析报道多
集中在市售升麻药材及炮制品方面［6 － 8］，尚未查
阅到对升麻药材不同采收期中酚酸类成分含量变
化的研究报道。作者拟对不同采收期的兴安升麻
中 3 种酚酸类成分咖啡酸、阿魏酸、异阿魏酸以及总
酚酸的含量进行测定分析，以期为兴安升麻最佳采
收期的确定，规范化种植与采收提供参考依据。
1 仪器与材料
Agilent 1260 高效液相色谱仪(美国 Agilent
公司) ，BS124S 电子天平(北京赛多利斯仪器系
统有限公司) ，UV － 1700 紫外 －可见分光光度计
(日本 Shimadzu公司) ，DK －98 － 1 电热恒温水浴
锅(天津泰斯特仪器有限公司)。
咖啡酸、阿魏酸、异阿魏酸(实验室自制，经
结构鉴定质量分数 ＞ 98%) ，乙腈、甲醇(色谱纯，
天津康科德科技有限公司) ，磷酸(色谱纯，天津
科密欧化学试剂有限公司) ，纯净水(杭州娃哈哈
集团有限公司) ，乙醇(分析纯，美华医用酒精)，十
二烷基硫酸钠、铁氰化钾、三氯化铁(天津博迪化工
有限公司)，无水乙醇(天津富宇精细化工有限公
司)，盐酸(天津凯信化学工业有限公司)。
兴安升麻药材样品于 2014年 6至 10月期间采
自辽宁省宽甸同一地区，样品在采挖后洗净泥沙，晒
第 33 卷 第 1 期
2 0 1 6 年 1 月
沈 阳 药 科 大 学 学 报
Journal of Shenyang Pharmaceutical University
Vol． 33 No． 1
Jan． 2016 p． 87
干。经沈阳药科大学中药学院路金才教授鉴定为兴
安升麻(C． dahurica(Turcz．)Maxim．)。
2 方法与结果
2． 1 咖啡酸，阿魏酸和异阿魏酸的含量测定
2． 1． 1 色谱条件与系统适用性试验
色谱柱:Thermo C18 (250 mm × 4． 6 mm，
5 μm)柱;流动相:乙腈(A)－体积分数 0． 1%磷
酸水溶液(B) ，梯度洗脱;洗脱程序:0 ～ 40 min
13% ～24% A，40 ～ 45 min 24% ～ 45% A，45 ～
55 min 45% A;检测波长:316 nm;进样体积:
10 μL;流速:1． 0 mL·min －1;柱温:25 ℃。理论塔板
数按异阿魏酸峰计不低于 5 000，异阿魏酸与相邻色
谱峰分离度大于 1． 5。对照品和样品色谱图见图 1。
1—Caffeic acid;2—Ferulic acid;3—Isoferulic acid
Fig． 1 Chromatograms of reference substances(A)，rhizome(B)，and fibrous root(C)of C． dahurica(Turcz．)Maxim．
图 1 对照品(A)与兴安升麻根茎(B)、须根(C)的样品色谱图
2． 1． 2 对照溶液的制备
取咖啡酸、阿魏酸和异阿魏酸对照品适量，精
密称定，加入体积分数 70%乙醇溶液制成质量浓
度分别为 15、22 和 40 mg·L －1的对照溶液，摇匀，
即得。
2． 1． 3 供试溶液的制备
取样品粉末约 0． 5 g，精密称定，置具塞锥形
瓶中，精密加入体积分数 70%乙醇溶液 25 mL，密
塞，称定质量。加热回流 2． 5 h，放冷，再称定质
量，用体积分数 70%乙醇溶液补足减失的质量，
摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2． 1． 4 标准曲线的制备与线性关系考察
精密量取稀释至不同质量浓度的咖啡酸、阿
魏酸和异阿魏酸对照溶液，按“2． 1． 1”条色谱条
件进样分析，测定峰面积。以对照溶液质量浓度
(ρ，g·L －1)为横坐标，峰面积(A)为纵坐标，绘制
标准曲线，得到回归方程，结果见表 1。结果表明
咖啡酸、阿魏酸和异阿魏酸在各自的质量浓度范
围内线性关系良好。
2． 1． 5 精密度试验
精密吸取同一供试溶液，按“2． 1． 1”条色谱
条件连续进样 6 次，测定咖啡酸、阿魏酸和异阿魏
酸的峰面积，供试溶液中咖啡酸、阿魏酸和异阿魏
酸的峰面积 RSD 值分别为 0． 73%、0． 25%和 0．
18%，表明仪器精密度良好。
Table 1 Regression equations for caffeic acid，ferulic
acid and isoferulic acid
表 1 咖啡酸、阿魏酸和异阿魏酸的线性关系
Phenolic
acid
Regression
equation
r
ρlinear range /
(mg·L －1)
Caffeic acid A =5． 862 ×104ρ －9． 276 0． 999 8 1． 5 －15
Ferulic acid A =4． 798 ×104ρ －11． 78 0． 999 6 2． 2 －22
Isoferulic acid A =4． 654 ×104ρ －1． 123 0． 999 9 4． 0 －40
2． 1． 6 重复性试验
按“2． 1． 3”条方法平行制备 6 份同一样品的
供试溶液，按“2． 1． 1”条色谱条件进样分析，所得
咖啡酸、阿魏酸和异阿魏酸峰面积的 RSD值分别
为 1． 62%、1． 74% 和 1． 36%，表明方法重复性
良好。
2． 1． 7 稳定性试验
取同一供试溶液，室温下放置，按“2． 1． 1”条
色谱条件分别于 0、2、4、8、12 和 24 h 进样分析，
测得咖啡酸、阿魏酸和异阿魏酸在 24 h 内的峰面
积的 RSD 值分别为 0． 79%、0． 26% 和 0． 45%。
表明供试溶液室温放置 24 h内稳定。
2． 1． 8 加样回收率试验
取已知咖啡酸、阿魏酸和异阿魏酸含量的兴
安升麻药材样品 6 份，每份 0． 5 g，精密称定，置具
塞锥形瓶中。分别加入适量对照溶液，按“2． 1． 3”条
88 沈 阳 药 科 大 学 学 报 第 33 卷
方法制备样品溶液，并按“2． 1． 1”条色谱条件进样分 析。回收率结果见表 2，表明方法准确度良好。
Table 2 Results of recovery test of caffeic acid，ferulic acid，isoferulic acid of C． dahurica(Turcz．)Maxim．(n =6)
表 2 兴安升麻中咖啡酸、阿魏酸和异阿魏酸的加样回收率实验结果(n =6)
Component msample /mg madded /mg mfound /mg Recovery /% RSD /% 珋x /%
Caffeic acid 0． 131 0． 110 0． 240 99． 09 0． 93 99． 48
0． 127 0． 110 0． 237 99． 91
0． 129 0． 110 0． 238 99． 09
0． 130 0． 110 0． 241 100． 91
0． 129 0． 110 0． 237 98． 18
0． 127 0． 110 0． 237 99． 73
Ferulic Acid 0． 048 0． 090 0． 137 99． 56 1． 25 98． 74
0． 046 0． 090 0． 137 100． 78
0． 045 0． 090 0． 133 97． 88
0． 047 0． 090 0． 135 97． 42
0． 049 0． 090 0． 138 98． 56
0． 048 0． 090 0． 136 98． 23
Isoferulic acid 0． 458 0． 500 0． 970 102． 44 1． 37 100． 53
0． 475 0． 500 0． 979 100． 80
0． 461 0． 500 0． 968 101． 42
0． 475 0． 500 0． 970 99． 02
0． 464 0． 500 0． 967 100． 60
0． 475 0． 500 0． 970 98． 90
2 － isoferuloylpiscidic acid 3． 423 3． 500 7． 230 108． 77 2． 22 105． 56
3． 473 3． 500 7． 184 106． 01
3． 465 3． 500 7． 137 104． 91
3． 454 3． 500 7． 123 104． 83
3． 438 3． 500 7． 002 101． 83
3． 461 3． 500 7． 207 107． 03
2． 1． 9 样品含量测定
分别取 2014 年 6 至 10 月共 7 个批次采收期
兴安升麻根茎与须根样品，按“2． 1． 3”条方法制
备，按“2． 1． 1”条色谱条件测定，采用外标法计算
不同采收期兴安升麻中 3 种酚酸的含量。测定结
果见表 3。
Table 3 Content determination of caffeic acid，ferulic acid，isoferulic acid in C． dahurica(Turcz．)Maxim． from differ-
ent harvest time
表 3 不同采收期兴安升麻中咖啡酸、阿魏酸和异阿魏酸的含量
Harvesttime
w(caffeic acid)/%
Fibrous root Rhizome
w(ferulic acid)/%
Fibrous root Rhizome
w(isoferulic acid)/%
Fibrous root Rhizome
20140625 0． 015 0． 029 0． 036 0． 019 0． 741 0． 187
20140720 — 0． 024 0． 024 0． 015 0． 558 0． 206
20140810 0． 026 0． 034 0． 141 0． 066 0． 268 0． 079
20140830 — 0． 036 0． 056 0． 039 0． 785 0． 151
20140915 0． 035 0． 054 0． 123 0． 048 0． 167 0． 069
20141001 0． 012 0． 036 0． 015 0． 018 0． 242 0． 156
20141020 0． 013 0． 018 0． 013 0． 014 0． 245 0． 124
2． 2 总酚酸的含量测定
2． 2． 1 咖啡酸对照溶液的制备
取咖啡酸对照品 5 mg，精密称定，置于50 mL
棕色量瓶中，用体积分数 70%乙醇溶解并稀释至
刻度，摇匀，即得质量浓度为 100 mg·L －1的咖啡
酸对照溶液。
98第 1 期 邓一平等:不同采收期兴安升麻中 3 种酚酸类成分和总酚酸的含量测定
2． 2． 2 供试溶液的制备
取样品粉末 0． 5 g，精密称定，置 50 mL 具塞
锥形瓶中，加入体积分数 70%乙醇溶液 25 mL，密
塞，称定质量。加热回流 2． 5 h，放冷，再称定质量，
用 70%乙醇溶液补足减失的质量，摇匀，滤过，取续
滤液 1 mL，加入 70%乙醇溶液 10 mL，即得。
2． 2． 3 测定波长的选择
取咖啡酸对照溶液 0． 5 mL，供试溶液
0． 15 mL，分别置于 25 mL 棕色量瓶中，加无水乙
醇至5 mL，再分别加入质量分数 0． 3%十二烷基
硫酸钠溶液 2 mL，质量分数 0． 5%铁氰化钾 －质
量分数 1%三氯化铁(体积比 1∶ 1)混合液 2 mL，
摇匀，暗处放置 5 min，加 0． 1 mol·L －1盐酸溶液至
25 mL，摇匀，暗处放置 20 min，平行空白。参照
《中华人民共和国药典》2010 版一部附录紫外 －
分光光度法，平行空白，在 400 ～ 800 nm波长内测
定吸光度。结果表明:对照溶液与供试溶液吸收
光谱相似，在 745 nm 波长处有较大吸收，且对照
溶液与供试溶液显色前在此波长处无吸收，表明
兴安升麻供试品溶液所含成分对总酚酸的含量测
定无干扰，因此选取 745 nm 为测定波长，紫外扫
描图见图 2。
A—Caffeic acid before colouration;B—The sample before colouration;C—Caffeic acid after colouration;D—The sample after col-
ouration
Fig． 2 The ultraviolet spectrograms
图 2 紫外扫描图
2． 2． 4 标准曲线的制备与线性关系考察
精密吸取质量浓度为 100 mg·L －1咖啡酸对
照溶液 0． 2、0． 4、0． 6、0． 8、1． 0 和 1． 2 mL，置
25 mL棕色量瓶中，加无水乙醇至 5 mL，按“2． 2．
3”条方法显色。在 745 nm波长处测定吸光度，以
吸光度(A)为纵坐标，咖啡酸质量浓度(ρ，mg·L －1)
为横坐标，绘制标准曲线。回归方程为 A = 197． 2 ρ
+5． 800 ×10 －2，r =0． 999 4。表明咖啡酸质量浓度在
0． 8 ～4． 8 mg·L －1内线性关系良好。
2． 2． 5 精密度试验
精密吸取质量浓度 100 mg·L －1咖啡酸对照
溶液适量，置于 25 mL棕色量瓶中，按“2． 2． 3”条
方法显色，重复测定 6 次，计算吸光度的 RSD 为
0． 75%，表明仪器精密度良好。
2． 2． 6 重复性试验
取同一批药材粉末 0． 5 g，共 6 份，精密称定。
按“2． 2． 2”条方法平行制备 6 份供试溶液，各取
0． 15 mL，按“2． 2． 3”条方法显色和测定，计算吸
光度的 RSD为 1． 60%，表明方法的重复性良好。
2． 2． 7 稳定性试验
精密吸取质量浓度为 100 mg·L －1咖啡酸对照
溶液适量，按“2． 2． 3”条方法显色，分别在 15、20、30、
45和 60 min测定吸光度，计算吸光度的 RSD为 1．
82%，表明样品在 60 min内基本稳定。
2． 2． 8 加样回收率试验
取已知咖啡酸含量的同一兴安升麻样品
6 份，每份 0． 5 g，精密称定。分别精密加入咖啡
酸对照溶液适量，按“2． 2． 2”条方法制备供试溶
液。分别精密吸取上述供试溶液 0． 15 mL 置于
25 mL棕色量瓶中，按“2． 2． 3”条方法显色后，于
745 nm波长处测定吸光度，计算平均加样回收率为
100． 79%，RSD为 2． 83%，表明该方法回收率良好。
2． 2． 9 样品总酚酸含量测定
取不同采收期兴安升麻根茎与须根粉末
0． 5 g，精密称定，按“2． 2． 2”条方法制备供试溶
液。精密吸取上述供试溶液 1 mL 置 25 mL 棕色
量瓶中，按“2． 2． 3”条方法显色后，于 745 nm 波
长处测定其吸光度。计算不同采收期兴安升麻中
总酚酸的含量，结果见表 4。
根据上述不同采收期兴安升麻中 3 种酚酸及
总酚酸的含量测定结果，以采收期为横坐标，3 种
酚酸与总酚酸质量分数为纵坐标绘制曲线图，结
果见图 3。
3 讨论
a．《中华人民共和国药典》2010年版规定升
09 沈 阳 药 科 大 学 学 报 第 33 卷
Table 4 The determined content of total phenolic in
samples from different harvest time
表 4 不同采收期样品的总酚酸测定结果 %
Harvest time Rhizome Fibrous root
06 － 25 4． 11 3． 25
07 － 20 1． 78 1． 16
08 － 10 2． 12 0． 87
08 － 30 2． 97 2． 14
09 － 15 1． 98 1． 11
10 － 01 4． 30 4． 04
10 － 20 4． 56 3． 54
麻药材以根茎入药，其须根通常作为废弃物舍弃;
但在实验中发现兴安升麻须根与根茎有相似的色
谱图，须根中指标成分异阿魏酸含量明显高于根茎
(约 3倍左右)，且总酚酸含量与根茎相近。因此建
议考虑将须根入药，增加升麻资源的有效利用。
b．在所测定的 3 个酚酸中，兴安升麻根茎中
咖啡酸含量在 9 月中旬前呈增长趋势，9 月中旬
达到最大值后含量开始下降，质量分数为 0．
018% ～0． 054%。但在此批药材样品的须根中检
测到的咖啡酸含量较小或未检测到。阿魏酸在兴
安升麻根茎中质量分数为 0． 014% ～ 0． 066%，在
须根中质量分数为 0． 013% ～ 0． 141%。无论在
根茎与须根中，阿魏酸在 8 月与 9 月含量较高，此
时根茎中阿魏酸含量较其他月份高出约 2． 0 ～
3． 0倍左右。而须根中8、9月阿魏酸含量较其他月
●—Rhizome;■—Fibrous root
Fig． 3 Accumulations of caffeic acid(A)，ferulic acid(B)，isoferulic acid(C)and total phenolic acid(D)in C． dahurica
(Turcz．)Maxim． from different harvest time
图 3 不同采收期兴安升麻中咖啡酸(A)、阿魏酸(B)、异阿魏酸(C)与总酚酸(D)的曲线图
份最多可高出 10 倍。异阿魏酸在兴安升麻中含量
最高，根茎中异阿魏酸的质量分数在 0． 069% ～ 0．
206%内，须根质量分数在 0． 167% ～0． 785%内。异
阿魏酸在 8月中旬、9月中旬含量处于较低值，根茎
样品在此时未达到《中华人民共和国药典》规定标准
(异阿魏酸质量分数大于 0． 1%)。
c．阿魏酸与异阿魏酸为同分异构体，在不同
采收期兴安升麻的主根与须根中两者含量都呈现
相反的变化趋势。8、9 月阿魏酸含量较高时异阿
魏酸含量普遍较低，可能二者之间存在相互转换;
但两种酚酸的总含量在不同的采收期并不相同，
说明有其他成分也参与了成分的转化。
d．作者采用了经典的铁氰化钾 －三氯化铁显
色体系，首次对不同采收期兴安升麻的总酚酸进
行了测定分析。结果表明:辽宁宽甸不同采收期
兴安升麻根茎与须根中总酚酸含量较高但变化较
大，范围在 0． 87% ～ 4． 56%内。其总酚酸含量在
6 月与 10 月明显高于 7、8、9 月(兴安升麻的花期
与果期) ;但 8 月底(花期与果期的过渡期)异阿
魏酸与总酚酸都有含量增高的情况。由此推测兴
19第 1 期 邓一平等:不同采收期兴安升麻中 3 种酚酸类成分和总酚酸的含量测定
安升麻的根茎与须根可能是异阿魏酸等部分酚酸
的主要生合成器官，花期与果期时通过输导组织
将异阿魏酸等部分酚酸运输到各组织器官，所以
有生长过渡期异阿魏酸与总酚酸含量增高而果期
时又下降的情况。
e． 3 种酚酸类成分在不同采收期的兴安升麻
根茎与须根中含量变化并不一致，在实际生产中
可根据不同需要进行采收。咖啡酸与阿魏酸在
9 月中旬果期中含量较高，可在此时采收。而避
开花期果期，可得到异阿魏酸与总酚酸含量都较
高的升麻药材。
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Determination of three phenolic acids and total
phenolic acids in Cimicifuga dahurica (Turcz．)
Maxim． obtained at different harvest time
DENG Yi － ping1，LI Qiao2，QIN Ru － lan1，ZHANG Hai － qiang1，WANG Jing1，LU Jin － cai1*
(1． School of Traditional Chinese Medicine，Shenyang Pharmaceutical University，Shenyang 110016，China;
2． Preparation Center，Hospital of Liaoning University of Traditional Chinese Medicine，Shenyang 110032，China)
Abstract:Objective To determine the content of caffeic acid，ferulic acid，isoferulic acid and total phenolic
acids inrhizome and fibrous root of Cimicifuga dahurica(Turcz．)Maxim． obtained at different harvest times
to observe their dynamic changes．Methods A RP － HPLC method was established to determine the content
of caffeic acid，ferulic acid and isoferulic acid with Thermo C18 column(250 mm × 4． 6 mm，5 μm)by a
gradient elution using acetonitrile and 0． 1% phosphoric acid with the flow rate of 1． 0 mL·min －1 ． The oven
was set to 25 ℃ and the chromatograms were detected under 316 nm． Total phenolic acid was analyzed by
spectrophotometry at 745 nm with the reference substance of caffeic acid． The colour － developing agent was
the mixture solution of 0． 5% K3［Fe(CN)6］－ 1% FeCl3(V ∶ V = 1∶ 1)． Results The content of caffeic acid
in fibrous root of C． dahurica(Turcz．)Maxim． obtained from june to october was trace or not detectable(0
－ 0． 035%) ，and in rhizome it varied from 0． 018% to 0． 054% ． The content of ferulic acid was from 0．
014% to 0． 066% in rhizome，and from 0． 013% to 0． 141% in fibrous root． The content of isoferulic acid
from 0． 069% to 0． 206% in rhizome，and from 0． 167% to 0． 785% in fibrous root． The content of total phe-
nolic acids in rhizome varied from 0． 87% to 4． 56% ． Conclusions The content of three phenolic acids and
total phenolic acids in C． dahurica(Turcz．)Maxim． varied significantly with the time of harvest． Overall，the
content of phenolic acids in C． dahurica(Turcz．)Maxim． is relatively high，which indicate the high potential
value of Cimicifuga dahurica(Turcz．)Maxim． being developed into a product in future．
Key words:Cimicifuga dahurica(Turcz．)Maxim．;caffeic acid;ferulic acid;isoferulic acid;total phenolic
acids;harvest time
29 沈 阳 药 科 大 学 学 报 第 33 卷