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通城虎镇痛抗炎作用及急性毒性的实验研究



全 文 :激素水平降低,导致睾丸生精障碍、生殖能力受损。丝胶治疗
组大鼠睾丸 c-fos的表达明显高于糖尿病模型组大鼠。丝胶为
彩色蚕茧经浸泡、水煎、过滤、浓缩而成,是蚕茧中溶于水的具
有多种生物活性的蛋白质,其中的氨基酸以丝氨酸、天冬氨酸
和谷氨酸等为主,民间有将蚕茧开水浸泡用以控制血糖的验
方。本研究结果表明,丝胶可通过上调睾丸 c-fos 的表达,促进
精原细胞向精母细胞转化,提高生精细胞的增殖能力,促进精
子发生及睾酮分泌,从而提高糖尿病模型大鼠的生殖功能;但
具体机制有待进一步的探讨。
4 参考文献
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〔2010-07-27 收稿 2011-03-23 修回〕
(编辑 曹梦园)
通城虎镇痛抗炎作用及急性毒性的实验研究
韦健全 罗 莹 黄 健 潘 勇 薛 强 郑子敏 (右江民族医学院药理学教研室,广西 百色 533000)
〔摘 要〕 目的 研究通城虎的镇痛抗炎作用并进行它的急性毒性试验。方法 采用醋酸致扭体反应、热板法测定痛阈,观察通城虎的镇痛作
用;抗炎实验采用二甲苯致鼠耳肿胀法、角叉菜胶致大鼠足趾肿胀法和腹腔毛细血管通透性法;采用 Bliss法测定了其半数致死量(LD50)。结果 通
城虎能减少醋酸所致小鼠扭体次数,明显提高小鼠的痛阈;抑制二甲苯所致小鼠耳廓肿胀、角叉菜胶引起的大鼠足趾肿胀和醋酸所致小鼠腹腔毛细
血管通透性增加;其 LD50为 100. 1 g /kg,LD50的 95%可信限为 87. 2 ~ 115. 1 g /kg。结论 通城虎对实验动物模型具有显著的镇痛抗炎作用,使用时
一定要注意其不良反应。
〔关键词〕 通城虎;镇痛;抗炎;急性毒性
〔中图分类号〕 R969. 4 〔文献标识码〕 A 〔文章编号〕 1005-9202(2011)20-3960-03
Experimental study on analgesia and anti-inflammation and acute toxicity of Aristolochia fordiana Hemsl
WEI Jian-Quan,LUO Ying,HUANG Jian,et al.
Youjiang Medical College for Nationalities,Baise 533000,Guangxi,China
【Abstract】 Objective To study the effect of Aristolochia fordiana Hemsl (AFH)on anti-inflammation and analgesia and acute tox-
icity. Methods Hot-plate procedure and writhing test in mice were adopted in experimental analgesic model,and anti-inflammatory model of
mouse ear edema induced by xylene,rat paw edema induced by carrageenin and exudation of abdominal blood capillaries of mice were ap-
plied. Median lethal dose (LD50)was determined by Bliss method. Results AFH could significantly prolong the pain threshold on hot-
plate in mice,reduce the writhing times in mice. It could significantly inhibit the ear edema caused by xylene in mice,rat paw edema in-
duced by carrageenin,and exudation of abdominal blood capillaries of mice caused by acetic acid. LD50 of AFH was 100. 1 g /kg (crude
drug) ,its 95% confident limit was 87. 2 ~ 115. 1 g /kg (crude drug). Conclusions AFH has obvious effect on anti-inflammation and
should pay attention to its adverse reaction.
【Key words】 Aristolochia fordiana Hemsl;Analgesia;Anti-inflammation;Acute toxicity
基金项目:广西壮族自治区教育厅立项课题(桂教科研〔2006〕26 号)
第一作者:韦健全(1966-) ,男,讲师,主要从事中草药药理学、药学教育
与研究。
通城虎〔1,2〕,为马兜铃科植物通城虎 Aristolochia fordiana
Hemsl. 的根或会株及马兜铃全株,又名,五虎通城、定心草、天
然草、血萎、血藤暗消、一点血。性味苦、辛、温;小毒,具有祛
风、镇痛、消肿、解毒。主治风湿骨痛、胃脘痛、腹痛、咽喉炎、跌
打损伤、小儿惊风、毒蛇咬伤。本地民间常用其来治疗风湿痛
及其他疼痛;目前有关通城虎相关的药效学研究鲜见报道,为
此我们用现代药理学方法对其提取物的镇痛抗炎作用及急性
毒性进行了实验研究,为临床应用提供依据。
·0693· 中国老年学杂志 2011 年 10 月第 31 卷
1 材料与方法
1. 1 材料
1. 1. 1 药物 通城虎,2007 年 8 月购自百色市大菜市,经我院
附属医院中药房刘春荣副主任药师鉴定。药材在室温(25℃ ~
30℃)下晾干,粉碎备用。
1. 1. 2 药物制备 通城虎的提取:取粉碎后的通城虎药粉
800 g,用 10 倍水浸泡 1 h,煮沸 1 h,提取 2 次,过滤,合并滤液,
浓缩至 200 ml (每毫升提取液相当于 4 g生药) ,用时再配成相
应的浓度。吲哚美辛肠溶片,江苏亚邦爱普森药业有限公司,
生产批号 0710022。醋酸地塞米松片,浙江仙居制药厂,批号
070340。二甲苯(汕头市光华化学厂) ,批号 20061209。角叉菜
胶 (Sigma公司)。
1. 1. 3 动物 小白鼠,昆明种,体重 18 ~ 20 g;健康 Wistar 大
鼠,体重 180 ~ 250 g。均由广西医科大学实验动物中心提供,
许可证号:SCXK桂 2003-0003。
1. 1. 4 仪器 电子分析天平(AR1140 /C) ,奥豪斯(上海)公
司生产;YLS-6B智能热板仪、YLS-7B 足趾容积测量仪、YLS-Q4
耳肿打耳器,山东省医学科学院设备站生产;722 可见分光光度
计,上海精密科学仪器公司生产。
1. 2 方法
1. 2. 1 对醋酸致小鼠扭体反应的影响〔3〕 将健康昆明种小鼠
随机分为 5 组,每组 10 只,分别为:(1)空白对照组(生理盐水,
等容积) ;(2)阳性对照组(吲哚美辛 0. 01 g /kg) ; (3)通城虎
大、中、小剂量组(20、10、5 g /kg 通城虎)。灌胃给药 1 次
0. 1 ml /10 g,给药 60 min后,腹腔注射 0. 6%醋酸溶液 0. 2 ml /
10 g,记录 15 min内小鼠扭体反应(腹部内凹、伸展后肢、臀部
抬高、蠕行)次数,求药物对扭体反应的抑制率。抑制
率(%)=(生理盐水组平均扭体均数 - 试药组平均扭体均
数)/生理盐水组平均扭体均数 × 100%。
1. 2. 2 对小鼠热板痛反应的影响〔3〕 将雌性小鼠置于(55 ±
0. 5)℃的智能热板仪上,记录小鼠足底接触热板至出现舔后足
反应的潜伏期(s)为痛阈指标,剔除反应潜伏期 < 5 s 或 > 30 s
的或跳跃的小鼠。选取反应潜伏期在 10 ~ 30 s 内的合格小鼠
50 只,根据药前痛阈和体重随机分成 5 组,分组及剂量同
1. 2. 1,每组 10 只。各鼠测 2 次痛阈,取平均值作为基础痛阈。
然后灌胃通城虎或吲哚美辛 1 次,于药后 30,60,120 min 分别
测定各鼠的痛阈 1 次,痛阈值超过 60 s者以 60 s计算。比较各
组药后不同时间痛阈值组间差异,判断是否有镇痛作用。
1. 2. 3 对二甲苯致小鼠耳壳肿胀的影响〔3〕 分组及剂量同
1. 2. 1,阳性对照组(醋酸地塞米松 0. 005 g /kg) ,灌胃给药每天
1 次,连续 3 d,最后一次给药 1 h 后,各鼠左耳涂 0. 05 ml 二甲
苯致炎(在药学通风橱内进行)。致炎 30 min后颈椎脱臼处死
小鼠,剪下左右两耳,用直径耳肿打耳器(8 mm)在同一部位冲
下耳片,用电子天平称重,以左右耳片重量(mg)差值表示炎性
肿胀度并计算肿胀抑制率。肿胀抑制率(%) =(生理盐水组
平均肿胀度 -给药组平均肿胀度)/生理盐水组平均肿胀度 ×
100%。
1. 2. 4 对角叉菜所致足肿胀的影响〔3,4〕 大鼠 50 只,随机分
5组,分组及剂量同 1. 2. 3。实验前禁食 12 h(不禁水) ,测定每
鼠致炎前的右后足趾容积。灌胃给药每天 1 次,连续 3 d。末
次给药 60 min后,各大鼠右后足趾皮下注射 1%角叉菜0. 1 ml,
于注射后 0. 5 h、1 h、2 h、4 h、6 h分别测定各鼠右后足趾容积,
比较各组大鼠致炎后不同时间右后足趾肿胀率。肿胀
率(%)=(致炎后足趾容积-致炎前足趾容积)/致炎前足趾容
积 × 100%。
1. 2. 5 对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响〔4〕 取健康雄性小
鼠 50 只,分组及给药方法 1. 2. 3,末次给药后 1 h,小鼠尾静脉
注射 2%伊文思蓝溶液 0. 1 ml /10 g,随即腹腔注射 0. 6%醋酸
溶液 0. 2 ml /只,20 min后颈椎脱臼处死,剪开腹部肌肉,用6 ml
生理盐水分 3 次冲洗小鼠腹腔,收集冲洗液,4 000 r /min 离心
10 min,取上清液于 590 nm处比色,以吸收度 A 值判断小鼠腹
腔毛细血管的通透性。抑制率(%)=(对照组平均吸光度-给
药组平均吸光度)/对照组平均吸光度 × 100%。
1. 2. 6 急性毒性试验〔4〕 预试验,找出 0%动物死亡的最小
剂量(Dn)和 100%动物死亡的最大剂量(Dm)致死剂量,求出
组间比(r)。r = (Dm /Dn)
1 /(G-1),G为组数,本实验分为 5 个组,
剂量分别为 60,76. 6,97. 8,124. 9,160 g /kg(r = 1. 277,大 /小相
邻组剂量等比级数为 1∶ 0. 78) ,禁食 12 h,不禁水,正式实验时
分别灌胃给药一次,连续观察 7 d,记录动物死亡动物数及毒性
反应情况。死亡动物解剖后肉眼观察心、肝、肾、肺、脾等重要
器官改变。
1. 3 统计学分析 数据均以 x ± s表示,组间比较用 t检验。
2 结 果
2. 1 通城虎对醋酸致小鼠扭体反应的影响 见表 1。通城虎
20、10、5 g生药 /kg均能显著减少醋酸所致的小鼠扭体次数,与
生理盐水组比较有显著性差异,镇痛率与剂量相关。20 g 生
药 /kg通城虎与 10 mg /kg吲哚美辛对扭体反应的抑制率相当,
但在使用 10 mg /kg吲哚美辛时,小鼠活动与生理盐水组比较
明显减少。
表 1 通城虎对醋酸致小鼠扭体反应的影响(x ± s,n =10)
组别 剂量(g /kg) 扭体次数(次 /15 min) 抑制率(%)
生理盐水 - 35. 59 ± 6. 36 -
吲哚美辛 0. 01 10. 95 ± 2. 732) 69. 23
通城虎 20 11. 55 ± 2. 892) 67. 55
10 22. 70 ± 5. 272) 36. 22
5 29. 40 ± 4. 201) 17. 39
与生理盐水组比较:1)P < 0. 05,2)P < 0. 01;下表同
2. 2 通城虎对小鼠热板痛反应的影响 通城虎 20、10 g /kg两
个剂量能够能显著提高小鼠热刺激体表的痛阈,与生理盐水组
进行组间 t检验,差异具有统计学意义。见表 2。
2. 3 通城虎对二甲苯致小鼠耳壳肿胀的影响 20、10、5 g /kg
剂量通城虎对二甲苯所致的鼠耳肿胀的抑制作用非常显著(见
表3)。其中,5mg / kg地塞米松组作用最强,而且该组的小鼠
·1693·韦健全等 通城虎镇痛抗炎作用及急性毒性的实验研究 第 20 期
表 2 通城虎对小鼠热板痛反应时间的影响(x ± s,n =10)
组别
剂量
(g /kg)
痛阈值(s)
基础痛阈 30 min 60 min 120 min
生理盐水 - 16. 44 ± 4. 95 17. 29 ± 4. 81 18. 15 ± 4. 14 20. 68 ± 4. 48
吲哚美辛 0. 01 15. 93 ± 5. 09 24. 28 ± 4. 202) 31. 01 ± 4. 862) 37. 85 ± 5. 292)
通城虎 20 16. 04 ± 4. 85 22. 76 ± 3. 711) 28. 80 ± 4. 772) 33. 02 ± 5. 252)
10 16. 07 ± 4. 81 19. 03 ± 3. 24 26. 03 ± 5. 152) 29. 19 ± 5. 222)
5 16. 57 ± 5. 03 17. 95 ± 4. 42 20. 95 ± 4. 19 23. 32 ± 4. 63
表 3 通城虎对小鼠耳廓肿胀的影响(x ± s,n =10)
组别 剂量(g /kg) 肿胀度(mg) 抑制率(%)
生理盐水 - 29. 53 ± 4. 28 -
地塞米松 0. 005 11. 19 ± 3. 212) 62. 09
通城虎 20 13. 66 ± 3. 742) 53. 72
10 18. 30 ± 4. 292) 38. 01
5 22. 74 ± 3. 992) 22. 98
较其他组的明显活跃,可能与其兴奋中枢有关。
2. 4 通城虎对角叉菜所致足肿胀的影响 通城虎 20、10、
5 g /kg剂量均能显著抑制角叉菜胶所致小鼠足跖肿胀,而且效
果持续时间较长,但抑制程度较地塞米松稍弱。见表 4。
表 4 通城虎对角叉菜胶致大鼠足肿胀的影响(x ± s,n =10)
组别
剂量
(g /kg)
致炎后不同时间足趾肿胀率(%)
0. 5 h 1 h 2 h 4 h 6 h
生理盐水 - 27. 6 ± 5. 3 34. 1 ± 4. 7 40. 1 ± 5. 0 61. 7 ± 5. 8 83. 5 ± 5. 5
地塞米松0. 005 13. 7 ± 3. 82)18. 0 ± 4. 02)20. 6 ± 4. 02)25. 4 ± 4. 12)32. 0 ± 5. 22)
通城虎 20 19. 3 ± 4. 82)21. 5 ± 4. 92)22. 8 ± 5. 02)30. 3 ± 4. 42)43. 1 ± 4. 72)
10 23. 8 ± 4. 9 26. 6 ± 4. 62)29. 3 ± 4. 52)37. 1 ± 4. 42)56. 9 ± 5. 62)
5 26. 9 ± 5. 0 29. 6 ± 3. 61)35. 5 ± 4. 41)56. 1 ± 5. 51)77. 6 ± 5. 81)
2. 5 通城虎对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响 20、10、
5 g /kg剂量通城虎对醋酸引起的腹腔毛细血管通透性有非常显
著的抑制作用,各组的抑制率有明显的剂量依赖性。见表 5。
表 5 通城虎对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响(x ± s,n =10)
组别 剂 量(g /kg) 吸光度 抑制率(%)
生理盐水 - 0. 542 ± 0. 087 0
地塞米松 0. 005 0. 296 ± 0. 0752) 45. 3
通城虎 20 0. 313 ± 0. 0572) 42. 2
10 0. 354 ± 0. 0722) 34. 7
5 0. 411 ± 0. 0842) 24. 2
2. 6 急性毒性试验 小鼠灌胃通城虎后,大部分动物出现活
动减少、蜷曲、呼吸减慢,动物多在 72 h内中毒死亡。死亡动物
解剖肉眼观察,肾脏颜色较白且出现轻度水肿;心、肝、肺、脾等
重要器官未见出血、坏死等异常表现。小鼠灌胃通城虎的 LD50
为 100. 1 g /kg,LD50的 95%可信限为 87. 2 ~ 115. 1 g /kg。因此,
其在一定剂量范围内应用是安全的。
3 讨 论
本研究采用 2 种镇痛实验模型和 3 种实验性炎症模型,即
醋酸所致扭体和热板法以及二甲苯致小鼠耳廓肿胀、角叉菜胶
致小鼠足跖肿胀、小鼠腹腔毛细血管通透性炎症模型来检测药
物的抗炎镇痛活性。镇痛实验结果证明,通城虎 20、10 g /kg两
个剂量能抑制醋酸刺激腹腔黏膜引起的痛反应,减少各鼠的扭
体次数,提高小鼠热刺激体表的痛阈,延长热板痛反应时间。
说明通城虎具有镇痛作用。另外,通城虎对二甲苯所致小鼠耳
片肿胀、角叉菜胶所致小鼠足肿胀以及小鼠腹腔毛细血管通透
性均有显著的抑制作用,而且其抑制效果随剂量呈现一定的量
效关系。说明通城虎能够有效缓解炎症发生过程中的早期症
状。急性毒性实验的结果小鼠 ig通城虎的 LD50为 100. 1 g /kg,
LD50的 95%可信限为 87. 2 ~ 115. 1 g /kg。如按通城虎生药、药
理试验中动物间和动物与人体间的等效剂量换算〔5〕,以及成人
60 kg体重计算,即得相当于 486. 5 g 生药,根据化学物质的急
性毒性分级标准,它属于低毒,而本品推荐最高用量为 9 g,相
当于成人用量的 54 倍,由于不同地域的通城虎毒性成分含量
可能不同,在使用要特别注意观察。另一方面,通城虎根含马
兜铃酸 A,7-羟基马兜铃酸 A及木兰花碱马兜铃总酸性成分含
量为 0. 60%,可引起“马兜铃酸肾病”(AAN) ,出现进行性肾间
质纤维化;还可致癌致突变〔6〕。由于通城虎具有较好的镇痛作
用,在本地民间变为一种习用药材,在使用时一定要注意适应
证、剂量、疗程等,以防不良反应的发生。
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〔2011-01-31 收稿 2011-03-07 修回〕
(编辑 曹梦园)
·2693· 中国老年学杂志 2011 年 10 月第 31 卷