全 文 ：〔World Science and Technology/Modernization of Traditional Chinese Medicine and Materia Medica〕 129
世界科学技术—中医药现代化★中药研究
HPLC法同时测定白鲜皮配方颗粒中白鲜碱、
黄柏酮和梣酮的含量＊
巩　伟＊＊，刘忠良，张欣欣，孙　旭，赵庆华，李兴东，张　琨，赵　梅
（济南军区联勤部药品仪器检验所　济南　250022）
摘　要：目的：建立同时测定白鲜皮配方颗粒中白鲜碱、黄柏酮和梣酮含量的方法。方法：色谱柱为
Agilent Extend C18（250 mm× 4.6 mm，5 μm），流动相为甲醇-水（55:45），流速为 1.0 mL·min-1，检测波长为
236 nm，柱温为室温，自动进样器进样，进样量 10 μL。结果：白鲜碱在 2.505-40.08 μg·mL-1质量浓度范围
内与峰面积具有良好的线性关系（R2=0.999 7，n=5），平均回收率为 99.04%（RSD=1.51%，n=6）；黄柏酮
在 26.12-418.0 μg·mL-1质量浓度范围内与峰面积具有良好的线性关系（R2=0.999 8，n=5），平均回收率为
99.48%（RSD=2.25%，n=6）；梣酮在 7.540-120.6 μg·mL-1质量浓度范围内与峰面积具有良好的线性关系
（R2=0.999 8，n=5），平均回收率为 99.54%（RSD=2.09%，n=6）。结论：本法操作方便，结果准确，精密度好，
专属性强，可用于白鲜皮配方颗粒的质量控制。
关键词：高效液相色谱法　白鲜皮配方颗粒　白鲜碱　黄柏酮　梣酮
doi：10.11842/wst.2015.01.022　　中图分类号：R284.1　　文献标识码：A
中药配方颗粒[1-3]，原名颗粒型饮片，又称“免
煎中药”，系指传统单味中药饮片经提取或粉碎等
现代制药技术加工制成的颗粒剂。中药配方颗粒
可直接用于处方调配，并可按规定剂量直接冲服，
是中药汤剂标准化、现代化、国际化的一种积极探
索。经过 20 年的探索研究，中药配方颗粒以灵活
调配、方便使用等优点逐步被中医临床所认可，尤
其是出口型中药配方颗粒，逐渐得到了欧美、日本、
新加坡等国家患者的认可，为中医辨证理论和诊疗
方法走出国门创造了机遇。但截至目前，中药配方
颗粒的生产仍处于试点阶段，国家相关法定标准至
今未出台，在生产、流通、监督和管理等方面都面临
挑战。
白 鲜 皮 为 芸 香 科 植 物 白 鲜 Dictamnus
dasycarpus Turcz. 的干燥根皮，具有清热燥湿、祛
　　　收稿日期： 2014-08-09
　　　修回日期： 2014-12-15
＊　　 军队医疗机构制剂标准提高专项课题（13ZJZ21-2）： 中药制剂微生物限度检查方法研究，负责人：刘忠良。
＊＊　通讯作者：巩伟，博士，主管药师，主要研究方向： 药品质量分析和新药研究。
风解毒之功效，临床用于湿热疮毒、黄水淋漓、湿
疹、风疹、疥癣疮癞、风湿热痹和黄疸尿赤[4]。药理
研究表明，白鲜皮具有良好的抗炎、抗菌杀虫、止
血抗过敏和抗肿瘤等多种活性[5]。白鲜皮的主要
有效成分为白鲜碱（C12H9NO2）等生物碱及黄柏酮
（C26H30O7）、梣酮（C14H16O3）等内脂类化合物[6]。其
中，白鲜碱具有强心、松弛血管、抗真菌等活性[7]；黄
柏酮具有保肝降酶、抑制肝纤维化等活性[8]；梣酮具
有抗癌[9]、杀虫[10] 等活性。白鲜皮配方颗粒以《中
国药典》规定的白鲜皮饮片为原料，通过提取、浓
缩、干燥、制粒等工艺制成，其性味归经、功能主治
与白鲜皮相同。将白鲜皮饮片制备成颗粒剂供配方
用，不仅能保留原生药的性味、主要有效成分和功
用功效，还可方便患者使用。本试验采用高效液相
色谱（HPLC）法测定白鲜皮配方颗粒中的白鲜碱、
黄柏酮、梣酮等 3 种有效成分的含量，为白鲜皮配
方颗粒国家法定标准的出台提供数据参考。
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1　仪器与试药
1.1　仪器
LC-20AT HPLC 仪（带 SPD-20A UV 检 测 器，
SIL-20A 自动进样器，日本岛津）；AUW220D 电子
天平（日本岛津）；AS-3120A 超声清洗器（天津奥特
赛恩斯）；Synergy-UV 超纯水器（法国 Millipore）。
1.2　试药
白鲜碱对照品（批号：111654-200301），黄柏酮
对照品（批号：111923-201102，含量测定以 98.9%
计算），梣酮对照品（批号：111700-200602），以上标
准物质均来源于中国药品生物制品检定研究院；甲
醇为色谱纯（TEDIA），水为超纯水（自制），其他试
剂均为分析纯。白鲜皮配方颗粒（9 批，其中：广东
一方制药有限公司 3 批，批号 1212760、1305713、
1307258，规格每袋装 1.1 g；华润三九医药股份有
限公司 2 批，批号 1401002S、1307002S，规格每袋
装 1 g；江阴天江药业有限公司 2 批，批号 1305155、
1402020，规格每袋装 1.5 g；北京康仁堂药业有限公
司 2 批，批号 130901、131211，规格每袋装 1 g；以
上 9 批每袋均相当于饮片 10 g）。
2　方法与结果
2.1　溶液制备
2.1.1　混合对照品溶液
取白鲜碱对照品、黄柏酮对照品、梣酮对照品适
量，精密称定，加甲醇制成每 1 mL 含白鲜碱 10 μg、
黄柏酮 100 μg、梣酮 30 μg 的对照品混合溶液。
2.1.2　供试品溶液
取装量差异项下的本品，研细，取约 3 g，精密称
定，置含塞锥形瓶中，精密加入甲醇 50 mL，称定重量；
超声处理（功率 250 W，频率 40 kHz）30 min，放冷，用
甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.2　色谱条件
色谱柱：Agilent Extend C18（250 mm×4.6 mm，
5 μm）；流 动 相：甲醇-水（55：45），流 速 1.0
mL·min-1；检测波长：236 nm；柱温为室温；自动进样
器进样，进样量 10 μL；理论板数按梣酮峰计不低于
3 000，各相邻色谱峰之间的分离度大于 1.5。色谱
图见图 1。
2.3　线性关系考察
取白鲜碱对照品、黄柏酮对照品、梣酮对照品
图 1　含量测定高效液相色谱图
注：A. 对照品溶液， B. 供试品溶液，1.白鲜碱，2.黄柏酮，3.梣酮。
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世界科学技术—中医药现代化★中药研究
适量，精密称定，分别用甲醇制成 5 种不同质量浓
度的混合对照品溶液，最终混合对照品溶液中白鲜
碱的质量浓度分别为 2.505、5.010、10.020、20.040、
40.080 μg·mL-1；黄柏酮的质量浓度分别为 26.12、
52.25、104.50、209.00、418.00 μg·mL-1；梣酮的质量
浓度分别为 7.540、15.080、30.160、60.320、120.640
μg·mL-1。取上述 5 种混合对照品溶液各 10 μL，注
入液相色谱仪，记录峰面积。以质量浓度（X，μg·mL-1）
为横坐标、峰面积（Y）为纵坐标，绘制标准曲线，得
回 归 方 程：白 鲜 碱，Y=2.26×105X-6.25×103（R2=0.999
7，n=5）； 黄 柏 酮，Y=6.62×103X-1.59×102（R2=0.999
8，n=5）； 梣 酮，Y=2.95×104X+6.96×103（R2=0.999 8，
n=5）。结果显示，白鲜碱在 2.505-40.080 μg·mL-1 质
量浓度范围内与峰面积具有良好的线性关系；黄柏
酮在 26.12-418.00 μg·mL-1 质量浓度范围内与峰面积
具有良好的线性关系；梣酮在 7.540-120.640 μg·mL-1
质 量 浓 度 范 围 内 与 峰 面 积 具 有 良 好 的 线 性
关系。
2.4　精密度试验
精密吸取同一混合对照品溶液，进样量 10 μL，
连续进样 6 次，测得白鲜碱、黄柏酮、梣酮的峰面积
的 RSD 分别为 1.43%、1.22%、0.91%，表明精密度
良好。
2.5　重复性试验
称取本品（广东一方，批号：1212760）6 份，各
约 3 g，精密称定，按“2.1.2”项下方法制备并测
定，测得白鲜碱、黄柏酮、梣酮的平均含量分别为
0.244 6 mg·g-1，2.978 4 mg·g-1，0.532 9 mg·g-1，
RSD 分 别 为 1.80%、2.04%、1.77%，表 明 重 复 性
良好。
2.6　稳定性试验
精密吸取同一供试品溶液各 10 μL，于 0、2、4、
8、12、24 h 分别测定峰面积。结果，白鲜碱、黄柏酮、
梣酮的峰面积的RSD分别为1.98%、2.51%、2.34%，
表明供试品溶液在 24 h 内稳定性良好。
2.7　加样回收率试验
取已知含量的样品（广东一方，批号：1212760）
6 份，每份约 1.5 g，精密称定，再分别按约 1：1 比例
加入白鲜碱对照品、黄柏酮对照品和梣酮对照品，
按“2.1.2”项下方法制备，测定并计算回收率，结果
见表 1。
2.8　样品含量测定
取装量差异项下的本品适量，按“2.1.2”项下
方法制备，测定并计算含量，结果见表 2。
表 1　加样回收率试验结果（n=9）
对照品 取样量/g 样品中含量/mg 对照品加入量/mg 实测值/mg 回收率/% 平均值/% RSD/%
白鲜皮 1.495 4 0.365 8 0.360 7 0.723 4 99.15 99.04 1.51
1.501 3 0.367 2 0.360 7 0.720 9 98.05
1.497 8 0.366 4 0.360 7 0.719 9 98.01
1.500 9 0.367 1 0.360 7 0.724 3 99.02
1.498 3 0.366 5 0.360 7 0.720 2 98.06
1.500 1 0.366 9 0.360 7 0.734 5 101.91
黄柏酮 1.495 4 4.453 9 4.598 0 8.949 8 97.78 99.48 2.25
1.501 3 4.471 5 4.598 0 8.990 8 98.29
1.497 8 4.461 0 4.598 0 8.976 5 98.20
1.500 9 4.470 3 4.598 0 9.183 9 102.51
1.498 3 4.462 5 4.598 0 8.963 6 97.89
1.500 1 4.467 9 4.598 0 9.166 7 102.19
梣酮 1.495 4 0.796 9 0.808 0 1.622 5 102.18 99.54 2.09
1.501 3 0.800 0 0.808 0 1.625 6 102.17
1.497 8 0.798 2 0.808 0 1.597 4 98.91
1.500 9 0.799 8 0.808 0 1.591 7 98.00
1.498 3 0.798 4 0.808 0 1.589 3 97.88
1.500 1 0.799 4 0.808 0 1.591 8 98.07
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3　讨论
3.1　含量限度的确定
根据《中国药典》中药质量标准分析方法验证
指导原则的要求[11]，含量限（幅）度的制定，应根据投
料饮片、有效成分转移率等实际情况确定。本次测
定 4 个厂家样品，共有 3 种规格（每袋装 1.1 g、1.0 g
和 1.5 g），虽然规格不一致，但每袋均相当于饮片
10 g，故在制定含量限度时以“mg·袋-1”为单位，有
利于统一制定含量限度。根据实验结果，4 个厂家 9
批次样品的含量平均值为：白鲜碱 0.245 mg·袋-1，
黄柏酮 3.06 mg·袋-1，梣酮 0.619 mg·袋-1。根据上
述测定结果，将平均值均降低 20%，初步拟定含量
限度为白鲜碱 0.20 mg·袋-1，黄柏酮 2.5 mg·袋-1，梣
酮 0.5 mg·袋-1。9 批样品的含量测定结果均高于上
述相应的含量限度值，该结果为白鲜皮配方颗粒中
白鲜碱、黄柏酮、梣酮含量限度的确定提供了参考。
3.2　试验方法的选择
选择测定波长时，用二极管阵列检测器扫描色
谱图，发现 3 种成分在 236 nm 时均有较大吸收，且
干扰较少，故选用 236 nm 为测定波长。
选择流动相时，对比考察了甲醇-水（55：45）、
甲醇-水（65：35）、乙腈-水（55：45）等 3 种流动相。
结果表明，选择甲醇-水（55：45）为流动相时响应
值好，峰形良好，理论板数、分离度、拖尾因子等均
符合要求，且 3 种目标成分的保留时间相对适宜。
本试验选用了不同厂家的色谱柱进行比较：
SHIMADZU VP-ODS 色 谱（150 mm×4.6 mm，
5 μm）、Agilent Extend C18（250 mm×4.6 mm，
5 μm）、Kromasil KR100-5-C18（150 mm×4.6 mm，
5 μm） 以 及 Inertsil ODS-3（250 mm×4.6 mm，
5 μm）。结果显示上述 4 种型号色谱柱的响应值均
较好，样品各组分分离度均良好，表明该方法耐用
性较好。
提取方法的选择，本试验考察了回流提取和超
声处理 2 种提取方法，峰面积结果显示回流提取和
超声处理的结果无显著性差异，考虑到操作方便，
本试验选择超声处理方法。
综上所述，本试验采用 HPLC 法测定白鲜皮配
方颗粒中白鲜碱、黄柏酮和梣酮的含量，方法操作
简便，、结果准确、灵敏度高、专属性强，可为白鲜皮
配方颗粒质量标准的制定提供参考。
表 2　样品含量测定结果
生产企业 批号 白鲜碱/mg·袋-1
黄柏酮/
mg·袋-1
梣酮/mg·袋-1
广东一方 1212760 0.269 3.28 0.586
1305713 0.255 3.05 0.555
1307258 0.283 3.44 0.592
华润三九 1307002S 0.232 2.97 0.687
1401002S 0.225 2.86 0.665
江阴天江 1305155 0.246 3.01 0.645
1402020 0.239 2.91 0.641
北京康仁堂 130901 0.219 2.89 0.597
131211 0.238 3.10 0.601
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参考文献
〔World Science and Technology/Modernization of Traditional Chinese Medicine and Materia Medica〕 133
世界科学技术—中医药现代化★中药研究
Simultaneous Determination of Dictamnine, Obacunone and Fraxinellone in Dictamni cortex Dispensing
Granules by HPLC
Gong Wei, Liu Zhongliang, Zhang Xinxin, Sun Xu, Zhao Qinghua, Li Xingdong, Zhang Kun, Zhao Mei
(Institute for Drug and Instrument Control, Joint Logistics Department of Jinan Military Command,
Jinan 250022, China)
Abstract: This study was aimed to establish an HPLC method for determination of dictamnine, obacunone and
fraxinellone in Dictamni cortex Dispensing Granules. The separation of samples was performed on an Agilent Extend
C18 (250 mm×4.6 mm, 5 μm) with the mobile phase of methol-water (55:45) at the flow rate of 1.0 mL·min-1. The
detection wavelength was set at 236 nm. The column temperature was set at the room temperature and the injection
volume (in automatic sampler) was 10 μL. The results showed that the linear range of dictamnine, obacunone and
fraxinellone was 2.505-40.08 μg·mL-1(R2=0.999 7, n=5), 26.12-418.0 μg·mL-1 (R2=0.999 8, n=5), 7.540-120.6
μg·mL-1 (R2=0.999 8, n=5), respectively. The average recovery of dictamnine, obacunone and fraxinellone was
99.04% (RSD=1.51%, n=6), 99.48% (RSD=2.25%, n=6), 99.54% (RSD=2.09%, n=6), respectively. It was concluded
that the method was easy and simple to operate, accurate and stable in results with good specificity, thus it was
applicable for the quality control of Dictamni cortex Dispensing Granules.
Keywords: HPLC, Dictamni cortex Dispensing Granules, dictamnine, obacunone, fraxinellone
（责任编辑：王俊丽　张志华，责任译审：王　晶）