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点地梅中总黄酮及总三萜含量的测定



全 文 :湖 北 农 业 科 学 2014 年
第 53 卷第 8 期
2014年 4月
湖北农业科学
Hubei Agricultural Sciences
Vol. 53 No.8
Apr.,2014
收稿日期:2014-01-28
基金项目:国家社会科学基金项目(12XMZ033)
作者简介:何可群(1971-),女,云南云龙人,副教授,主要从事药用植物学、分析化学研究,(电话)13984334546(电子信箱)hekequn2004@163.com。
点地梅中总黄酮及总三萜含量的测定
何可群
(贵州民族大学化学与环境科学学院,贵阳 550025)
摘要 : 分别以芦丁及齐墩果酸为对照品 , 用超声辅助提取 、 分光光度法测定了点地梅 (Androsace
umbellata) 总黄酮及总三萜含量。 结果表明, 点地梅全草总黄酮及总三萜的相对含量分别为 6.863%和
8.832%, RSD 分别为 1.47%和 1.02%;卢丁对照品在 0.013 8~0.220 0 mg/mL 范围呈良好线性关系,回归
方程为 y=10.27x+0.013 8,R2为 0.999 9;齐墩果酸对照品在 0~100 mg/mL 范围内呈良好线性关系,回归方
程为 y=0.011 3x-0.017 7,R2为 0.999 1。 该法操作简单、准确,相关结果可为点地梅的开发及利用提供参
考依据。
关键词:点地梅(Androsace umbellata);总黄酮;总三萜;分光光度法
中图分类号:TS201 文献标识码:A 文章编号:0439-8114(2014)08-1902-03
Determination of Total Flavonoids and Triterpenoid in Androsace umbellata
HE Ke-qun
(Chemistry and Environmental Science Department of Guizhou Minzu University, Guizhou 550025, Guiyang, China)
Abstract: The total flavonoids and total triterpenoid from Androsace umbellata were determined by spectrophotometry based on
the standard curves of rutin and oleanolic acid. The results showed the percentage of total flavonoids and total triterpenoid in
Androsace umbellata were 6.863% (RSD=1.47%) and 8.832% (RSD=1.02%), respectively. There was a good linearity (R2=
0.999 9) in the range of 0.013 8~0.220 0 mg/mL for rutin with the regression equation of y=10.27x+0.013 8. When the
similar linearity of oleanolic acid (R2=0.999 1) was in the range of 0~100 mg/mL (R2=0.999 1), the regression equation was
y=0.011 3x-0.017 7. This method is simple and reliable for detecting total flavonoids and total triterpenoid in Androsace
umbellate. It will provides a reference for the exploitation and utilization of the Androsace umbellata.
Key words: Androsace umbellata; total flavonoids;total triterpenoid; spectrometry
点地梅 (Androsace umbellata)是报春花科点
地梅属草本植物 ,又名天星草 、顶珠草 、佛顶珠 、
地胡椒、铜钱草、白花草、喉咙草、百花珍珠草等,
分布于我国东北、华北及秦岭以南各省区 [1,2]。 点
地梅以全草入药,具有清热解毒,消肿止痛功效;
主要用于扁桃腺炎 、咽喉炎 、口腔炎 、牙痛 、急性
结膜炎、跌打损伤等的治疗 [1,2]。根据文献报道,点
地梅含有黄酮、三萜皂苷、酚苷及挥发油等物质[2-7]。
本试验分析了点地梅全草总黄酮及总三萜含量 ,
相关结果将为其开发和利用提供参考。
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
点地梅全草,采自云南省云龙县,标本保存于
贵州民族大学化学与环境科学学院药学教研室。
氢氧化钠、亚硝酸钠、硝酸铝、无水乙醇、冰醋
酸、香草醛、高氯酸均为分析纯试剂,芦丁(≥98%)
及齐墩果酸(≥98%)对照品均购自贵州迪大科技有
限责任公司。
1.2 仪器
756PC型紫外-可见分光光度计(上海舜宇恒平
科学仪器有限公司),METTLERAE240 型电子分析
天平(上海天平仪器厂),BGZ-30型电热鼓风干燥箱
(上海博迅实业有限公司医疗设备厂),SG3200HE
型超声清洗仪(上海冠特超声仪器有限公司),数显
恒温水浴锅(常州博远实验分析仪器有限公司)
1.3 方法
1.3.1 点地梅供试液的提取[8] 将自然晾干的点地
DOI:10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2014.08.009
第 8 期
梅于(60±1)℃烘干 5 h,精确称取干燥、粉碎(过 40
目筛) 的点地梅粉末 2.000 g, 按 1 ∶20 的固液比
(m/V) 用无水乙醇, 超声提取 2 次, 每次提取 60
min,超声频率 40 kHz,功率 150 W,提取结束后,合
并提取液,过滤冷却,用无水乙醇定容至 100 mL,摇
匀备用。
1.3.2 总黄酮的测定及重复性试验 总黄酮的测
定及重复性试验参照文献[9]。
1.3.3 总三萜标准溶液的制备及测定波长的选
择 称取 65℃干燥至恒重的齐墩果酸 20.00 mg,溶
解后以无水乙醇定容至 100 mL摇匀, 配制 200 mg/
mL 溶液; 吸取齐墩果酸标准溶液和点地梅提取液
各 1.00 mL,分别置于 2支 10 mL比色管中,于 85℃
挥干溶剂,冷却,加入 5%(m/V)香草醛-冰醋酸 0.500
mL,再分别加入高氯酸 1.00 mL,摇匀,70℃水浴 20
min,取出,在冰水浴中冷却,用冰醋酸稀释至刻度,
摇匀,静置 5 min。 以试剂空白建立基线,在 400~700
nm 扫描波长,确定最大吸收波长 [10-13]。
1.3.4 齐墩果酸标准曲线的绘制 吸取浓度 200
mg/mL 的齐墩果酸标准溶液 0、1.00、2.00、3.00、
4.00、5.00 mL 分别置于 6 支 10 mL 比色管中, 以下
操作同 1.3.3“于 85 ℃挥干溶剂”,以试剂空白为参
比,于 540 nm下测定吸光度,以吸光度为纵坐标,齐
墩果酸质量浓度为横坐标,绘制标准曲线[10-13]。
1.3.5 样品测定 量取点地梅乙醇提取液 1.00 mL
于 10 mL 比色管中,以下操作同“1.3.3”,样品液于
540 nm 波长下测得点地梅提取液的吸光度,代入回
归方程得点地梅的总三萜类化合物浓度,并计算干
燥药材中总三萜含量[10-13]。
1.3.6 重复性试验 称取点地梅样品 5 份,按含量
测定方法测定,计算平均含量。
1.3.7 加标回收试验 量取点地梅提取液 1.00 mL
3 份 , 再分别精确加入齐墩果酸标准溶液 (200
mg/mL)1.00 mL,测定后计算加标回收率。
2 结果与分析
2.1 总黄酮的测定结果
以吸光度为纵坐标, 芦丁质量浓度为横坐标,
绘制标准曲线 (图 1), 得方程 y=10.27x+ 0.013 8,
R2=0.999 9, 结果表明, 芦丁在 0.013 8~0.220 0
mg/mL 范围内吸光度与质量浓度呈良好线性关
系。
在加显色剂后,芦丁标准溶液和点地梅样品溶
液显色后在 510 nm处均有较平缓的吸收峰,适于定
量测定,故将测定波长选定为 510 nm。5次测定的点
地梅样品中总黄酮含量为 6.863%,RSD 为 1.47%,
精密度高。
点地梅中总黄酮加标回收试验结果见表 1。 由
表 1可知,总黄酮测定的平均加标回收率为 95.1%,
RSD为 1.39%, 表明该方法适用于点地梅样品中总
黄酮的测定。
2.2 总三萜的测定结果
齐墩果酸及点地梅提取液显色后在 540 nm 均
有最大吸收,故以 540 nm 作为总三萜的测定波长。
以吸光度为纵坐标, 齐墩果酸质量浓度为横坐标,
绘制标准曲线(图 2),得方程 y=0.011 3x-0.017 7,R2=
0.999 1,齐墩果酸浓度在 0~100 mg/mL范围内吸光度
与质量浓度线性关系良好。
5 次测定的点地梅样品中总三萜的平均含量为
8.832%,RSD 为 1.02%,精密度较高。 由表 2 可知,
总三萜的平均加标回收率为 92.6%,RSD 为 7.2%,
表明该方法适用于点地梅样品中总三萜含量的测定。
3 小结
点地梅是我国西南地区少数民族的常用草药,
表 1 点地梅中总黄酮加标回收试验结果
样品总黄酮//mg
1.732
1.732
1.732
加标量//mg
2.200
2.200
2.200
测得量//mg
3.798
3.832
3.850
回收率//%
93.6
95.5
96.3
平均值//%
95.1
RSD//%
1.39
图 1 芦丁标准溶液的标准曲线
0.0 0.1 0.2 0.3
质量浓度//mg/mL
何可群:点地梅中总黄酮及总三萜含量的测定
2.5
1.5
0.5
0.0



//a
.u
.
图 2 齐墩果酸标准溶液的标准曲线
质量浓度//mg/mL
0 20 40 60 80 100
1.2
1.0
0.8
0.6
0.4
0.2
0.1



//a
.u
.
1903
湖 北 农 业 科 学 2014 年
2003,66(6):25-30.
[5] 许树松 . 乙二醛生产工艺评述 [J]. 化学工业与工程技术 ,
2000,21(4):39-42.
[6] 李滨涛, 李玉英, 李光伟. 乙二醛的工业生产[J]. 化工科技,
2001,9(1): 68-72.
[7] 韦少义.实验设计在合成乙二醛中的应用[J]. 石化技术与应用,
1999,17(4):205-207.
[8] 柯斌清.乙二醛生产现状及应用[J].石油化工,1994,23(6):412-
415.
[9] CLEMENTS J S, SATO M, DAVIS R H. Preliminary investi-
gation of prebreakdown phenomena and chemical reactions us-
ing a pulsed high-voltage discharge in water[J].Industry Appli-
cations, IEEE Transactions on,1987(2):224-235.
[10] 陈银生,张新胜,袁渭康.高压脉冲电晕放电等离子体降解废水
中苯酚[J]. 环境科学学报, 2002,22(5):566-569.
[11] SATO M, OHGIYAMA T, CLEMENTS J S. Formation of
chemical species and their effects on microorganisms using
a pulsed high-voltage discharge in water [J]. Industry Appli-
cations, IEEE Transactions on,1996,32(1):106-112.
[12] GAO J,WANG X,HU Z, et al.Plasma degradation of dyes in
water with contact glow discharge electrolysis [J]. Water re-
search,2003,37(2):267-272.
[13] GAO J Z,WANG X Y, HU Z A,et al. A review on chemical
effects in aqueous solution induced by plasma with glow dis-
charge[J]. Plasma Science and Technology,2001,3(3):765.
[14] ZHANG R B, ZHANG C, CHENG X X, et al. Kinetics of
decolorization of azo dye by bipolar pulsed barrier discharge
in a three -phase discharge plasma reacto r [J]. Journal of
Hazardous materials,2007,142(1):105-110.
[15] WANG S R, LIU Q, LIAO Y F, et al. A study on the
mechanism research on cellulose pyrolysis under catalysis of
metallic salts [J]. Korean Journal of Chemical Engineering,
2007,24(2): 336-340.
[16] SHEN D K, GU S. The mechanism for thermal decomposi-
tion of cellulose and itsmain products [J]. Bioresource tech-
nology,2009,100(24):6496-6504.
[17] BRADBURY A G W, SAKAI Y, SHAFIZAEH F.A kinetic
model for pyrolysis of cellulose[J].Journal of Applied Polymer
Science, 1979,23(11):3271-3280.
(责任编辑 温 亮)
(上接第 1901页)
表 2 加标回收试验结果
样品总黄酮//mg
1 767.9
1 767.9
1 767.9
加标量//mg
150
150
150
测得量//mg
1 895.2
1 911.3
1 913.7
回收率//%
84.9
95.6
97.2
平均值//%
92.6
RSD//%
7.2
但迄今为止,其资源还未充分开发和利用。 三萜酸
类及黄酮类物质具有广泛的生理活性, 如抗肿瘤、
抗菌、抗病毒、抗炎、降低胆固醇、降血糖[14,15]、强心、
降血脂、抗氧化、提高免疫力等 [16],分析药用植物的
总三萜酸及总黄酮含量将有助于深入开发相关药
用资源。 本试验分析了点地梅的总黄酮及总三萜含
量,结果表明点地梅干燥全草总黄酮及总三萜含量
分别为 6.863%和 8.832%, 为其开发及利用提供科
学参考。
参考文献:
[1] 云南省卫生厅.云南中草药[M].昆明:云南人民出版社,1971.
[2] 左经会 .六盘水药用植物[M].北京:科学出版社,2013.
[3] ANG Y,ZHANG D M, YE W C, et al. Triterpenoid
saponins from Androsace umbellata and their anti-proliferative
activities in human hepatoma cells [J]. Planta Med,2008,74
(10):1280-1284.
[4] YIN Z Q, LI C H, WANG Y, et al. Two new phenolic gly-
cosides from the aerial parts of Androsace umbellate [J]. Chi-
nese Chemical Letters, 2009,20(7):836-838.
[5] 王文静,雷军,肖云川,等.点地梅中双黄酮类化学成分的分离和
鉴定[J].华西药学杂志,2011,26(5):420-423.
[6] 雷 军,肖云川,王文静,等.点地梅中的黄酮苷成分[J].中国中
药杂志,2011,36(17):2353-2357.
[7] 黄先丽,王晓静,贾献慧.点地梅的挥发油成分分析[J].食品与药
品,2009,11(3):32-34.
[8] 蔡亚玲,阮金兰,苏 群,等 .紫背鼠尾草中总三萜酸的含量测
定[J].中药材,2008,31(5):692-693.
[9] 何可群,卢文芸,李相兴.贵州鼠尾草的总黄酮含量测定[J].贵州
农业科学,2013,41(1):77-79.
[10] 刘玉明,柴逸峰,娄子洋,等.分光光度法测定蓝桉果实总三萜
酸[J].中国医院药学杂志,2005,25(1):4-6.
[11] 袁 媛,杨 毅,开桂青,等.灵芝三萜提取工艺研究[J].安徽化
工,2007,33(4):27-29.
[12] 张雁冰,王克让,刘宏民.马桑叶中总三萜酸的含量测定[J].时
珍国医国药,2006,17(4):529-530.
[13] 易中宏,郑一敏,胥秀英,等.分光光度法测定茯苓中总三萜类
成分的含量[J].时珍国医国药,2005,16(4):847-848.
[14] 姚新生,吴立军 .天然药物化学[M].北京 :人民卫生出版社 ,
2003.306.
[15] 谭世强,谢敬宇,郭 帅,等.三萜类物质的生理活性研究进展
[J].2012,28(36):23-27.
[16] 韩公羽,沈企华,韩绍雯.植物药黄酮成分与生理生化活性[M].
北京:中国书籍出版社,2010.
(责任编辑 周有祥)
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