全 文 ：漆姑草中总黄酮提取工艺研究与含量测定
黄筑艳，孙 瑶
(贵州大学化学与化工学院，贵州 贵阳 550003)
摘 要:采用正交实验进行提取工艺优选，研究了漆姑草中总黄酮的提取工艺并测定总黄酮的含量。用芦
丁作对照品，硝酸铝做显色剂，测定波长 508 nm，紫外分光光度法测定漆姑草中总黄酮的含量。最佳提取工艺条件
是:80%甲醇，料液比为 1∶20，浸提时间为 4 h，提取温度为 50 ℃。最佳工艺条件下，测定漆姑草中总黄酮的含量
为 11． 768%。本提取工艺方法简单、合理，是漆姑草中黄酮类化合物的最佳提取工艺。
关键词:漆姑草;总黄酮;正交实验;含量测定
Study on the Content and the Extraction Process of the Total Flavonoids
from Sagina japonica (SW1)Ohwi
HUANG Zhu － yan，SUN Yao
(College of Chemistry and Chemical Engineering，Guizhou University，Guizhou Guiyang 550003，China)
Abstract:Using the optimized orthogonal experiment，the extracting technology and content of total flavonoids of Sa-
gina japonica (SW1)Ohwi were studied． The content of total flavonoids extracted from Sagina japonica (SW1)Ohwi by
orthogonal experiment was determined with ultraviolet spectrophotometry at 508 nm，using rutin as reference substance and
aluminum nitrate as chromogenic agent． The optimum extraction condition was that the concentration of ethanol was 80%，
the ratio of material to liquid was 1∶20，the extraction time was 4 h，and the extraction temperature was 50 ℃ ． The total
flavonoids content was 11． 768% ． The method was simple，feasible，and was the optimum extraction process of the total
flavonoids from Sagina japonica (SW1)Ohwi．
Key words:Sagina japonica (SW1)Ohwi;total flavonoids;orthogonal experiment;assay
作者简介:黄筑艳(1973 －) ，女，贵州大学副教授，硕士学位，主要从事天然药物化学的研究。
漆姑草(Sagina japonica(SW1)Ohwi) ，又名漆姑、珍
珠草、瓜槌草、牛毛粘、地松、大龙叶、羊儿草等，为石竹科
植物漆姑草属植物。生于山野、庭院、路旁等阴湿处，分
布于江苏、四川、湖南、湖北、贵州、云南等地［1］。常用于
治疗漆疮、秃疮、痈肿、瘰疬、龋齿、小儿乳积、跌打内伤。
漆姑草叶苦，性凉;有散结消肿，解毒止痒之功效［2］。文
献报道其以具有一定的抗肿瘤活性的黄酮类成分为
主［3］。而有关漆姑草总黄酮含量测定方面的研究未见报
道。本文对漆姑草中的黄酮类化合物进行了提取工艺研
究，并对漆姑草中的黄酮进行了含量测定。为漆姑草的
开发和利用奠定基础。
1 仪器与材料
1． 1 仪器
UV9100B紫外 /可见分光光度计，北京莱伯泰科仪器
有限公司。
1． 2 材料
干燥的漆姑草全草购于贵阳市药材市场，经贵阳中
医学院陈德媛教授鉴定为石竹科植物漆姑草(Sagina
japonica(SW1)Ohwi) ，将漆姑草全草剪碎后，作为实验
粗品袋装备用。芦丁对照品购于中国药品生物制品鉴
定所。所用试剂均为分析纯。
·95·2011 年 39 卷第 19 期 广州化工
2 方法与结果
2． 1 对照品溶液的制备
精密称取在 120 ℃下减压干燥至恒重的芦丁对照品
21． 2 mg用甲醇溶解，并完全转入 100 mL容量瓶中，用甲
醇定容，摇匀得浓度为 0． 212 mg /mL的对照品溶液。
2． 2 测定波长的确定
分别取标准溶液和供试液溶液 1 mL，置于 10 mL
容量瓶中，再分别加入 5%NaNO2 溶液 0． 3 mL，混匀，放
置 6 min，加 10% Al(NO3)3 溶液 0． 3 mL，混匀，放置
6 min，加 4%NaOH溶液 4 mL，再加水至刻度，摇匀，放
置 15 min。以不加标准液和供试液溶液的相应溶液为
空白，在 200 ～ 600 nm 范围内测定吸光度值，结果表明
标准液及供试液溶液均在 508 nm 处有最大吸收，故选
508 nm为测定波长。
2． 3 标准曲线的绘制
精密量取上述对照品溶液 0，1． 0，2． 0，3． 0，3． 5，
4． 0，5． 0 mL置于 10 mL容量瓶中，分别加 5%NaNO2 溶
液 0． 3 mL，混匀，放置 6 min，加 10%Al(NO3)3 溶液 0． 3
mL，混匀，放置 6 min，加 4%NaOH溶液 4 mL，再加水至
刻度，摇匀，放置 15 min。以第 1 号为空白，在 508 nm
波长处测定吸光度 A，以测定吸光度(A)对溶液浓度
(C)进行回归，得线性方程 y = 0． 6395x + 0． 0148，相关
系数r = 0． 9992。可见，在测定浓度范围 0． 212 ～ 1． 06
mg /mL内线性关系良好。
2． 4 方法学考察
2． 4． 1 精密度考察
精密量取同一供试液溶液 1 mL，按“2． 5． 2”项下方
法操作重复进行 7 次。结果见表 1。RSD为 0． 40%，表
明本方法精密度很好。
表 1 精密度实验结果
次数 吸光度 RSD /%
1 0． 1540
2 0． 1536
3 0． 1530
4 0． 1523
5 0． 1527
6 0． 1528
7 0． 1525
0． 40
2． 4． 2 稳定性考察
取同一供试液溶液，依法显色，自加完显色剂开始，
每隔 10 min测定吸收度 1 次，RSD为 2． 16%，表明供试
品溶液在 80 min内测定基本稳定，见表 2。
表 2 稳定性实验结果
间隔 /(t /min) 吸光度 RSD /%
0 0． 1409
10 0． 1391
20 0． 1417
30 0． 1423
40 0． 1407
50 0． 1396
60 0． 1377
70 0． 1339
80 0． 1342
2． 21
2． 4． 3 重现性实验
取同一批样品，按供试液溶液的制备方法测定其含
量，重复进行 5次，结果表明该方法重现性良好，见表 3。
表 3 重现性实验结果
序号 吸光度
浓度 C
/(mg /mL)
平均 C
/(mg /mL)
RSD /%
1 0． 1442 0． 202
2 0． 1420 0． 199
3 0． 1434 0． 201 0． 201 1． 03
4 0． 1413 0． 198
5 0． 1448 0． 203
2． 4． 4 回收率试验
取已知含量的 9 份供试液溶液各 1 mL，分 3 组，分
别精密加入 0． 212 mg /mL的芦丁对照品溶液 0． 5、1． 5、
2 mL，按“2． 5． 2”项下方法显色，于 508 nm 处测吸光
度，结果见 4。
表 4 回收率试验结果
取样量
m/μg
加入量
m/μg
测得值
m/μg
回收率
/%
平均回收率
/%
RSD
/%
319． 5 106 505． 9 98． 3
319． 5 106 500． 5 99． 4
·06· 广州化工 2011 年 39 卷第 19 期
续表
319． 5 106 498． 2 99． 9
319． 5 318 712． 3 99． 6
319． 5 318 705． 4 100． 6 99． 8 0． 76
319． 5 318 709． 8 100． 0
319． 5 424 809． 7 100． 7
319． 5 424 820． 3 99． 4
319． 5 424 811． 5 100． 5
2． 5 提取工艺优化
2． 5． 1 正交实验
将干燥漆姑草剪碎，分别精密量取 5 g漆姑草 9 份，
选择甲醇浓度、浸提温度、料液比、浸提时间等 4 个因素，
每个因素选择 3个水平，编制因素水平表。按 L9(3
4)正
交设计方案进行实验。
表 5 漆姑草总黄酮提取工艺因素水平表
水平
A
甲醇浓度 /%
B
浸提温度 /℃
C
料液比
D
浸提时间 /h
1 60 40 1∶10 2
2 70 50 1∶15 3
3 80 60 1∶20 4
2． 5． 2 供试品的含量测定
精密吸取各供试液溶液 1 mL，置于 10 mL 容量瓶
中，加 5% NaNO2 溶液 0． 3 mL，混匀，放置 6 min，加
10%Al(NO3)3 溶液 0． 3 mL，混匀，放置 6 min，加 4%
NaOH溶液 4 mL，再加水至刻度，摇匀，放置 15 min。以
相应试剂为空白，于 508 nm处测吸光度，通过标准曲线
计算总黄酮含量。
2． 5． 3 正交实验结果
以漆姑草总黄酮为指标进行分析，结果见表 6，由表
6可以看出最佳提取工艺为 A3B2C3D3，即 20倍 80%甲醇
50 ℃浸提 4 h。由表 7表示，甲醇浓度影响极其显著，其
余因素几乎没有影响。
表 6 漆姑草总黄酮提取工艺正交实验结果
实验号
A
甲醇浓度
/%
B
浸提温度
/℃
C
浸提时间
/h
D
料液比
总黄酮
含量
/%
1 1 1 1 1 1． 235
2 1 2 2 2 2． 324
续表
3 1 3 3 3 1． 563
4 2 1 2 3 3． 745
5 2 2 3 1 5． 895
6 2 3 1 2 3． 493
7 3 1 3 2 8． 124
8 3 2 1 3 9． 824
9 3 3 2 1 6． 481
K1 1． 707 4． 368 4． 851 4． 537
K2 4． 378 6． 014 4． 183 4． 647
K3 8． 143 3． 846 5． 194 5． 044
R 6． 436 2． 168 1． 011 0． 507
表 7 漆姑草总黄酮提取工艺方差分析表
方差来源 离差平方和 自由度 均方 F值 显著性
A 62． 73 2 31． 34 146． 90 ＊＊
B 7． 69 2 3． 85 18． 00
C 1． 59 2 0． 80 3． 71
D 0． 43 2 0． 21
2． 6 样品中总黄酮的测定
精密称取 5 g漆姑草，用 20 倍 80%甲醇在 50 ℃下
浸提 4 h，按“2． 5． 2”项下操作方法进行总黄酮的含量
测定，测得漆姑草总黄酮含量为 11． 768%。
3 结 论
(1)本研究表明，采用紫外分光光度法，以芦丁为
对照品，NaNO2 － Al(NO3)3 － NaOH 为显色剂，在 508
nm处测定吸收度值，用于漆姑草中总黄酮的含量测定，
效果良好。该方法灵敏快速，准确可靠。
(2)本研究通过正交实验分析出漆姑草中总黄酮
的最佳提取工艺为:以相当于药材 20 倍 80%甲醇在温
度为 50 ℃下浸提 4 h。
(3)在最佳提取工艺条件下，测定总黄酮含量为
11． 768%。
参考文献
［1］ 江苏新医学院．中药大辞典［M］．上海:上海科学技术出版
社，1985:2 575．
［2］ 《全国中草药汇编》编写组．全国中草药汇编(第二版，上
册) ［M］．北京:人民卫生出版社，1996:919．
［3］ 黄厚聘，程才芬，任光友，等． 漆姑草黄酮甙的抗肿瘤作用
及临床前药理研究［J］．贵阳医学院学报，1980，5(1) :67．
·16·2011 年 39 卷第 19 期 广州化工