全 文 ：南方碱蓬叶总黄酮提取工艺研究
黄晓冬 ,朱加元 ,黄晓昆 ,陈洁芳 ,缪翠艳 (泉州师范学院教科院 泉州 362000)
摘要: 目的　单因素试验了不同体积分数的乙醇、料液比、提取温度及提取时间等因素对南方碱蓬叶总黄酮 ( L FSA)提取率的影响。方法　以
正交设计实验所得的最佳提取条件提取 LFSA,用聚酰胺吸附 -硝酸铝显色法测定其含量。结果　 LFSA的优化提取条件为 30倍原料重的 75%
乙醇溶液在 80℃条件下提取 30min,含量为 6. 35%。 结论　 LFSA的提取含量约为 6. 35%。
关键词: 南方碱蓬 ;总黄酮 ;提取工艺 ;测定
中图分类号: R284; R931. 77; Q949. 745. 1　文献标识码: A　文章编号: 1006-3765( 2007) 03-0030-04
Extraction of total flavonoids in suaeda australis leaves
HUANG Xiao -dong , ZHU Jia-yuan , HUANG Xiao-kun , CHEN Jie-fang , MIU Cui -yan (Institute of Educat ional
Science ,Quanzhou Normal College , Quanzhou 362000,China )
ABSTRACT: OBJECTIVE　 To investig ate the ex t raction and content of to tal f lav onoids in Suaeda australis
leav es ( LFSA) . METHODS　 The effects on the ext raction rate of dif ferent concentration ethanol, ratio of
ma terial to liquid, ex traction temperature and time w ere studied, respectiv ely. LFSA ex tracted by the optimum
ex traction conditions from the orthogonal experiment , purified by polycaprolactan and produced color w ith Al
( NO3 ) 3 , and the content of to tal f lav onoids w as measured. RESULTS　 The optimum conditions of ex t raction
w ere as follows: ratio of material to 75% ethanol was 1: 30, ext raction temperature w as 80℃ , ext raction time
w as 30minuter. CONCLUSION　 The content of LFSA was about 6. 35% .
KEY WORDS: Suaeda australis; Total flavonoids; Ex t raction; Mensurate.
　　 南方碱蓬 Suaeda australis ( R. Br. ) Moq.系藜科碱蓬属
的多年生草本〔1〕 ,是中高盐性盐生植物的一种。碱蓬属的植物
富含多种营养成分 ,在食用油、生产蛋白饲料等方面有良好的
应用价值 ,被认为是海洋农业的作物化植物资源〔2, 3〕 ,近几年
来在作物种植培育已有不少的研究成果〔4～ 6〕 ,而有关碱蓬属
植物药用化学成分的研究鲜见报道 ,这对于开发高附加值的
碱蓬加工产品是不利的〔3〕。 黄酮类化合物是一类广泛存在于
植物体内的天然产物 ,因具有抗病毒、抗癌、抗氧化、抗炎、抗
衰老等生理和药理活性 ,而成为国内外研究的热点课题。 高
健〔7〕发现盐地碱蓬 ( S. salsa )叶具有较高含量的总黄酮、并有
较强的抗氧化活性。与盐地碱蓬等不同 ,南方碱蓬主要分布在
我国南部滨海的滩涂沙地、红树林林缘 ,资源丰富 ,其叶可食
用与饲用 ,近年来由于滩涂养殖的发展 ,常被视为杂草以闲置
或根除 ,探讨该植物体黄酮类化合物含量与提取工艺 ,将为该
海洋盐生植物的药用开发与食品保健利用提供科学依据。
1　材料与方法
1. 1　仪器与药品　 752型紫外-可见分光光度计 (上海光谱
仪器有限公司 )、索式提取器、 G4砂芯漏斗、聚酰胺粉 ( 100～
200目 ,经 70%酒精预处理 ) , 0. 1mg· m L- 1芦丁标准液等。
1. 2　材料　阴干、粉碎、过 80目筛的南方碱蓬 (于 6月份采
作者简介:黄晓冬 ,男 ( 1973— )。 毕业于福建师范大学生物工程学院。
职称:教师。 联系电话: 13123130094
基金项目:福建省教育厅科技项目 ( JA06018)资助
自泉州东海滩涂 )叶粉末。
1. 3　方法
1. 3. 1　芦丁标准曲线 : 精确吸取 0. 1mg· m L- 1的芦丁标准
液 0、 1. 0、 2. 0、 3. 0、 4. 0、 5. 0 m L于 6只具塞试管中 ,各加
60%乙醇使成 5mL ,加 5% NaNO2溶液 0. 3m L,摇匀 ,放置
6min;加 10% Al ( NO3 ) 3溶液 0. 3mL ,摇匀 ,放置 6min;加
1mol· L- 1 NaOH溶液 4mL ,加蒸馏水 0. 4m L,摇匀 ,放置
15min,于 510nm波长下测定吸光度〔8〕 ,以吸光度对标样含量
mg数作图。
1. 3. 2　总黄酮提取与测定方法: 提取 精确称取叶粉末
1. 000g ,置于锥形瓶中 ,用一定体积分数的乙醇水浴加热提
取 ,抽滤去残渣 ,定容至 50m L,用石油醚萃取 4次 ,脱去叶绿
素、腊质和长链烷基酚酸等脂溶性杂质。
聚酰胺层离　准确吸取滤液 5m L,加入 300mg聚酰胺 ,
搅匀 ,转移到铺有 300mg聚酰胺的砂芯漏斗中 ,用 60%乙醇
洗脱数次 ,至洗脱液无黄酮反应为止 ,合并洗脱液 ,浓缩 ,以
60%乙醇定容至 50m L。
样液测定　精确吸取样液 5mL于具塞试管中 ,加 5%
NaNO2溶液 0. 3m L,摇匀 ,放置 6min,加 10% Al( NO3 ) 3溶
液 0. 3m L,摇匀 ,放置 6min,加 1mol· L- 1 NaOH溶液 4m L,
再加水 0. 4mL补足至 10m L,摇匀 ,放置 10～ 15min,同时作
试剂空白 ,以试剂空白为对照 ,于 510nm波长处测定吸光度 ,
代入标准曲线的回归方程 ,即求得所取样液中黄酮含量 C。
计算总黄酮提取率或含量　总黄酮提取率或含量 (以芦
·30·
海峡药学　 2007年　第 19卷 第 3期
丁计 ) (% DW)= CV1V 3 /WV 2V4× 1 /10。式中 C: 样液含总黄
酮量 ( mg ) ; V1:提取定容体积 ( m L) ; V2: 聚酰胺处理时取样体
积 ( mL ); V3: 聚酰胺处理后定容体积 ( m L) ; V4:显色反应测定
取用样液体积 ( mL ); W:称样量 ( g )。
1. 3. 3　总黄酮提取工艺: ( 1)提取条件的单因素试验: 乙醇
体积分数对总黄酮提取率的影响 分别精确称取 7份 1. 000g
叶粉末 ,分别用蒸馏水 , 25% 、 30% 、 45% 、 60% 、 75% 、 90%乙
醇 50m L水浴 50℃加热 30min,抽滤、定容、石油醚萃取、聚酰
胺层离 ,硝酸铝显色法测 A510。提取剂用量对总黄酮提取率
的影响 分别精确称取 7份 1. 000g叶粉末 ,分别用 20m L、
30m L、 40mL、 50m L、 60m L、 70mL、 80m L体积分数为 75%的
乙醇水浴 50℃加热 30min,抽滤、定容、石油醚萃取、聚酰胺层
离 ,硝酸铝显色法测 A510。提取温度对总黄酮提取率的影响
分别精确称取 7份 1. 000g叶粉末 ,各加体积分数 75%的乙
醇 50mL ,分别于 30℃、 40℃、 50℃、 60℃、 70℃、 80℃、 90℃水
浴加热 30min,抽滤、定容、石油醚萃取 、聚酰胺层离 ,硝酸铝
显色法测 A510。提取时间对总黄酮提取率的影响 分别精确称
取 7份 1. 000g叶粉末 ,各加体积分数 75%的乙醇 50m L,水
浴 50℃加 热 5min、 10min、 15min、 20min、 30min、 40min、
50min,抽滤、定容、石油醚萃取、聚酰胺层离 ,硝酸铝显色法测
A510。 ( 2)提取条件的正交优选 : 根据单因素试验与分析结
果 ,以提取剂浓度、提取时间、提取温度、料液比 4个因素 ,选
择有利于节约成本或降低能耗或能提高提取率的 3个水平 ,
按 L9 ( 34 )正交设计与实验 ,并对结果进行方差分析和显著性
检验 ,求得较优或最优的试验条件。
1. 3. 4　总黄酮含量测定: 以正交优选的最佳条件 ,提取总黄
酮 ,按 1. 3. 2方法测定的南方碱蓬叶总黄酮 ( LFSA)含量 ,进
行精密度试验 ,显色稳定性试验与回收率试验。
2　结果与分析
2. 1　芦丁标准曲线绘制　以吸光度对每 10m L试液芦丁标
准品质量 ( mg )作图 ,线性回归方程为 Y= 0. 84285X -
0. 0004,线性范围 0～ 0. 5mg /10mL ,相关系数 r= 0. 9987(见
图 1)。
图 1　芦丁标准曲线
2. 2　单因素试验与分析
2. 2. 1　乙醇体积分数对 LFSA提取率的影响: 图 2表明 ,水
可以提取一定量的 LFSA,随乙醇体积分数的增加 , LFSA提
取率渐渐增加 ,在乙醇体积分数达 45%左右提取率最高 ,而
后随体积分数增加而呈现下降趋势。但是 ,由于水与较低体积
分数的乙醇易大量溶出一些无机盐、蛋白质、糖类和果胶等杂
质 ,使黄酮类化合物的分离带来困难 ;过高体积分数的乙醇则
使弱极性成分、色素等溶出渐渐增加 ,这些成分与黄酮类化合
物竞争同乙醇 - 水分子结合 ,从而导致黄酮类化合物的提取
量下降〔9〕。因而 , 45% ～ 75%可以视为 LFSA提取剂体积分数
的适宜范围。 一般来说 ,水与低浓度乙醇适于提取黄酮苷类 ,
高浓度乙醇适于提取黄酮苷元类〔10〕 ,乙醇体积分数对 LFSA
提取率的影响说明了 LFSA可能含有较多的黄酮苷类 ,而黄
酮苷元类相对较少。
2. 2. 2　提取剂用量对 LFSA提取率的影响: 黄酮类溶出的
过程实质上是固相传递至液相的传质过程 ,用扩散理论解释 ,
就是溶质从高浓度区向低浓度区溶出的过程〔11〕。 一般说 ,提
取剂用量增大可降低了溶剂浓度 ,使两相浓度差增大 ,从而增
加总黄酮提取率 , LFSA提取率在提取溶剂用量 20～ 40mL
即料液比 1∶ 20～ 40范围内提取率增加体现了这种趋势 (图
3)。 但是 ,随着提取剂用量的增加到一定程度后 ,料液比超出
1∶ 40, LFSA提取率反而下降 ,这可能与料液比过高时 ,材料
易漂浮于溶剂表面 ,造成料液接触面积减小的缘故 ;也可能是
用量增加后 ,更多的其它化学成分溶出也增加 ,从而干扰了黄
酮类化合物与溶剂分子的结合。
图 2　不同体积分数乙醇对 LFSA提取率的影响
图 3　提取剂用量对 LFSA提取率的影响
图 4　提取温度对 LFSA提取率的影响
2. 2. 3　提取温度对 LFS A提取率的影响: 温度升高可加快
·31·
Strai t Pharmaceutical Journal Vol 19 No. 3 2007
分子运动 ,有利于黄酮类化合物的溶出与扩散 ,使提取率升
高。 LFSA的提取温度在 50～ 70℃范围 ,提取率有所下降 ,但
在 70～ 90℃范围内 80℃左右 , LFSA溶出量存在着最大的提
取率 (见图 4)。
2. 2. 4　提取时间对 LFSA提取率的影响: 由图 5可以看出 ,
提取时间 40min内提取率渐渐升高 , 40min后变化不大 ,因
而 ,长时间的加热处理是没有多大意义的。
图 5　提取时间对 LFSA提取率的影响
2. 3　提取条件的正交优化　 根据单因素试验的结果 ,对 4
个因素分别选择适宜的 3个水平 ,按 L9 ( 34 )进行正交设计与
实验、提取率以 3次平行实验的平均值表示。 实验设计、分析
结果 (见表 1, 2, 3)。
表 1　 L9 ( 34 )因子水平表
水平
因子
A乙醇体积分数 (% ) B温度(℃ ) C提取时间( min) D料液比( g· mL- 1)
1 45 70 30 1∶ 30
2 60 80 40 1∶ 40
3 75 90 50 1∶ 50
表 2　正交设计方案与提取率 (% )
序号 A B C D 评价指标总黄酮提取率 (% )
1 1 1 1 1 2. 83
2 1 2 2 2 1. 71
3 1 3 3 3 1. 86
4 2 1 2 3 1. 33
5 2 2 3 1 4. 10
6 2 3 1 2 2. 06
7 3 1 3 2 1. 66
8 3 2 1 3 3. 07
9 3 3 2 1 3. 64
K1 2. 133 1. 940 2. 653 3. 523 22. 26
K2 2. 497 2. 960 2. 227 1. 810
K3 2. 790 2. 520 2. 540 2. 087
R 0. 657 1. 020 0. 426 1. 713
表 3　方差分析
因素 离均差平方和 自由度 均方 F值 P值
A 0. 649 2 0. 325 2. 215 0. 311
B 1. 570 2 0. 785 5. 359 0. 157
D 5. 076 2 2. 538 17. 321 0. 055
C(误差 ) 0. 293 0. 147
　　 据表 2的极差分析可知 , 4种因素影响 LFSA提取率的
主次顺序依次为 D> B> A> C,即料液比 > 温度> 乙醇体积
分数> 提取时间。由于 SSc最小 ,故以其作为误差方差进行方
差分析 ,结果 (见表 3)显示: 温度、乙醇体积分数、提取时间等
3种因素均对叶黄酮提取率无显著影响 ,这可能与黄酮类成
分的物性有关 ,这也预示了 LFSA大量提取时合理采取节能
等降低成本的措施将对提取率的影响不显著 ,但需要指出的
是 ,因素 D即料液比的 P值近似于临界值 0. 05,因此 ,该因素
各水平的提取率差异相对较大 ,选取该因素的水平时应引起
重视。 终上分析 ,提取 LFSA的优化条件为 A3B2 C1D1 ,即 30
倍原料重的 75%乙醇溶液在 80℃条件下提取 30min。
2. 4　总黄酮含量测定
2. 4. 1　精密度试验:以最佳提取条件 A3B2C1D1提取叶总黄
酮 ,平行实验 5次 ,测得总黄酮含量为 ( 6. 35± 2. 36% )% X±
RSD。
2. 4. 2　显色稳定性试验: 芦丁标准品及提取液的显色反应均
较稳定 ,在 90min内每隔 15min测定其吸光度 ,吸光度值变化
幅度小。
2. 4. 3　回收率试验: 称取样品数份 ,分别添加适量芦丁标样 ,
按前述操作进行提取、层析 、测定。 以加标测得量减去原样含
量 ,除以加标量 ,计算回收率。 结果显示 (见表 4)平均回收率
为 101. 38% ,相对标准差 2. 24%。这说明实验采用的提取纯
化技术及显色测定方法能够较真实的反映 LFSA的含量 ,准
确性较高。
表 4　加标回收试验结果
样品黄酮量
/mg
加标量
/mg
加标后样品黄酮量 /mg 回收率/% 平均回收率 /%
0. 0231 0. 4000 0. 4274 101. 08
0. 0323 0. 4000 0. 4495 104. 30 101. 38± 2. 24
0. 0537 0. 4000 0. 4487 98. 75
3　结论
影响 LFSA提取率的 4个因素 ,主次顺序依次为料液比
> 温度> 乙醇体积分数> 提取时间 ,低的料液比、高温度与较
低体积分数的乙醇均有利于 LFSA的溶出 ,提取时间的延长
对 LFSA的提取率影响并不大 ,温度、乙醇体积分数、提取时
间等 3种因素对 LFSA提取率均无显著影响 ,这将有利于
LFSA大量提取时采取节能等降低成本的措施。 单因素考察
与正交实验得出 ,提取 LFSA的工艺参数为: 以 30倍原料重
的 75%乙醇溶液在 80℃条件下提取 30min。以最佳工艺条件
提取 ,经聚酰胺吸附、洗脱、初步纯化 , N aNO2-Al ( NO3 )3-
NaO H溶液体系显色测定 ,测得 LFSA含量为 ( 6. 35±
2. 36% )% ,该技术方法精密度高 ,准确性强。 高含量的
LFSA,预示着南方碱蓬具有药用开发与利用的潜力与前景 ,
关于 LFSA的生物活性有待深入研究。
参考文献
〔1〕福建植物志编写组 .福建植物志 (第一卷 )〔M〕 .福州:福建科学技
术出版社 , 1990, 546.
〔2〕张学杰 ,樊守金 ,李法曾 .中国碱蓬资源的开发利用研究状况〔 J〕 .
中国野生植物资源 , 2003, 22( 2) : 1～ 3.
〔3〕孙宇梅 ,赵进 ,周威 ,等 .我国盐生植物碱蓬开发的现状与前景〔 J〕 .
北京工商大学学报 (自然科学版 ) , 2005, 23( 1): 1～ 4.
·32·
海峡药学　 2007年　第 19卷 第 3期
〔4〕邵秋玲 ,谢小丁 ,张方审 ,等 .盐地碱蓬人工栽培与品系选育初报
〔 J〕.中国生态农业学报 , 2004, 12( 1): 47～ 49.
〔5〕王晓玲 ,李春胜 ,房春波 ,等 .碱蓬的用途与种植技术〔 J〕 .特种经济
动植物 , 2003, ( 12): 2526.
〔6〕张荃 .海水农业的梦想与现实〔 J〕.山东科学 , 1999, 12( 1): 15.
〔7〕高健 .盐地碱蓬中黄酮类物质的提取及抗氧化性研究〔 J〕 .盐城工
学院学报 (自然科学版 ) , 2005, 18( 2): 55～ 57.
〔8〕元晓梅 ,蒋明蔚 ,胡正芝 .聚酰胺吸附—硝酸铝显色法测定山楂及
山楂制品中的总黄酮含量〔 J〕.食品与发酵工业 , 1996, No4: 27～
32.
〔9〕孙希云 ,牛广财 ,孟宪军 ,等 .马齿苋中黄酮类化合物的最佳提取工
艺〔 J〕.食品与发酵工业 , 2004, 30( 11): 136～ 137.
〔10〕张睿 ,徐雅琴 ,时阳 .黄酮类化合物提取工艺研究〔 J〕.食品与机
械 , 2003, ( 1): 21.
〔11〕林启训 .枇杷叶黄酮类化合物的水浸提工艺研究〔 J〕.农业工程学
报 , 2005, 21( 7): 190～ 193.
素颜 粉剂 质量 标准 的研 究
杨 莹 (广州市第一人民医院 广州 510370)
摘要: 目的　建立素颜粉剂的质量标准。 方法　采用薄层色谱鉴别法对方中黄柏进行定性鉴别 ;采用 HPLC法测定方中大黄所含大黄素及大
黄酚的含量。结果　薄层斑点清晰、重现性好 ;含量测定大黄素及大黄酚重现性良好 ,平均加样回收率为 99. 2%及 99. 6% , RSD分别为 2. 5%和
1. 6%。结论　方法简便、准确、可用于本品的质量控制。
关键词: 素颜粉剂 ;大黄素 ;大黄酚 ;薄层色谱法 ;高效液相法
中图分类号: R927. 2　文献标识码: A　文章编号: 1006-3765( 2007) 03-0033-03
Study on the quality standard of Suyan fenji .
YANG -Yin (The first Hospital in Guangzhou ,Guangzhou 510370,China )
ABSTRACT: OBJECTIVE　 To establish the quality standard of suyan fenji.METHODS　 Appling the technique
of TLC to identify phellodendrom amuense Rupr in this prescription; Using HPLC to determine the content of
emodin and chry sophanol. RESULTS　 The method show s a good resolution. The average recovery of emodin w as
99. 2% , and RSD was 2. 5% ; The average recovery of chry sophanol w as 99. 6% , and RSD was 1. 6% .
CONCLUSION　 The method is simple and reliable. It can be used in quality cont rol of Suyan fenji.
KEY WORDS: Suyan fenji; Emodin; Chry sophanol; TLC; HPLC
　　素颜粉剂由大黄、黄柏、薄荷、生地黄、蒲公英、紫花地丁
等多味中药组成 ,具有清热、消炎、抗菌的功效。为控制本品质
量 ,保证本品的临床疗效 ,笔者建立了黄柏的薄层鉴别 ,方法
简便可行 ,重现性好 ,并采用 HPLC法对方中君药大黄的大
黄素及大黄酚进行了含量测定 ,取得了较好的结果。
1　仪器、试药与样品
Agilent 1100高效液相色谱仪 (自动进样品 , DAD检测
器 , Agilent 1100 化学 工 作 站 ) 超 声 波 清洗 器 ; 瑞 士
M ETTLER AE - 100 电 子 天 平 ; 瑞 士 M ETTLER
TOLEDO3. 0电子天平。
甲醇为色谱纯 ,其余试剂为分析纯 ,水为超纯水。大黄素
(中国药品生物制品检定所 ,批号: 11076- 200110,供含量测
定用 ) ;大黄酚 (中国药品生物制品检定所提供 ,批号: 796-
9302,供含量测定用 );黄柏对照药材 (中国药品生物制品检定
所提供 )盐酸小檗碱 (中国药品生物制品检定所提供 );素颜粉
剂 (广州市第一人民医院自制 ,批号: 05113、 06022、 06041)。
作者简介:杨莹 ,女 ( 1977. 7— )。毕业于广东药学院。职称:药剂师。从
事药剂专业。 联系电话: 020— 37605870
图 1　黄柏 TLC图谱
1～ 2:供试品 (批号: 05113) , 3～ 4:供
试品 (批号: 06022) , 5～ 6: 供试品 (批
号: 06041) , 7:黄柏对照药材 , 8:盐酸
小檗碱对照品 , 9:缺黄柏阴性样品
2　素颜粉剂中黄柏的薄层
鉴别
取本品 0. 3g ,加甲醇
10m L,超声 10min,滤过 ,滤
液作供试品溶液。另取盐酸
小檗碱适量 ,加甲醇制成
0. 25mg· m L- 1的对照品溶
液。 照薄层色谱法 (中国药
典 2005 年 版 一 部 附 录
V IB) ,吸取上述两种溶液各
2μL,分别点于同一硅胶 G
薄层板上 ,以乙酸丁酯 -甲醇
-水 ( 7. 5∶ 2. 5∶ 2. 5)上层液
为展开剂 ,干燥展开 ,取出 ,
晾干 ,置紫外光灯 ( 365nm )
下检视。 供试品色谱中 ,在
与对照药材色谱相应的位置上 ,显相同颜色的荧光斑点 ,且空
白无干扰。 结果 (见图 1)。
·33·
Strai t Pharmaceutical Journal Vol 19 No. 3 2007