全 文 ：［收稿日期］ 20120512(005)
［基金项目］ 2012 版山东省中药材标准及中药饮片炮制规范修订
［第一作者］ 李松涛，高级讲师，从事中药炮制与质量控制研究，Tel:0538-8941668，E-mail:yxant@ 163． com
［通讯作者］ * 张芳，博士，讲师，从事中药资源与质量控制研究，Tel:0531-89628081，E-mail:zfang_819@ 163． com
HPLC测定不同产地土元胡中原阿片碱含量
李松涛1，张芳2* ，杨洋3
( 1. 山东医药技师学院，山东 泰安 271016; 2. 山东中医药大学，济南 250335;
3. 济南市急救中心，济南 250013)
［摘要］ 目的:建立土元胡中原阿片碱的含量测定方法，并通过对不同产地土元胡中原阿片碱含量的分析，制定其含量
限量标准。方法:采用 HPLC 进行含量测定。Aglient TC-C18色谱柱(4. 6 mm × 250 mm，5 μm) ，乙腈-3%冰醋酸水溶液(含
0. 8%三乙胺) (18∶ 82)为流动相，流速 1. 0 mL·min －1，检测波长 289 nm。结果:原阿片碱在 0. 052 ～ 0. 52 μg 峰面积与进样量
线性关系良好，加样回收率平均值为 99. 44%，ＲSD 2. 69%。结论:建立了土元胡药材中原阿片碱的含量测定方法，方法准确、
简便、可行;不同产地或批次的土元胡中原阿片碱含量相差较大，变异范围在 0. 065% ～0. 199%，平均含量 0. 124%，建议控制
土元胡药材中原阿片碱的含量以不少于 0. 09%为宜。
［关键词］ 土元胡;不同产地;原阿片碱;高效液相色谱;含量测定
［中图分类号］ Ｒ284. 1 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2013)14-0139-03
［doi］ 10． 11653 /syfj2013140139
Content Determiniation of Protopine in Corydalis Ｒhizoma
from Different Origions
LI Song-tao1，ZHANG Fang2* ，YANG Yang3
(1. Shandong Medicine Technician College，Taian 271016，China;
2. Shandong University of Traditional Chinese Medicine，Jinan 250355，China;
3. Jinan Emergency Center，Jinan 250013，China)
［Abstract］ Objective:To establish a new method for determining the content of protopine in Corydalis
Ｒhizome，and set up the limitation standard of protopine through determining the content of the samples from
different origions． Method:HPLC method was used． The separation was performed on a Aglient TC-C18 column
(4. 6 mm × 250 mm，5 μm)with mobile phase of acetonitrile-3% glacial acetic acid solution (contain 0. 8%
triethylamine) (18 ∶ 82)． The flow rate was 1. 0 mL·min －1 and the detection wavelength was set at 289 nm．
Ｒesult:The calibration curves showed good linear regression within test ranges of 0. 052-0. 52 μg;the recovery
was 99. 44% ． Conclusion:The method established for determining the content of protopine in Corydalis rhizome
was accurate，simple and feasible． The content of protopine of the samples from different origions varied from
0. 065% to 0. 199% with the average content of 0. 124% ． It is suggested that the suitable content standard of
Corydalis rhizoma should be no less than 0. 09% ．
［Key words］ Corydalis Ｒhizoma;different origins;protopine;HPLC;content determination
土元胡收载于《山东省中药材标准》(2002 年 版)［1］，为罂粟科植物土元胡的干燥块茎，具有活血
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Vol． 19，No． 14
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散瘀、行气止痛之功效，为地方常用药材，主含原阿
片碱、L-四氢黄连碱、苏延胡索甲、苏延胡索乙等多
种生物碱。原标准中仅见对其性状及薄层色谱鉴别
的记载，而无含量测定检查项，查阅以往文献也未发
现对不同产地及批次的土元胡中生物碱含量进行分
析比较的报道。原阿片碱具有镇痛、解痉、改善微血
管循环、抗血小板聚集、扩血管等作用［2-3］，高效液
相色谱法是《中国药典》(2010 年版)［4］规定的中药
质量控制的主要手段，也是文献报道［5-10］的生物碱
类成分含量测定的主要方法，因此，本研究拟采用
HPLC 测定不同产地土元胡药材中原阿片碱的含
量，旨在为科学、全面的控制土元胡质量提供依据。
1 材料
Agilent 1200 型高效液相色谱仪(配 G1311A 四
元梯度泵、G1329B 自动进样器、G1314B 可变波长
紫外检测器和 ChemStation 色谱数据工作站，美国
Agilent公司)。CP114 型(1 /万)分析天平(上海奥
豪斯仪器有限公司)
原阿片碱(批号 110853-200402，购自中国药品
生物制品检定所)。甲醇、乙腈为色谱级，三乙胺、
磷酸等为分析级，水为重蒸水。
共收集到 9 批不同产地及批次的土元胡药材，
经山东中医药大学周凤琴教授鉴定，均为罂粟科植
物土元胡 Corydalis humosa Migo 的干燥块茎，药材
编号及产地见表 1。
表 1 土元胡产地及编号
No． 采收时间 批号 产地
1 2010-05-15 2010051501 泰安徂徕山 1 号
2 2010-05-21 2010052101 烟台昆嵛山
3 2010-05-17 2010051701 泰安泰山
4 2010-05-16 2010051601 泰安下港乡 1 号
5 2010-05-15 2010051502 泰安徂徕山 2 号
6 2010-05-18 2010051801 山东临沂
7 2010-05-18 2010051802 山东菏泽
8 2010-05-16 2010051602 泰安下港乡 2 号
9 2010-05-17 2010051702 泰安麻塔
2 方法与结果
2. 1 色谱条件 Aglient TC-C18色谱柱(4. 6 mm ×
250 mm，5 μm) ，流动相乙腈-三乙胺醋酸溶液(取三
乙胺 8 mL，冰醋酸 30 mL，加水稀释至 1 000 mL)
(18∶ 82) ，流速 1. 0 mL·min －1，检测波长 289 nm，柱
温室温，进样量 20 μL。
2. 2 样品溶液制备 对照品溶液:取原阿片碱对照
品 10. 4 mg，精密称定，置 50 mL 量瓶中，加 1%盐酸
溶液 5 mL使溶解，再加甲醇至刻度，摇匀，精密量取
5 mL，置 100 mL量瓶中，再加甲醇至刻度，摇匀，即得。
供试品溶液:取本品细粉(过 4 号筛)约 0. 5 g，
精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇 50 mL，
称定质量，加热回流 1 h，放冷，再称定质量，用甲醇
补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，以微孔滤膜
(0. 45 μm)滤过即得供试品溶液。
2. 3 检测波长的选择 取对照品溶液，加甲醇稀
释，摇匀，照紫外分光光度法(《中国药典》2010 年版
一部附录ⅤA) ，在 190 ～ 500 nm扫描，溶液在 289 nm
波长处有最大吸收，且峰形良好，故确定检测波长
289 nm。
2. 4 流动相的选择及系统适用性试验 参考药
典［2］夏天无项下测定方法，以乙腈-三乙胺醋酸溶液
(取三乙胺 8 mL，冰醋酸 30 mL，加水稀释至 1 000
mL) (18∶ 82)为流动相，照高效液相色谱法(《中国
药典》2010 年版一部附录 VI D)项下要求测定本品
中的原阿片碱。结果表明，供试品图谱中与对照品
对应位置的色谱峰分离较好，见图 1。
A. 对照品;B. 供试品;1. 原阿片碱
图 1 土元胡药材 HPLC
2. 5 线性关系考察 取原阿片碱对照品溶液，设置
进样体积分别为 5，10，20，30，40，50 μL，按 2. 1 项下
色谱条件进行测定，以峰面积(Y)对进样量(X)进
行回归，得原阿片碱线形回归方程为 Y = 614. 35X +
73. 5(r = 0. 999 1) ，线性范围 0. 052 ～ 0. 52 μg。
2. 6 精密度试验 将对照品溶液按 2. 1 项下色谱
条件进行测定，连续进样 6 次，吸收峰峰面积分别为
191. 3，188. 94，195. 82，193. 51，190. 92，191. 71，ＲSD
1. 23%(n =6)，表明精密度良好。
2. 7 稳定性实验 取同一供试品溶液，按 2. 1 项下
色谱条件分别于 0，1，2，3，4，8 h 进样，吸收峰面积
分别为 148. 09，148. 64，142. 32，140. 87，143. 54，
143. 16，ＲSD 2. 20%，表明样品溶液在 8 h 内基本
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稳定。
2. 8 重复性试验 精密称取 6 份同一样品，各约
0. 5 g，按 2. 2项下制备供试品溶液，按 2. 1 项下色谱
条件进行测定，计算含量，结果分别为 0. 082 5%，
0. 087 0%，0. 085 0%，0. 085 5%，0. 085 3%，0. 088 5%，
ＲSD 2. 34%，表明方法重复性良好。
2. 9 加样回收率试验 精密称取已知含量
(0. 085 6%)的样品 6 份，每份约 0. 25 g，分别精密
加入 0. 020 8 g·L －1的对照品溶液 10 mL，精密加入
甲醇 40 mL，称定质量，按 2. 2 项下供试品溶液制备
方法制备供试品，按 2. 1 项下色谱条件进行测定，计
算加样回收率，结果见表 2。
表 2 原阿片碱加样回收率的测定
No．
取样量
/ g
样品
含量
/mg
实测量
/mg
回收率
/%
平均
回收率
/%
ＲSD
/%
1 0. 255 6 0. 219 0. 420 96. 6
2 0. 252 5 0. 216 0. 422 99. 0
3 0. 261 1 0. 224 0. 436 101. 9
99. 44 2. 69
4 0. 265 0 0. 227 0. 432 98. 6
5 0. 252 5 0. 216 0. 431 103. 4
6 0. 248 5 0. 213 0. 415 97. 1
注:加入量均为 0. 208 mg。
2. 10 样品含量测定 取不同产地样品粉末 0. 5 g，
精密称定，按 2. 2 项下制备供试品溶液，按 2. 1 项下
色谱条件进行测定，进样量 20 μL，根据公式 m样 =
m标 × s样 / s标 计算出不同产地样品中原阿片碱的百
分含量。结果见表 3。
表 3 不同产地土元胡中原阿片碱素含量测定(n = 3) %
No． 批号 原阿片碱素 ＲSD
1 2010051501 0. 149 1. 99
2 2010052101 0. 154 2. 11
3 2010051701 0. 141 1. 65
4 2010051601 0. 199 2. 03
5 2010051502 0. 076 2. 22
6 2010051801 0. 095 1. 02
7 2010051802 0. 129 0. 86
8 2010051602 0. 065 2. 11
9 2010051702 0. 110 2. 62
3 讨论
研究发现，不通过产地或批次的土元胡样品中
原阿片碱的含量差异较大，变异范围为 0. 065% ～
0. 199%，含量最高者与含量最低者相差近 3 倍，含
量的差异可能与药材的产地、采收时间、加工方法的
不同有关，结果提示我们，土元胡药材生产过程中，
应遵循统一的、标准的操作规范，以保证土元胡药材
质量的稳定性和可控性。
9 批样品中原阿片碱平均含量 0. 124%，结合各
样品的含量及实际情况，建议可控制土元胡药材中
原阿片碱的含量以不少于 0. 09%为宜。
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［责任编辑 顾雪竹］
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