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龙胆泻肝丸(含白木通)对胆汁淤积大鼠利胆保肝作用的实验研究



全 文 :   
表 3 血府逐瘀颗粒对急性心肌缺血犬血清酶的影响( x±s , n=6)
组别 剂量 g·kg-1 LA mmol·L-1 FFA umol·L-1 MDA nmol·mL-1 SOD U·mL-1 GSH-Px U·mL-1
模型组 — 6.10±1.85 655.1±140.1 16.00±1.49 25.16±3.42 180.40±22.60
XFZHYO 5.0 3.99±0.801) 460.0±106.01) 13.87±1.731) 27.45±2.48 211.13±24.041)
XFZHYG 2.5 4.44±1.15 353.0±119.12) 13.86±1.601) 28.94±2.081) 214.02±28.931)
5.0 4.00±0.771) 328.3±142.92) 12.04±1.962) 30.16±4.001) 220.14±32.051)
对急性心肌缺血犬冠脉循环的影响 ,结果 XFZHYG
可降低麻醉犬冠脉阻力 ,增加冠脉流量 。
心肌缺血后出现血乳酸水平的增高 , XFZHYG
可使急性心肌缺血后 6 h犬血清 LA明显降低 ,避免
了酸中毒的发生 。正常心肌以消耗 FFA 为主要能
源 ,在急性心肌缺血时心肌的有氧氧化过程障碍 ,对
脂肪酸的氧化和对乳酸的再利用减少 ,使血中 FFA
显著提高 。FFA 过高会造成心肌损害 ,增加心肌耗
氧量 ,加重心肌缺血 ,扩大梗塞面积[ 5] 。本实验结果
表明 , XFZHYG 能明显抑制急性心肌缺血犬血清
FFA水平提高 ,纠正心肌缺血时FFA代谢紊乱 。
缺血心肌产生的氧自由基可进入血循环而使外
周血中氧自由基含量增多 。因此 ,可以通过MDA含
量及内源性抗氧化酶(SOD 、GSH-Px 等)活性变化评
定氧自由基对心肌造成的损伤程度[ 7] 。XFZHYG 可
使急性心肌缺血后 6 h犬血清 MDA含量明显降低 ,
并明显增加血清 SOD 、GSH-Px 活性 ,表明其可能通
过对抗脂质过氧化反应 ,保护内源性抗氧化酶活性
而发挥抗心肌缺血作用。
本实验结果表明 ,血府逐瘀颗粒能降低冠脉阻
力 ,增加冠脉流量 ,并使急性心肌缺血后犬血清酶等
活性含量发生改变 ,对缺血心肌具有保护作用 ,其作
用强度与血府逐瘀口服液相似 ,为临床应用提供了
实验依据。
[参考文献]
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龙胆泻肝丸(含白木通)对胆汁淤积大鼠
利胆保肝作用的实验研究
董 伟 ,梁爱华* ,薛宝云 ,王金华 ,李春英 ,王秀坤
(中国中医科学院中药研究所 ,北京 100700)
  [ 摘要]  目的:研究含白木通龙胆泻肝丸对胆汁淤积大鼠的利胆保肝作用。方法:大鼠一次性灌胃给予 100 mg·kg-1α-萘
异硫氰酸酯(ANIT)花生油建立胆汁淤积模型。测定给药后 0.5 , 1 , 1.5 , 2 , 3 , 4 h 胆汁流量 , 血清 AST、ALT、ALP、TBIL、DBIL、CHO、
SOD、MDA、GSH 水平 ,胆汁中 TBIL、DBIL、CHO含量并观察肝组织病理变化。结果:含白木通的龙胆泻肝丸能显著增加 ANIT致
胆汁淤积大鼠的胆汁分泌量 ,并降低肝损伤及胆管损伤的程度 , 有降低血清 TBIL、DBIL水平的趋势。但对模型大鼠血清 ALT、
  
[ 收稿日期]  2007-03-26
[ 通讯作者]  *梁爱华 , Tel:(010)84035683;E-mai l:liangaihua@sinna.com
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AST、SOD、MDA、GSH 水平无明显影响。结论:含白木通龙胆泻肝丸有一定的利胆保肝作用。
[ 关键词]  龙胆泻肝丸;白木通;胆汁淤积
[ 中图分类号]  R285.5  [文献标识码]  B  [ 文章编号]  1005-9903(2007)10-0037-04
Cholagogic Effect and Hepatoprotective Effect of Longdan Xiegan Pill
(with Caulis Akebial Australis)on Experimental Cholestasis in Mice
DONGWei ,LIANG Ai-hua* , XUE Bao-yun ,WANGJin-hua , LI Chun-ying ,WANG Xiu-kun
(Institute of Chinese Materia Medica , China Academy of Chinese Medical Sciences , Beijing 100700 , China)
[ Abstract]  Objective:To investigate the cholagogic effect and hepatoprotective effect of Longdan Xiegan Pill on
the Cholestasis model in mice.Methods:The cholestasis model was induced by percutaneous 100 mg·kg-1α-Naphthyl
isothiocyanate(ANIT).Bile flow , the levels of AST ,ALT , ALP ,TBIL , DBIL , CHO , SOD ,MDA ,GSH inserum and TBIL ,
DBIL ,CHO in the bile were measured.Pathological changes of the liver tissue were observed under opticmicroscope.
Results:Longdan Xiegan Pill(with Caulis Akebiale Australis)significantly highered Bile flow and markedly ameliorated
the liver damage(P <0.05).Conclusion:Longdan Xiegan Pill(with Caulis Akebial Australis)can protect against
cholestasis induced by ANIT in mice.
[ Key words]  Longdan Xiegan Pill;Caulis Akebiale Australis;cholestasis
  龙胆泻肝丸由龙胆 、柴胡 、黄芩 、栀子 、泽泻 、木
通 、车前子 、当归 、地黄 、炙甘草组成 。临床用于治疗
肝胆湿热 。该方中的木通几十年来一直使用马兜铃
科植物关木通(Aristolochia manshuriensis Kom.),以致
服龙胆泻肝丸导致肾功能衰竭的报道时有发生。
2003年6月国家食品药品监督管理局发出通知取消
关木通药用标准 ,并对含关木通的制剂用木通科木
通进行替换 。本实验采用α异硫氰酸酯(ANIT)造成
胆汁淤积模型 ,研究用白木通替代关木通后 ,龙胆泻
肝丸在此模型上是否具有清肝利胆作用 。
1 材料
1.1 实验动物 Wistar大鼠 ,雄性;体重(240±20)
g;由北京维通利华实验动物技术有限公司提供 ,合
格证号:SCXK(京)2002-0003。
1.2  药品  龙胆泻肝丸提取物(含白木通)
(LDXGT)(每 100 g 生药得提取物 11 g),龙胆泻肝丸
原粉(含白木通)(LDXGY)(批号 0504-01075),以上
龙胆泻肝丸药味组成及方中药物比例与《中国药典》
2005版相同 ,其中的木通为白木通 ,均由北京同仁堂
集团公司提供。胆乐胶囊(DL)(批号 050304),由浙
江永宁制药厂生产。
1.3 试剂 ANIT ,Sigma公司生产(试验时用食用花
生油配成 10 mg·mL-1溶液)。天冬氨酸氨基转移酶
(AST)试剂盒(赖氏法)(批号 041008),丙氨酸氨基转
移酶(ALT)试剂盒(赖氏法)(批号 041102),碱性磷
酸酶(ALP)试剂盒(金氏法)(批号 050809),总胆红
素(TBIL)试剂盒(化学比色法)(批号 050606),直接
胆红素试剂盒(DBIL)(化学比色法)(批号 050425)以
上均由北京北化康泰临床试剂有限公司生产。超氧
化物歧化酶(SOD)试剂盒(批号 20050715),丙二醛
(MDA)试剂盒(批号 20050716),谷胱甘肽(GSH)试
剂盒 ,(批号 20050722),以上均由南京建成生物工程
研究所生产 。BCA 蛋白质定量检测试剂盒 ,由美国
PIERCE 生物技术公司生产 。总胆固醇试剂盒
(CHOD-PAP法)(批号 180091),由中生北控生物科
技股份有限公司生产 。
1.4 仪器  国产 1 万电子分析天平(型号:AEU-
210),德国产半自动生化分析仪(型号:HUMALYZER
2000), 美 国 产 低 温 高 速 离 心 机 (型 号:
SORVALLT21)。
2 方法
2.1 分组给药 按体重将动物随机分为 7组 ,为:A
正常对照组 ,B模型组 ,C胆乐胶囊750mg·kg-1组 ,D
龙胆泻肝丸提取物(含白木通)5.0 g 生药 kg 组 , E
龙胆泻肝丸提取物(含白木通)2.5 g生药 kg 组 ,F 龙
胆泻肝丸提取物(含白木通)1.25 g 生药 kg 组 ,G 龙
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胆泻肝丸原粉(含白木通)2.5 g 生药 kg组 。
(C ~ G)组每日灌胃给药 1次 ,连续 8 d 。A和 B
组灌胃同体积的蒸馏水。其中第 5 d给药1 h后 ,除
A组蒸馏水灌胃外 ,其他各组大鼠按 100 mg·kg-1 1
次性灌胃ANIT 花生油。第 8 d实验前全部动物禁
食不禁水 16 h。
2.2 胆汁及血液的收集与检测 各鼠以 20%乌拉
坦0.005 mL·g-1腹腔注射麻醉 ,仰位固定于板上 ,沿
腹正中线切开约 2 cm ,打开腹腔 ,找到胃幽门部 ,翻
转十二指肠 ,在十二指肠降部肠系膜中找到白色有
韧性的胆管 ,分离后在其下穿二根细线 ,结扎乳头
部 ,用聚氯乙烯医用塑料管向肝脏方向刺入 ,结扎固
定塑料管 ,给药 ,并开始计时 ,收集胆汁。实验过程
中创面用生理盐水纱布覆盖以保持经常湿润。分别
收集药后 0.5 , 1 , 1.5 , 2 , 3 , 4 h 内各组鼠胆汁流量。
按试剂盒所述检测 4 h累计收集胆汁中 TBIL 、BBIL 、
CHO含量 。4 h 后股动脉取血 ,分离血清(3 000 r·
min
-1离心 10 min),检测血清 AST 、ALT 、ALP 、TBIC 、
DBIL、CHO 、SOD ,MDA和GSH水平。
2.3 病理观察 取肝左叶 ,部分用 10%甲醛溶液固
定 ,常规石蜡包埋切片 ,苏木精-伊红染色 ,光镜下观
察肝组织病理学变化。肝组织损伤程度分为 4级 ,0
级(-):肝组织结构正常 ,无明显变性 、坏死及炎症
细胞浸润;1级(+):肝小叶结构尚正常 ,可见明显
的混浊肿胀 ,气球样变或脂肪变性 ,散在点状坏死;2
级(++):肝小叶结构不清 ,可见明显的灶状坏死 ,
伴有炎症细胞浸润;3 级(+++):肝小叶结构不
清 ,可见明显的片状坏死 ,伴有炎症细胞浸润。
2.4 统计学处理  实验数据经 SPSS 10.0软件统
计 ,进行单因素方差分析。
3 结果
3.1 对胆汁分泌量的影响 如表1所示 ,模型组大
表 1 龙胆泻肝丸提取物(含白木通)对胆汁淤积性大鼠胆汁分泌量影响( x±s)
组别 剂量(g 生药 kg) n
胆汁分泌量(mL)
0.5 h 1 h 1.5 h 2 h 3 h 4 h
正常组 — 10 0.40±0.082) 0.71±0.192) 1.02±0.262) 1.27±0.322) 1.84±0.482) 2.39±0.611)
模型组 — 10 0.26±0.08 0.45±0.14 0.65±0.18 0.88±0.23 1.28±0.32 1.78±0.45
DL 0.75 11 0.30±0.15 0.52±0.23 0.75±0.32 0.96±0.42 1.39±0.59 1.90±0.82
LDXGT 5.00 13 0.35±0.12 0.66±0.211) 0.93±0.281) 1.18±0.35 1.69±0.49 2.26±0.64
LDXGT 2.50 12 0.39±0.14 0.73±0.242) 1.05±0.331) 1.35±0.43 1.94±0.62 2.55±0.80
LDXGT 1.25 12 0.34±0.10 0.58±0.19 0.82±0.29 1.11±0.36 1.56±0.48 1.99±0.47
LDXGY 2.50 12 0.35±0.11 0.67±0.241) 0.94±0.321) 1.20±0.40 1.70±0.54 2.41±0.91
  注:与模型组比较1)P<0.05;与模型组比较2)P<0.01(下同)
鼠胆汁分泌量与正常组比较在观察的各时间点均明
显下降(P<0.01)。各给药组胆汁分泌量不同程度
高于模型组 。其中 LDXGT 5.0 g 生药 kg 组 、LDXGT
2.5 g 生药 kg组 、LDXGY 2.5 g·kg-1组在给药后 1 h 、
1.5 h胆汁分泌量与模型组相比显著增加 。
3.2 对血清TBIL 、DBIL 、CHO的影响 如表2所示 ,
模型组大鼠血清 TBIL 、DBIL、CHO均上升 ,与正常组
有明显差异(P <0.01)。而所有给药组血清 TBIL 、
DBIL 、CHO与模型组比较无明显差异 ,但 LDXGT 大 、
中剂量和 LDXGY组对血清 TBIL 、DBIL 有降低趋势。
3.3 对胆汁TBIL 、DBIL 及CHO的影响 表3显示 ,
与正常组比 ,模型组大鼠胆汁 TBIL、DBIL 含量显著
升高(P <0.01),胆汁CHO显著降低(P<0.01)。所
有给药组胆汁 TBIL 、DBIL 、CHO 水平与模型组比较
差异不显著。
表 2 龙胆泻肝丸提取物(含白木通)对胆汁淤积性大鼠
血清 TBIL、DBIL及 CHO的影响( x±s)
组别 剂量(g生药 kg) n
血清 TBIL
(mg·dL-1)
血清 DBIL
(mg·dL-1)
血清 CHO
(mmol·L-1)
正常组 — 10 0.63±0.282) 0.57±0.282) 2.91±0.992)
模型组 — 10 4.30±2.01 4.05±2.46 10.85±2.58
DL 0.75 12 5.22±2.93 4.45±2.38 9.70±3.13
LDXGT 5.00 13 3.63±2.71 2.92±1.76 8.83±2.26
LDXGT 2.50 12 3.63±2.98 2.85±1.73 9.34±2.60
LDXGT 1.25 12 3.85±2.05 3.73±2.11 10.95±3.80
LDXGY 2.50 12 3.38±1.75 3.08±1.81 8.72±1.80
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表 3 龙胆泻肝丸提取物(含白木通)对胆汁淤积性大鼠
胆汁 TBIL、DBIL、CHO的影响( x±s)
组别 剂量(g生药 kg) n
胆汁 TBIL
(mg·dL-1)
胆汁DBIL
(mg·dL -1)
胆汁CHO
(mmol·L -1)
正常组 — 10 1.30±0.482) 5.50±4.932) 0.53±0.162)
模型组 — 10 10.60±3.27 15.50±7.62 0.23±0.04
DL 0.75 11 15.86±6.80 22.18±9.48 0.21±0.03
LDXGT 5.00 13 12.42±8.08 16.23±14.43 0.24±0.06
LDXGT 2.50 12 10.54±4.84 12.54±10.76 0.23±0.16
LDXGT 1.25 12 12.38±3.88 15.92±6.49 0.23±0.12
LDXGY 2.50 12 11.42±5.85 14.67±10.68 0.23±0.03
3.4 对血清 ALT 、AST 、ALP 的影响 模型组大鼠血
清ALT 、AST 、ALP 升高 , (与正常组比较 P <0.01)。
所有给药组血清 ALT 、AST 、ALP 水平与模型组比较
无明显差异。
3.5 对血清 MDA 、SOD 、GSH 的影响  模型组大鼠
血清MDA水平升高(与正常组比较 P <0.01),血清
SOD及GSH 水平与正常组比较无明显变化 。各给
药组血清 SOD 、MDA 、GSH 水平与模型组比较无明显
差异 。
3.6 对肝脏组织学影响 病理检测模型组大鼠发
生肝细胞坏死和胆管损伤 。肝细胞坏死多为小灶性
散在发生 ,也有大灶性片状坏死 ,肝小叶中央静脉扩
张或内膜脱落。毛细胆管及汇管区较大的胆管上皮
细胞肿胀 、坏死 、脱落 ,胆管腔缩小 ,部分胆管扩张以
及胆管增生。表 4所示为肝细胞坏死和胆管损伤的
半定量积分。各给药组肝细胞坏死不同程度地轻于
模型组 ,其中 LDXGY 2.5 g 生药 kg 组和 LDXGT 2.5
g 生药 kg组与模型组相比差异显著(P <0.01)。
4 讨论
龙胆泻肝丸作为治疗肝胆湿热的代表方 ,临床
应用广泛 ,疗效确切。本实验通过给大鼠灌胃 ANIT
造成胆汁淤积模型 ,观察其对胆汁流量 ,胆汁成分 ,
血清胆红素等的影响 ,研究其清肝利胆的作用 。
  李延福[ 1] 对在临床上诊断明确的 66例肝脏疾
病病例肝活组织切片观察分析 ,发现湿热型的病理
变化有显著的肝细胞内胆汁潴留及较明显胆管内淤
胆 ,大部分有汇管区或间质慢性炎性细胞浸润 。白
  
表 4 龙胆泻肝丸(含白木通)对胆汁淤积大鼠
肝组织损伤积分的影响( x±s)
组别 剂量(g 生药 kg) n 肝组织损伤积分
正常组 — 10 0.00±0.00
模型组 — 10 1.35±0.58
DL 0.75 12 1.54±0.50
LDXGT 5.00 13 1.04±0.62
LDXGT 2.50 12 0.71±0.502)
LDXGT 1.25 12 1.12±0.31
LDXGY 2.50 12 0.83±0.622)
玉良[ 2] 对病毒肝炎作肝穿活检分析表明 ,肝胆湿热
型的病理改变特点为肝细胞淤胆 ,肝细胞色素颗粒
沉着以及小胆管扩张等。ANIT 在动物体内可转化
为有肝毒性的代谢产物产生肝毒性 。其病理特点为
小叶间胆管增生 ,胆管上皮细胞肿胀 ,坏死 ,部分坏
死的上皮细胞脱落后阻塞胆管 ,肝细胞变性坏死 ,血
清 AST 、ALT 、TBIL 显著升高等胆汁淤积的生化改
变[ 3 , 4] 。由于ANIT造成胆汁淤积模型病理特点部分
与临床一致 ,因此本实验采用了该模型来研究龙胆
泻肝丸治疗肝胆湿热的作用。
本实验发现含白木通的龙胆泻肝丸能显著增加
ANIT致胆汁淤积大鼠的胆汁分泌量 ,并降低肝损伤
及胆管损伤的程度 ,有降低血清 TBIL 、DBIL 水平的
趋势。这说明含白木通龙胆泻肝丸具有一定的利胆
保肝作用 ,白木通可以替代关木通 。同时发现同剂
量的原粉与提取物作用相近 ,这说明提取物保留了
原方的作用 ,但用药更加便捷。
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