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白花菜抗菌特性的研究



全 文 : 19 《食品工业》2010 年第 5 期
白花菜抗菌特性的研究
曾维丽,刘畅,王飞*
漯河医学高等专科学校食品工程系 (漯河 462002)
摘 要 采用索氏抽提的方法获得白菜花不同部位的提取物,采用抑菌圈法比较不同溶剂提取以及白花
菜不同部位(种子和叶子)提取物对微生物抗菌效果的影响。结果表明,白花菜提取物的活性成分对黄曲霉
和酵母菌无抑制作用。叶子经去脂处理后的水提取物以及种子经去脂处理后的醇提取物对蜡样芽孢杆菌
和大肠杆菌有很强的抑制性。
关键词 白花菜;抗菌作用;活性成分
Study on Antibacterial Properties of Cleome gynandra
Zeng Wei-li,Liu Chang, Wang Fei
Department of Food Engineering, Luohe Medical College(Luohe, 462002)
Abstract Extracts from different fractions were obtained through Soxhlet extraction. The resistant pathogens of
different solvent extraction from the seeds and leaves were studied using inhibition zone diameters. The results
showed that all the extracts had no antimicrobial effects on both Aspergillus fl avus and yeast. Both of the water
extracts from defatted leaves and the ethanol extracts from defatted seeds had the best antimicrobial effect on
Bacillus Cereus and Escherichia coli.
Keywords Cleome gynandra;antibacterial effect;active components
白花菜Cleome gynandra L.为白花菜科植物,别
名羊角菜、五梅草、臭花菜等。在全球热带、亚热带
都有分布,在我国分布也较广,是田野路边常见的野
生植物。它富含对人体有益的十七种微量元素和多种
氨基酸,具有较高的药用价值。叶子的水提物可以缓
解耳炎[1],乙醇提取物有抗癌活性[2],甲醇提取物具
有明显抗佐剂诱发关节炎的作用[3-4]。
本试验研究白花菜的种子和叶子提取物对常见食
品污染微生物的抑菌作用,以探讨白花菜作为食品天
然防腐剂的应用前景。
1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 白花菜叶子和种子
将处于生长期的叶子采摘后,洗净,40℃烘干,
于干燥器中保存备用。成熟的种子,经干燥、除杂
后,于干燥器中保存备用。
1.1.2 供试微生物
黄曲霉(Aspergillus fl avus)、苏云金杆菌(Bacillus
thuringiensis)、蜡样芽孢杆菌(Bacillus Cereus)、大肠
杆菌(Escherichia coli)、酵母菌(yeast)。
1.2 提取液的制备
提取前将叶子粉碎,过40目筛子;种子用研钵研
至刚出油为宜。
1.2.1 水提液
取适量的叶子(或种子),滤纸包扎,用蒸馏水
100℃回流提取,至抽提器中馏出液为无色,提取液
浓缩至浓度为(4 g原料)/(mL水)。
1.2.2 醇提液
取适量的叶子(或种子),滤纸包扎,用无水乙醇
(或95%乙醇)于85℃水浴回流提取,至抽提器中提出
液无色,回收乙醇,浓缩提取液。叶子的醇提物用
80℃水溶解,取上清液;种子的醇提物也用80℃水萃
取,取水溶性部分,所得水溶液体积均为初始原料重
量的1/4。
1.2.3 混合提取液
取适量的叶子(或种子),用乙醚80℃水浴回流
提取,至原料中无脂类物质溶出,回收乙醚,保存
所得脂类提取物。而后将上述提取后的原料于50℃
条件下烘干,再用蒸馏水于100℃回流提取,至抽
提器中馏出液无色,浓缩所得水提物至浓度为(4 g
初始原料)/(mL水)。水提后的原料烘干,再用乙醇
提取,所得提取物用水溶解,浓度为(4 g初始原
料)/(mL水)。
1.3 菌悬液的制备
用接种环挑取一环菌体孢子放入一定量的无菌水
中,充分振摇,制成菌体悬液,菌液浓度为108 cfu/
mL。
1.4 抑菌效力测定
将高压灭菌的培养基(大肠杆菌用营养琼脂培养
基,其他微生物用PDA培养基)倒入干燥灭菌的培养
*通讯作者
基础研究
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皿内,制成的培养基厚度为4 mm,待冷凝后,加入
1 mL菌悬液均匀涂布平板,待培养基上无水状物时,
用无菌金属打孔器打成直接为6 mm,深4 mm的小
孔,用无菌针除去孔内琼脂。
分别吸取不同提取方法得到的提取液50 µL于孔
内,不同提取液作3个重复,提取过程中产生的沉淀
物用pH4.6磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液作对照,其他用
无菌蒸馏水作空白对照。然后将培养皿置于恒温培养
箱中培养(细菌37℃恒温培养,酵母菌和霉菌28℃恒
温培养),用十字交叉法测抑菌圈直径。
1.5 数据处理
采用SPSS 13.0 for Windows(One-Way ANOVA)软
件对多次抑菌测试结果均值分析,数据以 x s± 表
示。
2 结果与讨论
2.1 不同提取方法对白花菜叶子抑菌效果的影响
表1 不同提取方法对白花菜叶子抑菌效果的
影响 mm
苏云金杆菌 蜡样芽孢杆菌 大肠杆菌 黄曲霉 酵母菌
1 14.22±0.29 18.02±1.41 17.82±1.09 - -
2 7.52±0.50 - 9.54±1.32 - -
3 5.21±0.58 - - - -
注: 1为叶子经乙醚提取后水的提取物;2为叶子经乙醚-水提取后无
水乙醇的提取物;3为叶子乙醚提取后在水提取过程中产生的沉淀
经pH4.6磷酸二氢钠-柠檬酸缓冲液溶解后的物质;“-”代表无抑
制性。
从表1看出,叶子提取物对黄曲霉和酵母菌
均无抑制力,对三种细菌具有一定的抑制性。而
Ajaiyeoba采用甲醇提取得到的叶子提取物对黄曲霉
等霉菌具有较强的抑制力[1]。这可能是由于原料产
地不同所含成分不同所致。与其它提取方法相比,
叶子经乙醚去脂后再用水浸提所得的提取物对三种
细菌(苏云金杆菌、蜡样芽孢杆菌和大肠杆菌)的抑
制性均较好,这说明叶子中极性较强的物质具有较
强的抗菌性。
同时,在叶子经乙醚脱脂后再用水浸提的过程中
发现有大量的白色物质析出,此物质不溶于水,溶解
于pH值为4.6的磷酸二氢钠-柠檬酸缓冲液中。对该沉
淀物进行抗菌实验,结果表明,苏云金杆菌对其较敏
感,而蜡样芽孢杆菌和大肠杆菌对其没有敏感性。初
步判断该物质为生物碱,对其组成成分的鉴定有待进
一步深入研究。
2.2 不同提取方法对白花菜种子抑菌效果的影响
从表2看出,种子提取液对细菌具有一定的抗菌
性,而对黄曲霉和酵母菌均无抑制性。大肠杆菌对
不同的提取方法所得的提取物均较敏感,抑菌圈直
径在12 mm以上。种子先经乙醚提取,再用水提所得
的提取物对蜡样芽孢杆菌无抑制性,而将上述水提
取后所得的原料再用乙醇提取所得的物质对蜡样芽
孢杆菌具有较强的抑制性。苏云金杆菌对先经水提
取再用乙醇提取所得的物质的敏感性比用其他方法
所得的物质强。
表2 不同提取方法对白花菜种子抑菌效果的影响 mm
苏云金杆菌 蜡样芽孢杆菌 大肠杆菌 黄曲霉 酵母菌
1 11.12±1.16 - 12.18±0.89 - -
2 12.81±0.76 12.82±1.89 13.51±1.32 - -
3 12.01±0.87 11.52±1.29 16.04±1.18 - -
4 5.00±1 - 13.01±0.29 - -
注: 1为种子经乙醚提取后水的提取物;2为种子经乙醚、水提取
后无水乙醇的提取物;3为种子经乙醚、水提取后95%的乙醇的提
取物;4为种子经水提取后无水乙醇的提取物;“-”代表无抑制
性。
3 结论
3.1 无论采用何种提取方式,叶子和种子的提取物
对黄曲霉和酵母菌均无抑制性,对细菌均有一定程度
的抑制作用。说明白花菜活性成分的抗菌性具有很强
的针对性。
3.2 蜡样芽孢杆菌是食物中毒中较常见的致病菌,
在我国细菌性食物中毒中居前三位[5]。叶子经去脂处
理后的水提取物以及种子经去脂处理后的醇提取物对
蜡样芽孢杆菌有很强的抑制性。
3.3 叶子经去脂处理后的水提取物以及种子经去
脂处理后的醇提取物对受试菌都具有较强的抑制作
用。对上述两种提取物中的活性成分将作进一步研
究。
参考文献
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基础研究