全 文 ：No.10.2007
收稿日期:2007-04-27
基金项目:贵州省科技基金[黔科合J字(2005)2017号]。
作者简介:王文平(1966—),女,博士研究生,教授,研究方向为天然产物化学。
野木瓜(StanuntoniaChinensis)是贵州省遵义正安
县独有的野生天然特产资源,属蔷薇科贴梗海棠灌木
丛植物。正安县野木瓜品质独具特色,具有果大、皮
薄、肉厚、肉质细嫩、味甘酸、气香等特点。木瓜在
中医药学中用途广泛, 《中医大辞典》、 《本草纲
目》、 《本草拾遗》等著名医著都记载了木瓜具有舒
筋活络,解渴生津、平肝和胃、祛风除湿等功效,能
治疗腰膝疼痛,脚气水肿,痢疾霍乱,心痛腹痛等疾
病,另外,还有镇咳、清暑利尿、解酒祛痰等作用。
现代研究表明,野木瓜含有丰富的有机酸、果胶、蛋
白质、多种氨基酸、多种维生素和多种矿物质[1]。
多糖是野木瓜中有效成分之一,天然植物提取
的多糖以酸性杂多糖的形式存在较多,糖醛酸是糖的
衍生物,对从天然植物中得到的多糖,在结构研究中
尤其对糖组成分析,确定其中是否含有糖醛酸残基具
有极为重要的意义[2]。由于糖类物质大都不吸收紫外
野木瓜多糖中糖醛酸含量测定
王文平 1,郭祀远 1,李 琳 1,王明力 2,梁桂娟 2
(1.华南理工大学轻工与食品学院,广州 510640;
2.贵州省发酵工程与生物制药重点实验室,贵阳 550003)
摘要:采用硫酸-咔唑比色法对野木瓜多糖中的糖醛酸含量进行测定,在波长 523nm处测定吸光度,
实验表明标准半乳糖醛酸浓度在1.67～16.67μg/mL之间呈良好的线性关系,该法简便易行,准确性高,
重现性好。探讨了测定过程的影响因素,并通过此法测得野木瓜多糖中糖醛酸平均含量为25.24%。
关键词:野木瓜多糖;半乳糖醛酸;硫酸咔唑法;含量测定
中图分类号:TS201 文献标识码:A 文章编号:1005-9989(2007)10-0084-03
Determinationofuronicacidsinpolysaccaridesfrom
StanuntoniaChinensis
WANGWen-ping1,GUOSi-yuan1,LILin1,WANGMing-li2,LIANGGui-juan2
(1.ColegeofLightIndustryandFoodScience,SouthChinaUniversityofTechnology,
Guangzhou510640;2.GuizhouProvinceKeyLabaratoryof
FermentationEngineeringandBiopharmaceutical,Guiyang550003)
Abstract:ThecontentofuronicacidsinpolysaccharidesfromStanuntoniaChinensiswasdeterminedbythe
methodofsulfuricacidcarbazolecolorimety,measuringtheabsorbencyon523nm.Theresultshownthatthere
isagoodlinearityrelationbetweentheabsorbencyandtheconcentrationofstandardgalacturonicacidinthe
rangeof1.67～16.7μg/mL.Themethodissimpleandavailable,accurateandreproducible.Theinfluencing
factorsinthemeasuringprocesswerediscussedinthispaper.Bythismethod,theaveragecontentofuronic
acidsinpolysaccharidesfromStanuntoniaChinensisis25.24%.
Keywords:StanuntoniaChinensispolysaccharides;galacturonicacid;sulfuricacidcarbazolecolorimety
method;contentdetermination
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光,必须将其转化衍生后方可进行测定。本实验采用
硫酸-咔唑法对野木瓜多糖中糖醛酸含量进行测定,
该方法的原理是多糖经水解生成己糖醛酸,在强酸中
与咔唑试剂发生缩合反应,生成紫红色化合物,产生
紫外吸收,其呈色强度与己糖醛酸含量成正比,且在
一定浓度范围内,该衍生物吸收值与糖醛酸含量呈线
性关系,可通过比色法对糖醛酸含量进行计算。本实
验对影响测定的因素进行了探讨,筛选出最佳实验条
件,并通过实验表明该方法是测定野木瓜多糖中糖醛
酸含量的有效方法。
1 主要材料、仪器及设备
1.1 主要材料
野木瓜:贵州遵义天楼野木瓜有限公司。
野木瓜多糖:实验室自制;D-半乳糖醛酸:
Sigma公司;咔唑、浓硫酸、石油醚、磷酸、无水乙
醇等均为国产分析纯试剂。
1.2 仪器设备
HH·SH-Z型电热恒温水浴锅:北京长安科学仪
器厂; ZK-828型电热真空干燥箱:上海跃进医疗器
械厂;DWF-180型电动植物粉碎机:河北省黄骅市
科研器材厂;SL2000电子天平:澳豪斯公司;
UV2550紫外可见分光光度计:岛津公司;N-1000V-
WB旋转蒸发仪:日本东京理化器械株式会社;DL-5
型离心机:上海安亭科学仪器厂。
2 实验方法
2.1 对照品溶液的配制
精密称取干燥至恒质量的半乳糖醛酸 10mg,用
适量的蒸馏水溶解,并定容于 100mL容量瓶中,配
成100μg/mL的对照品溶液。
2.2 供试品溶液的配制
精密称取野木瓜多糖10mg,加入蒸馏水溶解,并
定容于10mL容量瓶中,配制成浓度为1mg/mL溶液。
2.3 四硼酸钠-硫酸溶液的配制
精密称取 0.478g四硼酸钠溶解于 100mL浓硫酸
中备用[3]。
2.4 咔唑溶液的配制
精密称取咔唑75mg,溶解于50mL无水乙醇中,
配制成0.15%的咔唑溶液备用。
3.5 测定波长的选择
分别吸取对照品溶液、供试品溶液 1mL,置于
10mL具塞试管中,在冰水浴中分别加入四硼酸钠-硫
酸溶液 5mL,用漩涡混合器混匀,于沸水浴中加热
20min,取出后立即冷却至室温,加 0.15%咔唑溶液
0.2mL,摇匀,在室温下保持2h,另取1mL蒸馏水同
法操作作参比,在波长400～800nm扫描,结果(见图1)
表明,对照品和样品均在523nm处有最大吸收[4]。
2.6 标准曲线的制作
分别精密吸取对照品溶液 0、0.1、0.2、0.3、
0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0mL于10mL具塞试
管中,各管加水至 1mL,分别在冰水浴中加入四硼
酸钠-硫酸溶液5mL,用漩涡混合器混匀,于沸水浴
中加热 20min,取出后立即冷却至室温,加 0.15%咔
唑溶液0.2mL,摇匀,在室温下保持2h,在最佳测定
波长下测定其吸光度[5]。
2.7 样品中糖醛酸含量测定
取供试品溶液各0.1mL,同时做3个重复,以蒸
馏水同法操作为参比,按上述标准曲线的测定法,
分别测定其吸光度值,计算样品中糖醛酸的含量。
3 结果
3.1 标准曲线回归方程建立
用紫外分光光度计,以试剂空白参比,测定对
照品溶液吸光度,实验结果见表1。
得其线性回归方程式 Y=0.00946X-0.00978,r2=
0.99602,相关系数 r=0.9980,表明葡萄糖在 1.67～
图1 对照品样品吸收曲线
表1 半乳糖醛酸标准溶液浓度与吸光度值
图2 半乳糖醛酸标准曲线
标准溶液体积/mL 标准溶液浓度/μg 吸光度(A)
0 0 0
0.1 10 0.085
0.2 20 0.201
0.3 30 0.257
0.4 40 0.388
0.5 50 0.439
0.6 60 0.543
0.7 70 0.625
0.8 80 0.737
0.9 90 0.865
1.0 100 0.958
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16.67μg/mL范围内符合郎白-比尔定律。以吸光度为纵
坐标,半乳糖浓度为横坐标,绘制标准曲线见图2。
3.2 样品糖醛酸含量测定结果
按上述糖醛酸含量测定方法,同时做3个重复,
经测定吸光度值分别为0.219、0.223、0.245,计算得
野木瓜多糖中糖醛酸含量分别为 24.18%、24.61%、
26.93%,平均含量为25.24%。
3.3稳定性实验
取同一供试品溶液 1mL,每隔 30min测定 1次,
观测其稳定性,结果表明,在显色 150min时间内吸
光度稳定性较好,结果见表2。
3.4 精密度实验
精密吸取对照品溶液(100μg/mL)0.5mL进行精密
度试验,连续进行6次重复测定其吸光度,得RSD=
2.02%,小于5%,表明精密度好,结果见表3。
3.5 重现性实验
精密吸取来自同一批原料的试样,分别测定其
吸光度,检验该测定方法的重现性,得RSD=3.39%,
小于5%,表明重复性较好,结果见表4。
3.6回收率实验
精密吸取 1mg/mL供试品溶液 0.1mL,分别加入
0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mL的对照品溶液,按样品测
定方法,分别测定其吸光度,计算回收率,结果见表
5,样品平均回收率为 100.01%,RSD为 2.32%,表
明本法可行。
4 结束语
用硫酸-咔唑比色法测定野木瓜多糖中糖醛酸的
含量,通过实验可知,该法准确率较高,重复性较
好,并且此法简便灵敏,适宜于野木瓜多糖中糖醛酸
的含量测定。有报道说中性糖对硫酸-咔唑比色法测
定糖醛酸的含量有一定影响,本实验采用水提醇沉
多糖用于糖醛酸的含量测定,一定程度除去了中性
糖的干扰,结果可靠。
参考文献:
[1] 李显国.立足资源创特色产业.黔中巡礼,2000,16(1):18-19
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简易新方法.中草药,2001,32(5):404-407
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[4] 黄赵刚,李绍平,夏泉,等.不同产地黄精中糖醛酸含量的
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[5] 林颖,黄琳娟,田庚元.一种改良的糖醛酸含量测定方法.
中草药,1999,30(11):817-819
时间/min 30 60 90 120 150
吸光度 0.464 0.466 0.450 0.433 0.410
表2 稳定性实验结果
样品号 1 2 3 4 5 6 RSD/%
吸光度 0.3790.3710.377 0.3760.362 0.384 2.02
表3 精密度实验结果
表4 重现性实验结果
样品号 1 2 3 4 5 平均 RSD/%
吸光度 0.575 0.5500.5270.563 0.5680.557 3.39
表5 回收率实验结果
样品含量/μ加入量/μg测得总量/μg回收率/% 平均/% RSD/%
25.356 10.0 34.332 96.16
25.356 20.0 45.748 100.86
25.356 30.0 56.636 102.31 100.01 2.32
25.356 40.0 65.304 99.92
25.356 50.0 75.968 100.81
食事传递
工艺技术
日前,辽宁省丹东市政府召开新闻发布会,宣布华
润雪花啤酒(中国)有限公司正式重组丹东华澳鸭绿江啤
酒有限公司。据悉,此次华润雪花啤酒(丹东)有限公司
总投资 6.5亿元,一期投资 1.3亿元。届时,公司年啤
酒生产能力可由现在的12万千升增加到 40万千升,销
售收入 8亿元,实现税金 1.6亿元。这是雪花啤酒今年
在辽宁省并购葫芦岛菊花啤酒后的又一大手笔。
丹东华澳鸭绿江啤酒有限公司有近 40年的历史,
是丹东地区唯一一家啤酒生产厂,产品覆盖丹东周边市
场,生产能力进入全国行业百强。此次与华润雪花啤酒
联手,满足了该企业靠大船,实现又好又快发展的需
求。目前,雪花啤酒辽宁公司在沈阳、大连、鞍山、丹
东等地拥有10家企业,占辽宁省啤酒企业数量的一半,
销售网络遍布全省各地。对其而言,此次联手鸭绿江啤
酒是华润啤酒实施全国战略布局的重要一步。
联手后,新公司将进行一系列的整合改造,引进先
进技术、先进设备,实行先进的管理,雪花原汁麦啤
酒、雪花鸭绿江啤酒将很快与市民见面。与此同时,一
期20万千升扩建工程也将启动。 (小文)
华润加快辽宁市场扩张速度
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食品科技
E-mail:shipinkj@vip.163.com
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