全 文 ：第 卷 第 期 食 品 安 全 质量 检 测 学 报
年 月 ’
反相高效液相色谱法同时测定黄连花薹及
黄连花茶中 种生物碱的含量
马冰馨 ， 梁佳文 ， 李兴会 ， 何敬胜 ， 童 静， 王有为
武汉大学药学院中药与天然药物研究所 ， 武汉
摘 要 ： 目 的 采用反相高效液相色谱法 ， 建立盐酸药根碱 、 非洲防己碱 、 盐酸表小檗碱 、 盐酸黄连碱 、 盐酸
巴马汀和盐酸小檗碱共 种生物碱的 同时测定方法 ， 并测定其在黄连花薹和黄连花茶中的含量 。 方法 采用反
相髙效液相色谱法 。 色谱柱 流动相 相 碳酸氢铵水溶液 （含
有 氨水 、 三乙胺 相乙腈 ， 体积比为 流速为 检测波长 柱温为 进
样体积为 叫。 结果 在一定的浓度范围 内 种生物碱浓度与峰面积之间的线性关系 良好 ， 其检测精密度 、
稳定性 、 重复性及加样回收率的 值均在 以 内 。 测得两个品牌黄连花茶中 种生物碱含量差异不大 ， 对
个不同来源的黄连花薹样本而言 ， 其中盐酸黄连碱和盐酸巴马汀的含量差异也不大 ， 但盐酸药根碱 、 非洲防
己碱 、 盐酸表小檗碱和盐酸小檗碱的含量却有较大差异 。 结论 该方法具有分析速度快 、 灵敏度高 、 重现性
好等特点 ， 该方法的普及和应用将会为黄连花茶等系列深加工产品提供一个从原料到产品的质量控制方法。
关键词 ： 高效液相色谱法 ； 生物碱 ； 黄连 ； 花薹 ； 茶
、 ，
， ，
基金项 目 ： 国家科技重大专项课题 、 湖北省 自 然科学基金重点项 目
通讯作者 ： 王有为 ， 教授 ， 主要研究方向为 中药和民族药可食用资源 的功能评价与开发利用 。
第 期 马冰聲 ， 等 反相高效液相色谱法同时测定黄连花薹及黄连花茶中 种生物碱的含量
花为淡黄色 ， 花瓣呈线性或披针形 ， 顶端较尖 ， 中央
弓 有蜜槽 ， 雄蕊多数 约 ， 花药长 ， 花丝长
黄 连 为 毛 茛科 植 物 黄 连 胃， 外轮雄蓝比花瓣略短或近等长 ， 心皮 ， 离
、 三角叶黄连 生 ， 有短柄 ， 花柱微外弯 。 黄连移栽后第一年春季
或云连 的干燥 便会开花 ， 开花后会消耗植物大量养分 。 生产过程中
根茎 ， 通常将 以上三种黄连分别习称为 “味连” 、 ‘ ‘雅 连农为 了减少损耗 、 促进黄连根莲生长及其有效成分
连 ”和“云连 ” 】 。 黄连秋季采挖 ， 除去须根和泥沙 ， 干 的积 累 ， 除留种外 ， 在农艺措施上都会打摘黄连花
燥 ， 撞去残留须根 ， 以根茎人药 。 其主要化学成分为 薹。 以往摘下的黄连花薹一般会被丢弃 ， 只有少量的
季铵型生物碱 ， 主要包括小檗碱 、 表小檗碱 、 巴马汀 、 黄连花薹经瞭晒 、 杀青后作为保健茶在市场上销售 。
黄连碱 、 药根碱 、 非洲 防己碱 、 木兰花碱等 一 。 黄 黄连每年都会开花 ， 这需要耗费大量的人力物力打
连具有解热 、 抗炎 、 免疫调节 、 抗氧化 、 抗菌 、 抗癌 摘黄连花薹 ， 使之不能得到充分利用 。 像根莲一样 ，
等作用 。 作为重要的 中药原料 ， 黄连每年形成的 黄连花薹也含有季铵型生物碱 ， 主要包括小檗碱 、 黄
市场交易量相 当高 。 但由于黄连采收周期一般要 连碱 、 巴马汀 、药根碱 、 表小檗碱和非洲防己碱 ， 结
年以上 ， 造成 了资金周转回收慢 、 资源有效利用率低 构式如图 所示 。 同时 ， 现代药理研究表明 ， 黄连花
的不利局面 。 因此 ， 如何合理利用黄连资源 、 提高其 薹具有抗氧化 、 抗辐射 、 降糖 、 降脂等多种保健功能
附加价值就成为当前破解这一难题的迫切需求 。 。 因此 ， 利用黄连花薹作为保健品原料 ， 开发其
黄连的药用部位为其根茎 ， 而其须根 、 叶以及花 系列深加工产品 ， 一方面可以高效利用黄连资源 ， 另
薹往往被废弃 。 黄连的花期一般在每年的 月 ， 其 一方面可以有效提高药农的经济收入
°
： ；
、 、
图 种生物碱的结构式
1 6 0 4

食品 安全质量检测学报 第 卷
为了加强黄连花薹及黄连花茶等系列深加工产 碱 、 盐酸黄连碱 、 盐酸巴马汀 、 盐酸小檗碱适量于
品的质量控制 ， 需要建立一种简单快速 、 准确有效的 容量瓶中 ， 用 甲醇溶解并定容 ， 充分混勻 ， 即
方法对其主要功效成分进行定量分析与检测 。本研究 得混合对照品储备液 。
尝试建立一种反相高效液相色谱法 ， 以实 样品溶液制备
现对盐酸药根碱 、 非洲防己碱 、 盐酸黄连碱 、 盐酸表 每种黄连花薹及黄连花茶称取粉末约 分别
小檗碱 、 盐酸巴马汀 、 盐酸小檗碱 种生物碱的同时 置于具塞锥形瓶中 ， 各加人甲醇 盐酸 的混
检测 ， 从而为黄连花薹及黄连花茶等系列深加工产 合溶液 密塞 ， 称定总重量 ， 超声处理 功率
品的质量控制提供一种科学有效的快速分析方法 。 频率 ， 放冷 ， 再称定重量 ， 用甲醇补
、
足减失的重量 ， 摇勻 ， 过滤 ， 即得样品溶液 。
材料与方法 所得对照品及样品溶液上机检测前均需用
仪器 、 试剂与材料 的微孔滤膜过滤 。
谱备件高效液相色谱仪 誰水 色谱柱（ 腿 議 ，
吨 ； 流动 相 扣 咖舰碳酸氢铵水溶液 含平 美 国奥豪斯仅器有限 司 ， 赚转蒸发 氨水 、 三乙胺 ； 相 乙腈 ， 体积 比为仪 郑州长城科工贸有限公司 ； 高速万能粉粹机 天
，
油士主此此价迎亡啦 八 ” 、 ， 流速为 她腿 ； 检测波长为 腿， 柱温肺賴特婦碰飼 。
甲醇 、 乙腈 色 纯 购 自 美 国飞世尔科技公司 标准 曲线的建立
二 自 依 项下制得的六种生物碱混合对照品储备有 限 公 司 。 对 照 品 盐 酸 马 汀 （ 批 号 溶液 ， 用 甲醇等比例稀释成不同浓度溶液 ， 得不同浓盐酸小檗碱 批号 蘭 麗⑵ 度待测对照品溶液 。 按 项下色谱条件进样 ， 获和盐酸药根， 批号 取对照 色細 ， 记录麵积 ， 分观贿为横坐标药品检定研究院 ； 盐酸黄连碱 批号 和盐 以峰面积为纵坐标⑵ ， 绘制标准曲线 。酸表小檗碱 批 号 购 自 上海源叶生物科
技有限公司
、
非洲防己碱 批号 。 购 自成都瑞 ⑴精密度试验 取混合对照品溶液 ， 按照
。 的色谱条件进样 ， 重复测定 次 ， 记录每个对照品的黄连花薹 月 分别采集于湖北利川 面积并分别體 值 。
° °
、 重庆 石 柱 ° 稳定性试验 取混合对照品溶液 ， 按照
蕭 、 四川灘 。 。 以及云 的色谱条件进样 ， 分别在 、 、 、 、 、 、南福贡 。 ° 由武汉大学药学院王 进样 ， 测定每个对照品的峰面积并计算 值， 分有为教授鉴定 ， 其中湖北利川和重庆石柱的样本为 “味
—
（ 重复性 验 按照 的方法平行翻 组本为“云连”花薹 ， 凭证标本均保存于武汉大学药学院中 黄连花薹样品溶液 ， 按照 的色谱条件检测 ， 记药标本馆’ 凭证标本号分别为 ， 。 以上样 賴个对照 的峰面积并分别计算 值 。品经室内 粉 細。
（ 加卵 軸验 顏 ■賊制的黄， 连花薹样品溶液 ， 测定其中六种生物碱含量 ， 浦密
加入等体积高 、 中 、 低三个不同浓度对照品溶液 ， 混
合均句后按照 的色谱条件测定， 每个浓度平行■ 。 操作 组 ， 计算加样 回收率及 值 。
实验方法 不 同 产地黄连花薹及黄连花茶 中生物碱的含
对照品溶液制备 量测定
精密称取盐酸药根碱 、 非洲防己碱 、 盐酸表小檗 取黄连花茶及黄连花薹的粉末 ， 按照 制备
第 期 马冰馨 ， 等 ： 反相高效液相色谱法同时测定黄连花薹及黄连花茶 中 种生物碱的含量
样品溶液 ， 按照 的色谱条件进行测定 ， 重复测 之间线性关系 良好 。
定 次 ， 记录峰面积 ， 代入标准曲线 ， 计算不同产地 卞法学考察
方法学考察结果如表 所示 ， 种生物碱的精密
结果与分析 度试验 值在 。 之间 ， 稳定性试验
值在 之间 ， 重复性试验 值在混合对照品色谱图 之 间 ， 加 样 回 收率试验 值 在
对盐酸药根碱 、 非洲 防己 碱 、 盐酸表小檗碱 、 盐 之间 ， 表明该法具有 良好的精密度 、 稳
酸黄连碱 、 盐酸巴 马汀 、 盐酸小檗碱六种生物碱用 定性 、 重复性和加样回收率 ， 可用于六种生物碱的同
方法进行分离 ， 得到色谱 图如 图 所示 。 时检测 。
标准 曲线 黄连花茶和黄连花薹 中 种生物碱的含量
以生物碱对 照品 的标准溶液浓度 々为横坐标 ， 测定
以 测定的峰面积⑴为纵坐标 ， 绘制标准曲 将制得的供试品溶液 ， 按照 的液相方法测
线 ， 结果如表 所示 ， 实验结果表 明在一定的浓度范 定 种生物碱的含量 ， 重复 次 ， 实验结果如表 所
围内 ， 盐酸药根碱 、 非洲 防己碱 、 盐酸表小檗碱 、 盐 示 ， “硒楚园 ”黄连花茶和“福之健”黄连花茶所含 种
酸黄连碱 、 盐酸 巴马汀 、 盐酸小檗碱的浓度与峰面积 生物碱含量差异不大 ， 这可能与 两种 品牌黄连花茶
：
：
；
丨」
—
— — — — —
图 生物碱对照品混合样 图谱
： 盐酸药根碱 非洲防 己碱 盐酸表小檗 碱 盐酸黄连碱 盐酸 巴马汀 ； 盐酸小檗碱
表 种 生物碱定量参数
化合物 回归 方程 线性范围… 相关系数
盐酸药根喊
非洲 防己碱
盐 酸表小檗碱
盐酸黄连碱
盐 酸巴 马汀
盐酸小檗碱
食品 安全质量检测学报 第 卷
表 方法学考察结果 《
化合物 精密度 稳定性 重复性 平均加样回收率 ％ 加样回收率
■防 土
盐，表小檗蘩 ±
盐酴昔连诚 ±
盐酸巴马汀口 口 ±
社输 、壁磁
土
表 黄连花薑和黄连花茶的含量测定 《 ，
黄连花茶 黄连花茶 黄连花驀 黄连花薹 黄连花薑 黄连花薹
福之健） （硒楚园 ） （湖北利川 ） （重庆石柱 ） （四川洪雅 ） （云南福贡 ）
盐酸药根碱 ± ± ± ± 士 ±
非洲防己碱 ± ± ± ± 土 ±
盐酸表小檗碱 士 ± ± ± ± 士
盐酸黄连碱 ± ± ± ± ±
盐酸巴马汀 ± ± ± ± ± ±
盐酸小檗碱 ± ± ± 士 ± ±
同属味连且产地地理位置相近 ， 生态环境与加工方 又能满足黄连栽培的农艺要求 ， 从而可为药农增收 、
式相似有关 。 从 种黄连花薹的测定结果可以看出 ， 促进黄连产业的可持续发展作出贡献 。
味连比雅连和云连的非洲防己碱含量高 ， 其中盐酸
表小檗碱含量以重庆石柱居高 ， 盐酸药根碱含量以
湖北利川居高 ， 而云连花薹盐酸小檗碱的含量最高 ， 本文建立的盐酸药根碱 、 非洲防 己碱、 盐酸黄连
超出味连和雅连 倍 。 事实上 ， 不同产地 、 不同品 碱 、 表小檗碱 、 盐酸巴马汀和盐酸小檗碱六种生物碱
种 、不同采收时间等因素都可能导致黄连中生物碱含 化合物的同时测定方法可用于黄连花薹原料和黄连
— ， 卜 。 花茶等系列深加工产品 的质量控制 ， 为规范黄连花
■、 茶原料和产品市场提供质量保障 。降糖降脂等药理活性 ， 相关物质基础不仅与其 中所
含的酚类 、 黄酮 、 多糖有关 ， 而且几种主要生物碱在 ■
抗氧化损伤方面也有相当的贡献率 】， 所以黄连 国家药典委员会 中华人民共和国 版药典一部 北京：
花茶是有一定保健功能的 。 由此可见 ， 黄连花薹系列 中国医药科技出版社 ，
深加工产品 的研究与开发 ， 即可避免该资源 的浪费 ，
第 期 马冰馨 ， 等 ： 反相高效液相色谱法同时测定黄连花薹及黄连花茶中 种生物碱的含量
徐锦 堂 ， 王立群 ， 徐宿 黄连研究进展 中国医学科学院学
报 ， ，
，
耿志鹏 ， 郑海杰 ， 张艺等 测定不 同产地黄连中 种
生物碱的含量 中国中药杂志
刘芳 ， 张浩 ， 青琳森 黄连 数字化指纹图谱研究及 中 ， ，
生物喊含量测定 中国中药杂志 ，
屠大伟 ， 张保顺 ， 李学刚 黄连副产物体外抗氧化活性研究
赵保胜 ， 刘永 刚 ， 王 秀丽 黄连解毒汤解热 、 抗炎作用研究 中国农学通报
中 国实验方剂学杂志
，
冯 敏 黄 连花 薹成分分析和功能评价 重庆 ： 西南大学 ，
耿东升 黄连 素的抗炎与免疫调节作用 解放军药学学报 ，
王祯旭 ， 屠大伟 ， 冯敏 黄连花墓保健袋泡茶的研制 食品
科技 ， ，
，
—
责任编辑 张宏 梁
作者简介
，
吴玉娟 黄连多糖的提取及活性研究 西安 ： 西安交通 马 冰馨 博 士研 究生 ， 研究方 向 为 中
大学 ， 『二 药的质量控 制与生物活性研究 。
‘ ： °
袁王俊 ， 李彩芳 ， 丁秋瑾 ， 等 黄连抗氧化活性研究 广西
植物 ， ， 王 有 为 ， 教授 ， 専士 生导 师 ， 研 究方
▼
… 向 为 中药和 民族药可食 用 资源 的功 能评 价
— — 与开发 利用 。
国家中医药管理局《 中华样 》编委会 巾料韩七卷
上海 ： 上海科学技 术出 版社 ，