全 文 ：2 76 2即7, Vo L 2 .8 入 d . 04 目品成李 嫩分析检侧
苯酚 一硫酸法测定野木瓜中多糖含量的研究
王文平 , , 郭祀远 , , 李 琳 , , 王明力 2 , 梁桂娟 2
l(
.华南理工大学轻工与食品学院 , 广东 广州 51 06 4 0 ;
.2 贵州省发醉工程与生物制药重点实验室 , 贵州 贵阳 5 5侧洲」3 )
摘 要: 采用苯酚 一硫酸法对野木瓜中的多糖含量进行测定 , 在波长 49 0 n m 处测定吸光度 , 实验表明标准葡萄糖
在 8 ~ 6 4 , g 之间呈 良好的线性关系 , 该法简便易行 , 准确性高 , 重现性好 。 本文探讨了测定过程的影响因素 , 并
通过此法测得野木瓜中多搪含量为 12 . 0 2 % .
关健词 : 野木瓜 ; 多糖 ; 苯酚 一 硫酸法 ; 含量
A s s a y S tU dy o n C o n et n t o f oP ly s ac h iar de
s in s如n un ot n 必 hC in e n s is b y Phe no l
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112
,
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( 1
.
C o l ge e o f L ight ln d
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55《X洲) 3 , Ch ian )
A加由旧d : Tb e c o n et nt of pol y目` c h州de s in s拓闭“ 川 or n她 O楠能川臼 w as de et nr 曲de by het 川曰bt do of Phe nol 一 s u ht in c ac 诚 ot
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中图分类号 : Q 503 文献标识码 : A 文章编号: 1X() 2一6 3仪2以刀拼 .似 , 6魂阵
野木瓜 (atS n u n ot n i a hC in e n s i s )是贵州省遵义正安县
独有的野生天然特产资源 , 属蔷薇科贴梗海棠灌木丛植
物 。 正安县野木瓜品质独具特色 , 具有果大 、 皮薄 、
肉厚 、 肉质细嫩 、 味甘酸 、 气香等特点 。 木瓜在 中
医药学中用途广泛 , 《中医大辞典 》 、 《本草纲 目 》 、
《本草拾遗》 等著名医著都记载了木瓜具有舒筋活络 ,
收稿日期 : 20 6 一 05 。 18
基金项目 : 贵州省科技基金项 目(黔科合 J 字2[ 0 5 2] 0 17 号)
作者简介 : 王文平 ( 19 6 6 一 ) , 女 , 博士研究生 , 研究方向为天然产物化学 。
通过对低温浸泡时间 、 蒸馏速度 、 冷凝温度及磷
酸浓度等具体实验参数的优化和控制 , 明显提高了乙
酞丙酮分光光度法的灵敏度和准确度 , 测定低限可达
0
.
l m gl k g
, 回收率达 9 0% ~ 1 1 1% 。 改进后的乙酞丙酮
分光光度法能够准确定量测定菌菇类及水产品中的游离
态和结合态甲醛含量 , 具有较好的应用前景 。
今考文献 :
卫生部 (卫法监发 )l 2X() 1 1 , 9 号. 食品中甲醛次硫酸氢纳的侧定方法
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向仕学 , 汤晓勤. 陈溯 . 污染食品中甲醛的极谱分析 [J] . 中国食品卫
生杂志 , 公扣2 , l《 l ): 1 9一2 1 .
炭分析检侧 . 品职字 20 7, VO .I 28, 八勿 . 04 2 77
解渴生津 、 平肝和胃 、 祛风除湿等功效 , 能治疗腰膝
疼痛 , 脚气水肿 , 痢疾霍乱 , 心痛腹痛等疾病 , 另
外 , 还有镇咳 、 清署利尿 、 解酒祛痰等作用 。 现代
研究表明 , 野木瓜含有丰富的有机酸 、 果胶 、 蛋白质 、
多种氨基酸 、 多种维生素和多种矿物质 l ` l 。
野木瓜用途广泛 , 集观赏 、 食用 、 药用于一体 , 生
态 、 经济 、 社会三个效益兼得 , 特别是经济效益显著 ,
是不可多得的名贵经济树种 。 鉴于其独特的临床效果 、 重
要的经济价值及广泛的应用前景 , 野木瓜已成为极具开发
潜力的天然产物资源之一 , 受到人们的广泛关注 12 。 但目
前木瓜产品在食品开发方面也仅开发出木瓜酒 、 木瓜脯 、
木瓜饮料等一般食品 。 为进一步开发野木瓜的利用价值 ,
本文对野木瓜多糖进行了测定 , 旨在为野木瓜多糖的分离
纯化 、 药理作用的深入研究打下基础 。
材料与方法
L l 材料
野木瓜由贵州遵义天楼木瓜有限公司提供 .
苯酚 、 浓硫酸 、 石油醚 、 葡萄糖 、 无水乙醇等
均为国产分析纯试剂 。
12 仪器设备
H H
·
S H
一
Z 型电热恒温水浴锅 北京长安科学仪器
厂 : Z K 一 8 2 8型电热真空干燥箱 上海跃进医疗器械厂 ;
D w F
一
1 8 0 型电动植物粉碎机 河北省黄弊市科研器材
厂 ; S L 2 0 0 0 电子天平 澳豪斯公司 ; U V 25 5 0 紫外可见
分光光度计 岛津公司 ; N 一 1侧X) V 一W B 旋转蒸发仪 日本
东京理化器械株式会社 。
12 方法
1
.
2
.
1 野木瓜多糖的提取与精制工艺
样品处理一脱脂~ 浸提一抽滤除渣一减压浓缩一 乙
醇沉淀多糖~ 真空干燥~ 粗多糖~ 复溶~ 脱蛋白~ 离心
分离~ 乙醉沉淀多糖一真空干燥~ 精制多糖
1.2 2 工艺要点说明
1.2 .2 1 样品处理
将鲜野木瓜去籽切片烘干 , 在粉碎机中粉碎 , 过
4 0 目筛 , 将样品粉末置于棕色磨 口瓶中备用 。
1
.
2
.
2
.
2 脱脂
称取 25 . 0 0 9 样品粉末 , 置于 50 0m l 圆底烧瓶中 , 加
入 2 5 0 m l 石油醚 , 回流 Z h , 脱去表面脂肪 , 抽滤 , 风
干 , 重复 一次 。
1.2 .2 3 浸提
脱脂后的样品 , 以 1 : 3 0 的料液比加入蒸馏水 , 在
9 0 ℃水浴中浸提 Z h , 过滤后 , 滤渣在相同条件下重复
浸提 一次 。
1.2 .2 4 抽滤除渣
将两次浸提液减压过滤 , 去除滤渣 , 合并两次滤液 。
1.2 .2 5 减压浓缩
将合并滤液在真空旋转蒸发器中浓缩至小体积 。 在
浓缩后的多糖溶液中加入 3 倍 9 5% 乙醇 , 经抽滤 , 真
空干燥后得粗多糖 。
1.2 .2 6 脱蛋白
粗多糖复溶后经过 s e va g 试剂 (抓仿: 正丁醉 = :5 1) 除
蛋 白 , 连续操作多次 , 直到完全脱除蛋白为止 。
1.2 .2 7 醉沉
在脱蛋白后的多糖溶液中加入 3倍 9 5% 乙醇 , 沉淀
用乙醇 、 丙酮及乙醚反复洗涤 , 经抽滤 、 真空干燥后
得到精制多糖 。
1 1 3 标准曲线的绘制
1.2 .3 1 葡萄糖标准溶液的配制
取葡萄糖于 or s ℃干燥至恒重 , 精确称取 2 0 m g , 加
蒸馏水溶解 , 定容至 s o o m l , 即可得到浓度为0 . 04 m g lm l
的葡萄糖标准溶液 .
1.2 .3 2 苯酚溶液的配制 13
称取苯酚 1 0 0 9 , 加铝片 0 . 1 9 , 加碳酸氢钠 0 . 0 5 9 ,
油浴中常压蒸馏 , 收集 1 8 2 ℃的馏分 , 取馏出液 1 0 9 ,
加蒸馏水 1 5 0 m l , 置于棕色瓶中备用 。
1.2 .3 3 标准曲线的制备
分别吸取 0 . 0 、 0 . 2 、 0 . 4 、 0 . 6 、 0 . 8 、 1 . 0 、 1 . 2 、
1
.
4
、
1
.
6 m l 的 .0 04 m gl m l 的葡萄糖标准液 , 置于 10 m l试
管中 , 各加水补足至 2 m l , 加入 6 % 苯酚 l m l , 摇匀 ,
迅速滴加浓硫酸 s m l , 放置 s m i n , 置沸水浴中加热
2 0 m in
, 迅速冷却至室温 , 于 4 9 0 n m 处测吸光度 。
1
.
.2 4 样品中多糖含量测定 l’]
精确称取野木瓜粉末 0 . 29 , 用 8 0% 乙醉浸泡过夜 ,
索氏抽提器中用 8 0 % 乙醉回流 3 h , 以去除单搪 、 低聚
糖 、 普类及生物碱等成分 。 残渣挥干乙醉后用燕馏水
抽提 Z h , 反复洗至 2 5 0 m l 容量瓶中 , 定容成样品液 。
吸取样品液 0 . s m l , 按上述标准曲线操作步骤 , 测吸光
度 , 按标准曲线和下式计算样品中多糖的百分含量 , 多
搪含量 (% =) C x D x F门万 。 式中 , C 为样品液中葡萄精
的浓度 ; D 为样品液的稀释因素 : F 为换算因子 ; W
为样品的重量 。
结果与分析
.2 1 标准曲线回归方程建立
用紫外分光光度计 , 在 4 9 0 n m 的波长处测定吸光
度 , 以试剂空 白参比 , 实验结果见表 1 。
所得其线性回归方程式 Y = 0 . 0 5 6 2 9 X + 0 . 0 0 1 4 5 ,
27 8 Zco 7, Vo L 28, N口
.
04 . 目麟李 嵌分析植洲
抽七eI l
衰 1 花翻 . 标准溶液浓度与吸光度位
C a傲拍 nt献沁 n of s怕 n da dr gl 以刀 s e a冈 随 曲即由 . nc e
标准液体积 (创 )
标准液浓度小创由】)
吸光度
些
0
.
0
些
8
.
0
.0招期 ) .0 0洲
1 6
·
0
0
.
123
24 .0
0
.
169
3 2.0
0
.
2 19
4O .0
0
.
2吕 7
4 8
.
0
0
.
M吕
5 6.0
0
一
3 89
r Z= 0
.
9 9 8 5 1
, 相关系数 r = 0 . 9 9 9 3 , 表明葡萄糖在 8 . 0 ~
64
.
o p gl m l 范围内很好地符合郎白 一 比尔定律 . 以吸光度
为纵坐标 , 葡萄糖浓度为横坐标 , 绘制标准曲线见图 1 。
衰 3 箱密度实吐结 .
飞七le 3 R e s u ltS ot P住` 15阳旧 别 . 曰梦
样品号
吸光度
2 3 4 5 6 肠6以% )
0
.
4 18 0
.
4 2 7 0
.
4 2 8 0
.
4 26 0
.
4 2() 0
,
4 3 2 1
.
12
.2 6 重现性实验
精确吸取来自同一批原料的试样 , 按样品测定方
法 , 分别测定其吸光度 , 检验该测定方法的重现性 ,
得 R s D % = 1 . 8 1 , 小于 5 % , 表明重复性较好 , 结果见
表 4 。
0 2 4 6 8
裹 4 , 现性实位结 .
飞 b le 4 R e s u lst of er P r叼 cu ib llyt a创泊 y
%阅的朽4902时0刁
侧嗽咨
翻萄箱浓度小创园 )
圈 1 抽 , . 标准曲经
样品号
吸光度
2 3 4 5 平均 SR (D肠 )
0
.
2 3 9 0
.
2 4 0
.
2 36 0
.
2 3 5 0
.
2 4 6 0
.
24 0 1
.
8 1
FIO
.
I S恤 n血闭 cu vr e of 91以为 s e
.2 2 换算因子的测定 I,川
精确称取干操至恒重的精制野木瓜多糖 4m g , 置于
50 m l 容量瓶中 , 加水溶解至刻度 。 吸取上述溶液 1 . o m l ,
按 1 . .2 3 中的方法测定吸光度 , 求出此精制多糖中葡萄糖
的浓度 , 按下式计算出换算因子 F , F = w l( c x D ) 。 式
中 , w 为多糖重量 ( m g ) ; C 为精制多糖中葡萄糖的浓
度 ( p gl m l) D 为多糖的稀释因素 。 实验测得吸光度值为
0
.
3 5 6
, 由回归方程得多糖含 t 为 6 . 2 9 7 p gl m l , 经计算
F = 1
.
5 9
。
.2 3 样品中多糖含量测定结果
按上述多糖含量测定方法 , 同时做三个重复 , 经
测定吸光度值分别为 0 . 2 1 5 、 0 . 2 16 、 0 . 2 12 , 计算得野
木瓜多糖平均含量为 12 . 0 2% .
2 .4 稳定性实验
取试样 l . Om l , 连续 2 ~ 3 h , 每隔一定时间测一次
吸光度 , 观测其稳定性 , 结果表明在显色 9 0m in 时间内
吸光度稳定性较好 , 结果见表 2 .
.2 7 回收率实验
精密吸取己配制的 4 0 p gl m l粗多糖溶液 1 . o m l , 分
别加入 0 . 1 、 0 . 2 、 0 . 3 、 0 . 4 、 o . s m一的 o . o 4m g lm l 标准葡
萄糖溶液 , 按样品测定方法 , 分别测定其吸光度 , 计
算回收率 , 结果见表 5 , 样品回收率均在 9 5 % ~ 1 0 5%
之间 , 表明本法可行 ` , 一 ! 。
衰 5
抽b协 5
回收率实脸结 .
R e s 。肋 of 比K泊 v e yr 创舫曰 y
加入菊萄精 t 侧得总 t
职目
4
.
6酬 )
5
.以 7
5
.
6 5 8
6
.
2 6 5
6
.
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回收率
陶
9 .0 1
10 1
.
3 3
9
.
2
97 .5 9
9 8
.
3 8
平均
附
R SD
陶
9
.
11 1
.
26
些.05.12.
样品含箱 t
职目
4
.
1 14
4
.
1 14
4
.
1 14
4
.
1 14
4
.
1 14
3 结 论
斑 2 粗定性实脸绪.
相七1. 2 R e . u ltS ot s怕划 .即创” 旧萝
本实验通过水提醉沉 , 提取野木瓜多糖 , 用苯酚 -
硫酸法测定其含量 , 通过实验可知 , 该法准确率较高 ,
重复性较好 , 结果可靠 , 并且此法简便灵敏 , 适宜于
野木瓜多糖的含量测定 .
时间( . 加 ) .0 5 30 印 叨 120
吸光度 0 . 2 67 .0 2曰 .0 26 9 .0 2的 .0 2 6 8
.2 5 精密度实验
按样品测定方法 , 吸取标准溶液 (0 . 0 4 m gl m l) 进行精
密度实验 , 连续进行 6次测定其吸光度 , 得 R S D = 1 . 12 % ,
小于 5 % , 表明精密度好 , 结果见表 3 。
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D S C 法研究小麦淀粉与面粉糊化和回生特性
朱 帆 , 徐广文 * , 丁文平
(武汉工业学院 , 湖北 武汉 43 X() 2 3 )
摘 要 : 利用差示扫描量热仪结合 A vr a m i 方程考察了 8种不同小麦淀粉与面粉糊化和回生特性 , 探讨了直链淀粉
和蛋白含量对其热力学行为产生的影响 , 并用 S P S S 软件计算其相关性。 结果表明 : 对于淀粉与面粉体系 , 直链
淀粉含量与糊化热焙值△ H 呈较显著的负相关 , 与 A v r a 们n i 指数 n 呈弱的负相关 , 而与速率常数 k 呈较显著的正相
关 , 与最大回生度 D R 呈一定的正相关 ; 对于面粉体系 , 蛋白含量与面粉糊化热烩值△ H f 呈一定的负相关 , 与
面粉体系 A
~
i 指数 nf 和速率常数 kf 分别呈弱的正相关和较显著的负相关 , 与面粉体系最大回生度 D R f 呈弱的正
相 关 。
关健词 : 糊化 ; 回生 : D s c ; A v r a m i ; 相关性
S tU d y o n G e l iat n i s iat
o n an d eR otr gar d
a it o n rP o Pe币 e s o f 认飞 e at s公叮c h an d lF o u r b y D SC
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A知山ar c t : eG liat in s iat o n an d er otr g r a da t io n o f s t a代 h an d fl o ur Por pe 币 e s for m 8 w h eat s pe c i e s w er s ut id ed b y D S C ot if t
A v n ln 吐 eq ua it o n
.
T卜e e o能 l西 o ns hi P比wt e n ht er 功司 肠口e dcs an d ht e c o n et nst of am y】0 8e 叨 d P印枕in w as e v al u a扭月by S PS .s
F匕r bo ht o f s at 比h an d flo ur, aJ旧 y lo se c o n et nt i s n e g硕 v e l y c o n℃ la et d iw ht ge al it in助吐 o n e n ht al Py (△功 , w e ak l y
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c o n℃ lat e d iw ht ob ht n f an d D P J
.
K e y . o r d s: g e la ti n i s at i o n ; er tI’O g r a d at i o n ; D S C ; Av r a们。 i ; e o er lat i o n s h i P
中图分类号 : T S2 01 . 7 文献标识码 : A 文章编号 : 10 2一 6 63创 2X() 7 K辫~ 0 27 9一 04
小麦淀粉作为球状半晶体的多糖 , 受热糊化时 ,
颗粒吸水膨胀 , 半晶体瓦解 , 直链淀粉往颗粒外渗透 ,
相对于熔融的支链淀粉形成基质 , 阻止其晶体融化 「’ J。
糊化后的淀粉胶体在冷却后通过氢键作用开始回生 , 在
4℃左右时 , 小麦淀粉回生速率达到最大12 。 2 4 h 内主要
为系统内直链淀粉的有序化 , 之后主要是支链淀粉侧链
的结晶 。 淀粉的理化性质包括外观直链淀粉含量 , 脂 -
直链结合物含量和支链淀粉的精细结构等对其糊化和回
生特性有着重要的影响 ` ’ 一 3 ’ 。
在淀粉体系中按比例加入面筋蛋白 , 可溶性小麦蛋
白 , 戊聚糖和矿物质等成分就组成了面粉 。 其糊化和
回生特性除了受淀粉影响外 , 还受到加入成分的影响 。
但是对于面筋蛋白对其回生特性的影响有着不同的研究
结果 , E l i a s s o n 认为其能减小淀粉体系的回生度 , 而
收稿日期 : 2《X拓 一 05 一 18 * 通讯作者
基金项 目: 中荷国际合作项目 (2 00 5 C A 0 2 2)
作者简介 : 朱帆 ( 1 9 8 -2 ) , 男 , 硕士研究生 , 研究方向为谷物化学 。
轰国朝 . 中药木瓜多籍的提取分离及含 t 测定 IIJ . 徽 t 元素与健康
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