全 文 ：　　　　　　　药理研究中国民间疗法
　　CHINASNATUROPATHY, July.2011, Vol.19 No.7
新疆乌头草的急性毒性观察和心脏毒性的测定▲
李光来1 　管小江1 　侯新华1 　苏振磊1 　田春霞1 　于拔萃2 　郑秋生2
1.新疆哈密红星医院 , 839000
2.新疆特种植物药资源教育部重点实验室 石河子大学药学院
　　乌头草是毛茛科乌头属多年生草本植物 ,因植株体
内含有乌头碱而具一定毒性。新疆乌头草分布较广 ,田
边 、林带 、山坡均生长茂盛 ,哈密分布以天山北坡为主 。
由于近年来草场过度放牧 ,草场退化导致生态失衡 ,乌
头草每年以 5%～ 10%的速度递增而泛滥成灾。随着
人民生活水平的提高 ,回归大自然 ,食用野菜已成为一
种新的消费观念 。由于乌头草外型色泽与野芹菜极为
相似 ,采集野芹菜中夹杂乌头草事件日益频繁和增多 ,
因误食乌头草引起中毒的病例逐年增加[ 1] 。对于乌头
碱中毒的临床表现和作用机制的研究屡见不鲜 ,然而关
于新鲜乌头草中毒的实验研究很少。本文就新鲜乌头
草的急性毒性进行了报道 ,可为临床治疗乌头草中毒病
人的治疗提供依据 ,为制定《防治乌头草中毒的指南》提
供实验数据和基础。
材料与方法
1.受试药物:天山乌头草新鲜茎叶 500 g ,由新
疆哈密市红星医院医务科主任管小江老师鉴定提
供 。加入适量液氮 ,冷冻粉碎 , 再加入 500 m l蒸馏
水榨汁 ,过滤收集到 600 m l乌头草汁液 。 -80℃冷
藏备用 。
2.实验动物:昆明种小鼠 120只 ,雌雄各半 ,体重
18 ～ 22 g ,由新疆地方疾病控制中心实验动物室提供 ,
合格证号:SCXK(新)2010-00103 。在动物房适应 5
天后开始试验。
3.实验方法:
(1)预实验:取体重 18 ～ 22 g 小鼠 20 只(雌雄各
半),禁食不禁水 12 h ,分 5组 ,每组 4只。
用 5 倍稀释的不同剂量乌头草汁灌胃 ,造成不
同程度动物死亡 , 参照文献方法进行 LD50 的测
定[ 2] 。分别用 0/4 与 4/4 致死剂量组 , 递增或递减
一定比例的剂量 , 再次实验 , 找出 0%和 100%死亡
剂量的所在范围 。
▲基金项目:新疆生产建设兵团科委 2009年科技计划
(2009GG52)
(2)急性毒性实验:取体重 18 ～ 22 g 小鼠 50 只(雌
雄各半),灌胃前禁食不禁水 12 h ,分 5组 ,每组 10只 。
根据预实验时的致死情况 ,计算出乌头草汁中毒的相应
剂量 ,并由此配制出一系列不同浓度的药液 。将不
同浓度的药液分别给各组动物灌胃给药 1 次 ,均为
20 m l/kg 。给药后每日观察 ,连续 2 周 , 正常饮食 。
记录动物毒性反应及死亡数 。观察的指标包括一般
指标:动物外观 、行为 、分泌物 、排泄物;动物死亡情
况:死亡时间 、濒死前反应 。记录所有的死亡情况 、
出现的症状以及症状起始的时间 、严重程度 、持续时
间 、是否可逆 。对于所有的试验动物进行解剖 ,器官
出现体积 、颜色 、纹理改变时记录并进行组织病理学
检查 。
(3)组织病理学检查:用脊椎脱臼法处死小鼠 ,解剖
并肉眼观察心脏 、脑 、肾脏 、肝脏各主要器官的变化 ,用
10%的福尔马林溶液固定 、脱水 、石蜡包埋 、切片 , 经
HE染色 ,光镜检查。
(4)离体心脏灌注模型[ 3] :取大鼠称重 ,腹腔注射
60 mmo l/L 的水合氯醛 (0.35 g/kg)麻醉 。迅速开胸
取出心脏 ,置于95%O2 和 5%CO2 混合气体充分饱和
4 ℃的 K-H(NaC l 118.3 mmo l/L 、KCl 4.74 mmol/ L 、
CaCl2 1.2 mmo l/L 、KH2 PO 4 1.18 mmol/L 、MgCl2
1.2 mmol/ L 、NaHCO 3 24.9 mmol/ L 、Gluco se(葡萄
糖)11 mmol/L , HCl调节 pH 值为 7.4)液中 ,然后
将心脏固定于 Langendof f装置上 ,用 95% O2 和 5%
CO2 混合气体充分饱和的 K-H 缓冲液恒压逆行灌
流 。剪开左心耳 ,球囊从左心耳插入左心室 ,球囊内
压调至 5 ～ 10 mmHg 。球囊导管连接压力换能器 ,
与生物多导仪相连 ,连续记录心功能左心室舒张压
(LVEDP)、左心室收缩压(LVSP)、左心室发展压
(LVDP , LVDP = LVSP - LVEDP),生物记录软件
自动分析左心室压力升高速率 、左心室压力降低速
率 以及心率(H R), 以计滴器实时记录冠脉流量
(CF)。
新鲜乌头草灌注离体心脏分组给药处理如下:
75中国民间疗法 2011年 7月第 19卷第 7期　
药理研究中国民间疗法　　　　　　　　　
CHINASNATUROPATHY, July.2011, Vol.19 No.7　　
①对照组:以 K-H 液平衡灌流 100 min;②高剂量
组:以 K-H 液平衡灌流 30 min ,改用含 75 μg/ml 天
山乌头草的 K-H 液灌流 10 m in , 以 K-H 液再灌流
60 min;③中剂量组:以 K-H 液平衡灌流 30 min ,改
用含 70μg/ml 天山乌头草的 K-H 液灌流 10 min ,以
K-H 液再灌流 60 m in;④低剂量组:以 K-H 液平衡
灌流 30 min ,改用含 60μg/ml天山乌头草的 K-H 液
灌流 10 min ,以 K-H 液再灌流 60 min 。以生理记录
仪记录灌流全过程心功能变化情况 , 以软件自动分
析再灌注 5 m in 、10 min 、20 m in 、30 min 、40 m in 、
50 min和 60 m in时间点各指标情况以反映心功能状
况 。以给药前 30 min 数值为基础值 100%, 实验结
果以缺血前心功能百分率表示 。
治疗结果
1.组织病理学检查结果:组织切片检查各器官均
无明显差异。
2.离体心脏灌注数据:
(1)新鲜乌头草对心率的影响:与对照组相比 ,
给药组给药开始的很短的时间内心脏有明显心率失
常;随着时间的增加 ,心脏心率有升高的现象 。具体
见表 1 。
表 1　乌头草给药后各组间心率变化情况
组别 给药后心率
2 min 5 min 8min 10 min 20 min 30 min 40 min 50 min 60 min 70 min
对照 97.02 90.68 98.71 97.54 98.02 98.39 99.79 99.07 100.07 100.53
60ul 97.03 78.26 318.33 66.38 360.03 345.79 300.02 236.33 134.19 121.86
75ul 102.19 96.56 353.68 394.92 396.78 398.10 393.34 349.72 299.76 229.18
　　(2)新鲜乌头草对左心室发展压的影响:与对照组
相比 ,给药组在给药后短时间内下降 ,停药之后略有恢
复 ,具体见表 2。说明乌头草使得心肌收缩功能明显
下降 。
表 2　乌头草给药后各组之间 LVDP 变化情况
组别 给药后心率
2 min 5 min 8 min 10 min 20 min 30 min 40 min 5 0min 60 min 70 min
对照 100.64 100.24 96.17 99.56 100.02 97.28 98.13 95.7 6 100.01 96.56
60ul 94.97 100.44 19.04 7.46 13.29 14.64 18.13 26.6 7 45.60 45.65
75ul 86.80 94.82 15.19 11.41 10.11 10.60 19.79 60.7 9 65.42 70.32
　　(3)新鲜乌头草对冠脉流量的影响见表 3 。
表 3　乌头草给药后各组之间 CF变化情况
组别 给药后心率
2 min 5 min 8 min 10 min 20 min 30 min 40 min 5 0min 60 min 70 min
对照 99.53 96.70 99.05 100.04 99.77 98.58 94.34 95.2 8 100.30 97.17
60ul 94.06 86.14 91.09 92.57 80.69 73.76 64.36 56.9 3 51.98 48.02
75ul 98.32 93.28 91.60 92.44 79.83 78.15 71.43 52.1 0 49.58 47.06
　　与对照组相比 ,给药组在给药后冠脉流量呈下降趋
势 ,停药后没有恢复 ,仍有降低的趋势 。
结论
综上所述 ,在乌头草对小鼠急性毒性中灌胃给药的
LD 50是 7.749 g/kg 。可能由于乌头草急性毒性发作
时间较短 ,没有明显的组织学变化 。通过离体心脏灌流
实验表明 ,给药后心脏心率失常 ,左心室发展压下降 ,冠
脉流量下降 ,再次证明了乌头草导致小鼠死亡的主要原
因是其心脏毒性。
参考文献
[ 1]管小江 , 李光来 , 张忠民 , 等.新疆天山乌头草急性中毒 41
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(收稿日期 2011-02-03)
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76 　中国民间疗法 2011年 7月第 19卷第 7期