全 文 :鸭血糯黑桑椹抗氧化延缓衰老保健功效研究
施洪飞 1 项 平 2 杨立坤 3 曹 晖 1 陆广念1 陈 剑1
( 1. 扬州大学旅游烹饪学院烹饪与营养科学系 ,江苏扬州 , 225001;
2. 南京中医药大学第二临床医学院养生康复系 ,江苏南京 , 210029; 3. 扬州市医学检验中心 , 江苏扬州 , 225001)
摘 要 : 以鸭血糯米提取液、黑桑椹水提取液给老龄 BALB /C小鼠灌胃 ,剂量分别为 0. 5, 1. 0, 2. 0m L
只 - 1 d- 1 , 每组 20只 . 45d后测定与抗氧化延缓衰老及美容有关的生化指标 . 结果表明: 鸭血糯提取液、黑
桑椹提取液都能使超氧化物歧化酶 ( SOD)活性显著增强 (P < 0. 05或 0. 01) , 谷胱甘肽过氧化物酶 ( GSH-
Px )和过氧化氢酶 ( CAT )活性显著提高 (P < 0. 01) , 心肌脂褐素含量明显减少 (P < 0. 05) , 过氧化脂质
( LPO)含量明显降低 ;皮肤中羟脯氨酸 ( HYP)的含量提高 (P < 0. 05或 < 0. 01) . 证明鸭血糯提取液、黑桑
椹提取液都具有较明显的抗氧化和延缓衰老的作用以及润肤美容的功效 .
关键词: 黑桑椹 ; 鸭血糯 ; 抗氧化 ; 延缓衰老
文献标识码: A 文章编号: 1007 824X ( 2000) 02 0034 04中图法分类号: S 865. 1+ 3; R 247. 1
鸭血糯是我国南方经常食用的稻类食品 ,民间认为其有补血养颜作用 . 黑桑椹为桑科植物桑
(Morus alba L. )的干燥果穗 ,既是补益肝肾的中药 ,又可作为食用果品 . 施洪飞等报道含有黑桑椹成
分的桑源口服液有一定的抗氧化延缓衰老作用 [1 ] . 为了探索二者补肾益精抗衰延年保健效果 ,我们
用鸭血糯及黑桑椹提取液分别饲灌老龄 BALB /C小鼠 ,测试与抗氧化延缓衰老有关 7项生化指标 .
1 材料与方法
1. 1 提取液制备
鸭血糯米 1997年 8月购自江苏常熟虞山镇粮管所 ,参照文献 [2 ]制成鸭血糯提取液 . 黑桑椹购自
扬州市医药采购供应站 ,采用常规煎中药方法 ,首煎 50min取汁 ,二三煎各 15min取汁 , 3次煎液合并
后浓缩至 1000mL制成黑桑椹提取液备用 .
1. 2 动物分组及饲养
12月龄雄性 BALB /C小鼠 (购自扬州大学畜牧兽医学院实验动物中心 ) 160只 ,体重 25~ 28g , 适
应性饲养 1周后 ,按体重分为 8组 (经 t检验 ,组间体重差异不显著 ) , 每组 20只 . 对照组灌胃自来水 1
mL 只- 1 d- 1 , 阳性对照组灌胃生脉饮 1mL 只- 1 d- 1 , 鸭血糯、黑桑椹水提液均设低、中、高 3组 ,剂
量分别为 0. 5, 1. 0, 2. 0mL 只 - 1 d- 1. 各组小鼠置于扬州大学畜牧兽医学院清洁级动物房饲养 ,垫
料为高温消毒过的木屑 ,各组小鼠自由进食饮水 ,室温为 18~ 25℃ , 相对湿度为 50% ~ 70% , 45d后
取肝、脑、肾、睾丸、脾脏及皮肤测定相关生化指标 .
1. 3 组织匀浆液制备
将各组织置 4℃生理盐水中 ,洗去表面残血 ,滤纸吸干 ,取一定量组织 (肝 0. 4g、半脑、 1只睾丸、 1
只肾脏及整只脾脏 ) , 置组织研磨器中 ,分别制备含量为 7. 5% , 2. 0% , 2. 0% , 2. 0% , 2. 5%的组织匀
浆液 , 3000r min- 1离心 15min, 取上清液备用 .
收稿日期: 1999 04 22
基金项目: 江苏省自然科学基金资助项目 ( BS99080)
第 3卷第 2期 扬州大学学报 (自然科学版 ) Vo l. 3 No. 2
2000年 5月 JOURN AL O F YANGZHOU UNIV ERSIT Y ( NATU RAL SCIEN CE EDITION) May2000
1. 4 皮肤羟脯氨酸测定液制备
取皮肤去毛去脂肪烘干 ,取 5mg样品 ,置于具塞刻度试管内 ,加入 6mol L- 1盐酸 2. 5mL加塞 ,置
于 140℃烘箱中水解 3h , 冷却后取出 ,以 10mol L- 1 NaOH调 pH至 7. 0, 以蒸馏水稀释至 10mL过滤 ,
过滤液即为羟脯氨酸测定液 .
1. 5 实验器材
TGL-16型高速台式离心机 (上海医用分析仪器厂出品 ) , BECKMAN-DU型自动生化分析仪 ,
755B型分光光度计 (上海医用分析仪器厂出品 ) , 荧光分光光度计 (上海医用分析仪器厂出品 ) , 可调
定量加液器 (上海求精玻璃仪器厂出品 ) , BECKMN-111型高精确稀释器 , 75mm型组织研磨器 ,低
速离心机 (常州国华电器有限公司出品 ) ,电子天平等 .
1. 6 试剂与指标测定
超氧化物歧化酶 ( SOD)活力测定试剂盒、谷胱甘肽过氧化物酶 ( GSH-Px )活力测定试剂盒、 总抗
氧化能力 ( T-AOC)测定试剂盒、丙二醛 ( MDA)测定试剂盒、过氧化氢酶 ( CAT)活力测定试剂盒、羟
脯氨酸 ( HY P)测定试剂盒 (批号 5510)、微量蛋白测定试剂盒 (批号 5760)均由南京建成生物试剂研究
所提供 . 各项指标测定严格按试剂盒说明书进行 .
1. 7 指标测定方法
用黄嘌呤氧化酶法测定肝、脑、睾丸、肾的 SOD活力 [3, 4 ] ; 用 DTNB直接法测定全血、肝脏 GSH-
Px活力 [3, 5 ] ; 睾丸、脑 LPO含量测定用 TBA比色法测定组织中 MDA含量表示 [3, 6 ]; 用氯胺 T法测
定皮肤羟脯氨酸含量 [3, 7, 8 ]; 心肌脂褐素含量按文献 [ 3]的方法测定 ;脾脏 CAT活力、脑和肾 T-AOC
能力测定、组织匀浆的蛋白质浓度测定等均严格按试剂盒说明进行 .
1. 8 统计分析
所得数据经方差齐性分析后选择 t检验进行处理 .
2 结果与分析
从表 1可见 ,鸭血糯水提液可提高老龄小鼠的肝、脑、睾丸及肾脏 SOD活力 ,所有的剂量组与对照
组相比都有显著性差异 (P < 0. 05, P < 0. 001) . 黑桑椹提取液亦能提高肝、脑、睾丸及肾脏的 SOD活
力 ,对肝脏 SOD活力影响最大 ,与对照组相比亦有显著差异 .
表 1 鸭血糯、黑桑椹液对小鼠不同器官 SOD活力的影响
Table 1 Effect of Yaxuenuo and black mulberry on the activity of SOD from mice′s dif f erent organ
组 别 n SOD活力 /nU mg
- 1 (蛋白 )
肝 脑 睾丸 肾
对照组 20 267. 73± 40. 93 105. 78± 17. 49 405. 32± 56. 29 253. 72± 29. 84
阳性对照组 20 336. 44± 22. 32* * 126. 23± 14. 32* 425. 46± 24. 76* 286. 30± 23. 33*
鸭血糯低剂量组 20 309. 99± 43. 98* 128. 31± 14. 46* 445. 98± 18. 89* 292. 00± 38. 32*
鸭血糯中剂量组 20 329. 92± 43. 74* * 140. 38± 15. 75* * * 470. 92± 34. 00* * 286. 56± 26. 44* *
鸭血糯高剂量组 20 343. 54± 41. 31* * * 143. 38± 17. 44* * * 473. 64± 49. 32* * 295. 40± 32. 35* *
黑桑椹低剂量组 20 286. 65± 40. 93* 102. 45± 13. 33 410. 60± 46. 65 262. 40± 40. 44
黑桑椹中剂量组 20 331. 46± 23. 69* * 114. 39± 12. 36 420. 15± 22. 92 286. 36± 31. 40
黑桑椹高剂量组 20 340. 44± 36. 40* * * 122. 85± 13. 05* 426. 32± 47. 08* 290. 88± 43. 72* *
与对照组比: * P < 0. 05, * * P < 0. 01, * * * P < 0. 001
从表 2可见 ,鸭血糯水提液能提高老龄小鼠全血和肝脏的 GSH-Px活力 ,与对照组相比有显著性
差异 (P < 0. 05, P < 0. 01, P < 0. 001) ; 提高脾脏过氧化氢酶活力 ,与对照组相比有显著性差异 ( P <
0. 05, P < 0. 01) . 黑桑椹提取液亦能提高老龄小鼠全血的 GSH-Px活力 ,中高剂量组与对照组相比
有显著差异 (P < 0. 05, P < 0. 01) . 鸭血糯水提液能降低老龄小鼠的脑、睾丸中 LPO的含量 ,各剂量
35第 2期 施洪飞等: 鸭血糯黑桑椹抗氧化延缓衰老保健功效研究
组与对照组相比有显著性差异 ( P < 0. 05, P < 0. 01) ; 亦能降低心肌脂褐素的含量 ,各剂量组与对照
组相比有显著的差异 ( P < 0. 05, P < 0. 01) . 黑桑椹提取液能降低小鼠脑、睾丸中 LPO含量 ,中高剂
量组与对照组相比有显著差异 ( P < 0. 05, P < 0. 01) .
表 2 鸭血糯、黑桑椹液对小鼠 GSH-Px活力 、CAT活力和 LPO含量的影响
Tabl e 2 Effect of Yaxuenuo and black mul berry on GSH-Px activity, CAT act ivity and LPO content
组 别 n GSH-Px活力全血 /U mL- 1 肝脏 /U mg- 1 (蛋白 )
脾脏 CAT活力
U mg- 1(蛋白 )
LPO含量 /nmol (M DA) mg- 1(蛋白 )
睾丸 脑
对照组 20 14. 92± 3. 53 16. 65± 2. 77 29. 45± 8. 59 8. 37± 1. 23 10. 09± 1. 37
阳性对照组 20 28. 24± 4. 22* * 22. 36± 2. 46* * 35. 23± 4. 21* 6. 86± 1. 21* * 7. 88± 1. 04* *
鸭血糯低剂量组 20 24. 60± 6. 75* * 16. 93± 2. 06 32. 66± 6. 93* 6. 99± 2. 28* 9. 95± 1. 83
鸭血糯中剂量组 20 29. 20± 4. 85* * * 18. 95± 1. 63* 36. 20± 10. 31* 7. 42± 1. 33* 8. 65± 1. 27* *
鸭血糯高剂量组 20 31. 67± 5. 42* * * 19. 80± 2. 48* 38. 65± 7. 09* 5. 66± 1. 05* * 7. 82± 1. 26* *
黑桑椹低剂量组 20 22. 50± 4. 35 18. 62± 3. 90 28. 04± 7. 32 7. 86± 1. 03 9. 70± 1. 28
黑桑椹中剂量组 20 25. 97± 4. 35* 20. 01± 2. 33* 29. 57± 4. 82 6. 92± 1. 82* 8. 76± 1. 25*
黑桑椹高剂量组 20 31. 30± 3. 38* * 23. 40± 3. 64* * 34. 66± 6. 05* 6. 88± 1. 24* * 7. 89± 1. 09*
与对照组比: * P < 0. 05, * * P < 0. 01, * * * P < 0. 001
从表 3可见 ,鸭血糯高剂量组与能提高脑的抗氧化能力 ,提高老龄小鼠皮肤中羟脯氨酸的含量 ,与
对照组相比有显著性差异 ( P < 0. 05, P < 0. 01) . 黑桑椹提取液能提高老龄小鼠的脑、肾脏总抗氧化
能力 ,中、高剂量组与对照组相比具有显著性差异 ( P < 0. 05, P < 0. 01) ; 中、高剂量组皮肤羟脯氨酸
含量均有所提高 ,与对照组相比差异有显著性 ( P < 0. 05) .
表 3 鸭血糯、黑桑椹液对小鼠 T-AOC, HYP和心肌脂褐素含量的影响
Tabl e 3 Effect of Yaxuenuo and black mul berry on mice′s T-AOC, HYP content and lipchrin content
组 别 n T-AOC /U mg
- 1 (蛋白 )
脑 肾脏
HYP含量
mg g- 1 (组织 )
心肌脂褐素含量
μg(荧光物 ) g- 1 (心肌 )
对照组 20 2. 35± 0. 44 2. 41± 0. 78 84. 56± 9. 23 4. 88± 1. 02
阳性对照组 20 3. 15± 0. 34* * 3. 04± 0. 66* * 110. 24± 11. 21* * 2. 56± 1. 12* *
鸭血糯低剂量组 20 2. 46± 0. 68 — 89. 44± 10. 34 2. 52± 0. 50*
鸭血糯中剂量组 20 2. 52± 0. 46 2. 90± 0. 89 108. 33± 10. 24* 2. 71± 0. 53* *
鸭血糯高剂量组 20 3. 25± 0. 44* * — 120. 40± 11. 45* * 2. 90± 0. 62* *
黑桑椹低剂量组 20 2. 43± 0. 55 2. 39± 0. 67 82. 23± 9. 60 4. 68± 1. 37
黑桑椹中剂量组 20 2. 74± 0. 60* 2. 85± 0. 57* 97. 76± 10. 25* 3. 59± 0. 81*
黑桑椹高剂量组 20 3. 05± 0. 40* * 3. 11± 0. 65* * 99. 02± 10. 44* 2. 46± 0. 76* *
与对照组比: * P < 0. 05, * * P < 0. 01, * * * P < 0. 001
3 讨论
3. 1 鸭血糯水提液和黑桑椹提取液抗氧化延缓衰老作用
SOD是机体内唯一能直接特异性地淬灭超氧自由基的酶 . 研究表明: 机体内 SOD活力高低与
年龄呈负相关 ,即随年龄增加而 SOD活力降低 . 从表 1可见 ,中高剂量组鸭血糯、黑桑椹能显著地提
高小鼠 SOD活力 ( P < 0. 05或 0. 01) . 生物体内的谷胱甘肽过氧化物酶、过氧化氢酶等也具有抗氧化
的作用 ,其活力也是随年龄下降的 ,当这些酶的活性下降时 ,会使脂质过氧化产生过氧化脂质 ,继而形
成脂褐素沉积在细胞中而导致细胞功能发生障碍 . 因此 GSH-Px, CAT, LPO,心肌脂褐素活力含量
高低都可作为衰老指标 [3 ] . 从本试验结果可见 2种提取液都能使上述各指标有所改善 ,就本试验所采
用的剂量而言鸭血糯提取液优于黑桑椹提取液 .
3. 2 鸭血糯提取液和黑桑椹提取液润肤美容的作用
心肌脂褐素是过氧化脂质堆积在心脏肌肉细胞的产物 ,其含量高低实际上反应了全身的过氧化
36 扬州大学学报 (自然科学版 ) 第 3卷
脂质的含量 ,过氧化脂质堆积在皮肤就会出现脂褐斑 ,所以其含量高低直接影响皮肤的润泽美观的情
况 ,故心肌脂褐素的含量亦可作为美容的指标之一 . 本试验可见鸭血糯提取液各组、黑桑椹中高剂量
组较对照组心肌脂褐素含量均有显著降低 . HYP是胶原蛋白内特有的氨基酸之一 ,约占胶原全部残
基的 10% , 胶原是动物皮肤等器官的组成成分 . 随着动物年龄增长 ,胶原代谢十分缓慢 ,组织中 HYP
含量下降 ,皮肤的润泽度就变差 . 本试验可见鸭血糯提取液中高剂量组 HYP含量显著高于对照组 ,
黑桑椹中高剂量组亦高于对照组 ,但没有前者明显 .
4 参考文献
[ 1] 施鸿飞 , 曹 晖 , 孙鸿才 , 等 . 桑源口服液延缓小鼠衰老指标观察 [ J]. 南京中医药大学学报 , 1998, 14( 6):
353~ 354
[ 2] 邵长富 , 赵晋府 . 软饮料工艺学 [M ]. 北京: 轻工业出版社 , 1987. 240~ 242
[ 3] 金宗濂 , 文 镜 , 唐粉芳 , 等 . 功能食品评价原理及方法 [M ]. 北京 : 北京大学出版社 , 1995. 21~ 24
[ 4] 袁勤生 . 超氧化物歧化酶的分析测定 [ J]. 中国医药工业杂志 , 1989, 20( 10): 473~ 477
[ 5] 夏变明 , 朱莲珍 . 血和组织中谷胱甘肽过氧化物酶活力的测定方法 [ J]. 卫生研究 , 1987, 16( 4): 29~ 33
[ 6] 孟庆礼 , 杨 红 , 陈练波 , 等 . 过氧化脂质与老化的关系 [ J]. 中华老年医学杂志 , 1987, 6( 4): 242~ 243
[ 7] 许志勤 , 高兴兰 . 组织羟脯氨酸测定方法的改进 [ J]. 解放军预防医学杂志 , 1990, 8( 1): 40~ 42
[ 8] 刘泽民 , 冒国光 , 陆建民 . 血清游离脯氨酸、游离羟脯氨酸和肽结合羟脯氨酸测定及肿瘤的评价 [ J]. 中华医学
检验杂志 , 1986, 9( 3): 129~ 133
EXPERIMENTAL STUDYOF SANITARY EFFICACYON ANTI-
OXIDATION AND DELAYING SENILITY OF THE
YAXUENUO AND THE BLACKMULBERRY
SHI Hong-fei
1 X IANG Ping2 YANG Li-kun3 CAO Hui1
LU Guang-nian
1 CHEN Jian1
( 1. Dept of Culi Art and Nutri, Tourism and Culi Art Coll, Yangzhou Univ, Yangzhou, 225001, China;
2. Dept of Pres and Res to Health Second M edic Coll, Nanjing Univ of TCM, Nanjing, 210019, China;
3. Yangzhou Medic Testing Spine of Jiangsu Prov, Yangzhou, 225001, China)
Abstract: The BALB /C strain mice of senility w ere irrigated juice of the black mulberry and the
Yaxuenuo from stomach for 45 day s. The determination of biochemical targets can be made, concerning
anti-oxidation, delaying senility and beautifying one′s face etc. Juice of the black mulberry and the
Yaxuenuo could significantly increase superoxide dismutase ( SOD) activity in liv er, brain, and testicle of
experimental mouse ( P < 0. 05 or P < 0. 01) ; could remarkably increase g lutathione peroxidase ( GSH-
Px ) activi ty and catalase ( CAT) activi ty in mouse blood ( P < 0. 01) ; and could obviously reduce
myocardiac lipofuscin contents ( P < 0. 05) and lipid peroxidation ( LPO) contents in liver and testicle of
BALB /C mouse ( P < 0. 05) . These results suggest that juice of the black mulberry and the Yaxuenuo
have a certain function of anti-oxidation and delaying senility , and a certain efficacy of moistening skin
beautifying one′s face.
Keywords: black mulberry; Yaxuenuo; anti-oxidation; delaying senili ty
(本文责任编辑 日 月 )
37第 2期 施洪飞等: 鸭血糯黑桑椹抗氧化延缓衰老保健功效研究