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白木通醇提取物体外抗肿瘤活性研究



全 文 :药 物 研 究
The medicine study
基金项目:广西自然科学基金项目 (编号:2010GXNSFD013043)。
作者简介:唐燕霞 (1987 -),女,广西合浦人,在读硕士研究生,主要从事抗肿瘤药理学研究。
通信作者:梁钢 (1957 -),男,博士,教授,博士研究生导师。主要从事抗肿瘤分子药理学及其新药研究工作。
白木通醇提取物体外抗肿瘤活性研究
唐燕霞 孙悦文 梁 钢*
广西医科大学药学院,广西 南宁 530021
【摘 要】 目的:研究白木通乙醇提取物的体外抗肿瘤活性。方法:采用乙醇回流提取制备白木通醇提取物,以 MTT 法检测白木通
醇提取物对人肝癌细胞 SMMC -7721、BEL - 7404,人鼻咽癌细胞 CNE - 1 的生长抑制情况。结果:白木通醇提取物体外对人肝癌细胞
SMMC -7721、BEL - 7404,人鼻咽癌细胞 CNE - 1 有抑制增殖作用。结论:白木通醇提取物具有一定的体外抗肿瘤活性。
【关键词】 白木通醇提取物体;抗肿瘤;肝癌;鼻咽癌
【中图分类号】R 285. 5 【文献标志码】A 【文章编号】1007 - 8517 (2014)10 - 0017 - 02
Anti - tumor Active of the Ethanol Extract from Akebia trifoliata in Vitro
TANG Yan-xia,SUN Yue-wen,LIANG Gang*
Parmaceutical College of Guangxi Medical University,Nanning 530021,China
Abstract:To investigate the anti - tumor active of the ethanol extract from Akebia trifoliata (Thunb.)Koidz. var. australis
(Diels)Rehd. in vitro. Methods:Akebia trifoliata (Thunb.)Koidz. var. australis (Diels)Rehd. was extracted by reflux in 70%
alcohol . MTT assay was used to investigate inhibitory growth effect of the ethanol extract from Akebia trifoliata (Thunb.)Koidz. var.
australis (Diels)Rehd. on human hepatic cancer cells SMMC - 7721、BEL - 7404 and Nasopharyngeal cancer cell CNE - 1 cancer .
Results:The ethanol extract from Akebia trifoliata (Thunb.)Koidz. var. australis (Diels)Rehd. inhibited the proliferation of hu-
man hepatic cancer cells SMMC - 7721、BEL - 7404 and Nasopharyngeal cancer cell CNE - 1 in vitro. Conclusion:The ethanol ex-
tract from Akebia trifoliata (Thunb.)Koidz. var. australis (Diels)Rehd. have certain anti - tumor effect in vitro.
Key words:Akebia trifoliata (Thunb.)Koidz. var. australis (Diels)Rehd.;Anti - tumor;Hepatic cancer;Nasopharyn-
geal cancer
白木通 Akebia trifoliata (Thunb.)Koidz. var. australis
(Diels)Rehd. 为木通科木通属植物,其根、藤茎、叶、种
子、果实皆可入药,其主要药用部位为藤茎和果实[1]。白
木通的藤茎作为木通入药,其味苦,性微寒,入心、小肠、
膀胱经,具清心火、利小便和通经下乳之功效[2]。国内外
学者对木通属植物的化学成分进行了很多研究,并分离出
了单体成分,但有关其药效学,尤其是抗肿瘤作用方面的
报道却相对较少。本实验对白木通醇提取物在体外对人肝
癌细胞 SMMC - 7721、BEL - 7404,人鼻咽癌细胞 CNE - 1
增殖的作用进行研究,为白木通的进一步开发利用提供了
实验依据。
1 材料
白木通 (藤茎)购自广西桂林市腾龙堂药业有限责任
公司同心园药店;索拉菲尼购自拜耳公司;人肝癌细胞
SMMC -7721、BEL - 7404,人鼻咽癌细胞 CNE - 1 购自中
国科学院细胞库,由本实验室传代培养;1640 培养基,美
国 Gibco公司;DMSO、胰蛋白酶,美国 Sigma 公司;胎牛
血清,杭州四季青生物工程材料有限公司;噻唑蓝
(MTT),美国 AMRESCO公司。
2 实验方法
2. 1 白木通醇提物的制备 将白木通干药材粉碎后,用 6
倍体积的 75%乙醇溶液回流提取 2 次,每次 2h,抽滤,合
并滤液。减压回收溶剂,将药液浓缩至浸膏,置于 60℃烘
箱烘干备用。
2. 2 MTT法[3]检测白木通醇提物对不同肿瘤细胞的抑制作
用 选取对数生长期的人肝癌细胞 SMMC - 7721、BEL -
7404,人鼻咽癌细胞 CNE - 1,用 0. 5%胰蛋白酶消化后,
配成 2 × 105 个 /ml的细胞悬液,96 孔细胞培养板中每孔加
入 100 μl 细胞悬液。置于 37℃,5% CO2 的培养箱中培养
12 h,每孔加入 100 μl不同浓度的含药培养基,每个浓度设
4 个平行孔,同时设立空白对照组,索拉菲尼为阳性对照
组。加药后培养箱中继续培养 24 h 后,每孔加入 20 μl 5
mg /ml的 MTT溶液,继续培养 4 h。吸去上清液,每孔加入
150 μl DMSO,用酶标仪在 490 nm波长处测 OD值。计算细
胞增殖抑制率和半数抑制浓度 IC50。
抑制率 (%) = (空白对照组 OD 值 - 加药组 OD
值) /空白对照组 OD值 × 100%。
2. 3 统计学处理 应用 SPSS16. 0 统计软件进行数据处理。
3 结果
白木通醇提物有抑制人肝癌细胞 SMMC - 7721、BEL -
7404,人鼻咽癌细胞 CNE -1增殖的作用,半数抑制浓度 IC50
分别为 0. 393 mg/ml、0. 348 mg/ml、0. 205 mg/ml。结果见表 1。
4 讨论
从实验结果可以看出白木通醇提物对人肝癌细胞
SMMC -7721、BEL - 7404、鼻咽癌细胞 CNE - 1 都有抑制
增殖作用,并且呈一定的剂量依赖性,其对人肝癌细胞
SMMC -7721、BEL - 7404 的作用比较接近,而对鼻咽癌细
胞 CNE - 1 的体外抑制增殖作用则相对较强。本课题组对
白木通醇提物进行了初步的化学成分预试,发现其主要成
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中国民族民间医药
Chinese journal of ethnomedicine and ethnopharmacy
药 物 研 究
The medicine study
分为非还原性糖、苷,可能含有少量黄酮。据国内外学者
发表的大量研究表明,木通属植物富含三萜皂苷[4]。有文
献报道从木通中分离的五种三萜皂苷对试验细胞 A549,SK
- OV - 3,SK - MEL - 2,XF498,HCT15 均表现显著的细
胞毒活性[5]。本实验中白木通醇提物对肿瘤细胞具有抑制
增殖作用。综上所述,我们认为白木通醇提物中的有效成
分很可能是皂苷类物质。本课题组后期将进一步分离纯化
白木通,明确其药效成分,并深入研究其抗肿瘤的机制。
表 1 白木通醇提物对肿瘤细胞的抑制作用
白木通醇提
取物浓度
(mg /ml)
SMMC -7721 BEL - 7404 CNE - 1
抑制率
(%)
IC50
(mg /ml)
抑制率
(%)
IC50
(mg /ml)
抑制率
(%)
IC50
(mg /ml)
0. 5 56. 89
0. 25 42. 76
0. 125 34. 66
0. 0625 25. 37
0. 025 16. 85
0. 355
59. 65
35. 26
25. 3
10. 25
2. 07
0. 368
81. 95
60. 76
31. 55
14. 28
4. 47
0. 192
参考文献
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(收稿日期:2014. 03. 10
檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾
)
(上接第 12 页)
免疫调节作用[11]。Das M等[12]研究木犀草素对卵白蛋白致
敏小鼠哮喘的作用,指出低剂量木犀草素在致敏过程中和
致敏后都能显著减轻哮喘的症状,减轻支气管收缩和气道
高反应性。本实验结果也表明,木犀草素能使组胺及乙酰
胆碱致痉的豚鼠气管螺旋条平滑肌松弛;并能明显促进小
鼠气管腺体的分泌。结果还表明花生壳醇提物比木犀草素
作用更明显,且花生壳醇提物能明显延长氨水引起小鼠咳
嗽的潜伏期及减少咳嗽次数,具有良好的镇咳、祛痰、平
喘作用,为临床治疗肺部疾病提供了药理实验依据。
表 4 花生壳醇提物对豚鼠离体气管条的影响 (x ± s,n = 8)
组别
终浓度
(mg /ml)
解痉百分率 (%)
组胺 乙酰胆碱
N. S. — 0 0
氨茶碱 11 76. 69 ± 10. 22 76. 48 ± 13. 61
CMC - Na 100 0 0
木犀草素 6 26. 94 ± 4. 11** 29. 63 ± 10. 06**
低 1. 5 21. 44 ± 3. 66** 26. 24 ± 14. 70**
中 3 60. 90 ± 18. 31** 46. 06 ± 9. 78**
高 6 69. 44 ± 19. 04* 57. 02 ± 14. 46*
与氨茶碱比较* P < 0. 05,**P < 0. 01;组胺终浓度 (3 μg /ml),
乙酰胆碱终浓度 (1. 5 μg /ml).
花生壳醇提物的镇咳、祛痰、平喘药理作用比木犀草
素效果更佳,可能由于花生壳醇提物中含有某些其它具有
镇咳、祛痰、平喘药理作用的成分,致使其作用增强;也
可能是多种成分综合作用的结果,这也是本实验的目标所
在。但是花生壳醇提物中总黄酮的镇咳、祛痰及平喘作用
是否比花生壳总醇提物更强或相当,则有待通过进一步实
验来证明。
参考文献
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(收稿日期:2014. 02. 12)
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