全 文 ：化合物 2 为黄绿色针晶。负离子 ESI － MS m /z:577
(M － H)。1H NMR (DMSO － d6，300MHz) ，δ:6. 26
(1H，s，6 － H) ，6. 80(1H，s，3 － H) ，6. 91(2H，d，J =
8. 7Hz，3 － H，5 － H) ，8. 06(2H，d，J = 8. 7Hz，2 － H，
6 － H) ，10. 38(1H，s，4 － OH) ，10. 89(1H，s，7 －
OH) ，13. 14(1H，s，5 － OH) ，4. 77(1H，d，J = 9. 9Hz，
1″ － H) ，4. 99(1H，s，1 － H) ，0. 47(3H，d，J = 6. 0Hz，
rha － CH3)。以上 1H NMR 数据与文献报道一致［5］，
故化合物确定为牡荆素 － 4″ － O －葡萄糖苷。结构见
图 7。
3 讨 论
对山里红叶 70%乙醇提取物经大孔吸附树脂处
理后，正丁醇层采用硅胶柱色谱、聚酰胺柱色谱、薄层
色谱，葡聚糖柱色谱等技术进行分离纯化，因为成分复
杂，分离较困难，只有在溶剂中加少量酸，才能使黄酮
易于游离出来;处理浸膏时必须使用大孔吸附树脂，来
吸附的杂质，提高样品纯度，减少对成分的污染;洗脱
硅胶柱时，注意溶剂比例及洗脱时间，聚酰胺色谱柱和
制备薄层板在提高单体成分纯度，减少色素类干扰方
收稿日期:2010 － 07 － 20
基金项目:吉林省科技厅基金资助项目(200905109) ;吉林省教育厅基
金资助项目(2008 － 167，2008 － 170)
作者简介:王晶(1984 －) ，女(满族) ，吉林长春人，硕士研究生，研究方
向:天然药物分析。
通讯作者:刘春明(1964 －) ，女，吉林通化人，教授，博士研究生导师，研
究方向:天然药物分析，E － mail:chunmingliu2000 @ ya-
hoo. com. cn。
面起着至关重要的作用。洗脱葡聚糖柱时，用洗脱剂
将凝胶摇匀使其饱和，直立柱身，让其自然沉降，要防
止气泡留在其中。用尽量少的洗脱剂溶解样品，常压
过滤。湿法上柱，控制流速，一般 1 滴 / s以下。
图 7 牡荆素 － 4″ － O －葡萄糖苷化学结构图
参考文献
［1］ 国家药典委员会．中华人民共和国药典:1 部［S］．北京:化学工业
出版社，2010．
［2］ 斯建勇，陈迪华，高光跃，等．云南山楂叶化学成分研究［J］．中国
中药杂志，1998，23(7) :422 － 423．
［3］ 陈坚．山楂果肉、核、叶中总黄酮的含量测定与比较［J］．基层中药
杂志，1999，13(4) :8 － 9．
［4］ 孙敬勇，杨书斌，谢鸿霞，等． 山楂化学成分研究［J］． 中草药，
2002，33(6) :483 － 486．
［5］ 董英杰，戴宝合，张乃先等．大果山楂叶黄酮成分研究［J］．沈阳药
科大学学报，1996，13(1) :31 － 33．
不同红药提取物中总酚的测定及
抗氧化活性的 DPPH法评价研究
王晶1，李丽1，刘春明1，刘质净2，白鹤龙1
(1. 长春师范学院化学学院，吉林 长春 130032;2. 黑龙江中医药大学，黑龙江 哈尔滨 150040)
摘 要:目的:以红药中的总酚为研究对象，评价其抗氧化活性。方法:应用不同极性的萃取溶剂以及不同的提取方
法进行提取，采用 Folin － Ciocaileu比色法测定总酚含量，并以抗坏血酸(Vc)作为标准物质，结合清除有机自由基 DPPH
法评价红药提取物的抗氧化活性。结果:不同溶剂提取实验中正丁醇提取效果较好，不同提取方法提取中冷浸提取法的
效率最高;并且随着总酚含量的增加，其抗氧化活性明显增强。结论:红药的提取物有很好的抗氧化活性。
关键词:红药;总酚;DPPH;抗氧化
中图分类号:R284 文献标识码:A 文章编号:1000 － 1719(2011)03 － 0513 － 03
Studies on the determination and antioxidant activities of total phenolic
from different Chirita longgangensis var． hongyao extract
WANG Jing1，LI Li1，LIU Chun-ming1，LIU Zhi-jing2，BAI He-long1
(1. The Department of Chemistry，Changchun Normal University，Changchun 130032，Jilin，China;
2. Heilongjiang University of Traditional Chinese Medicine，Haerbin 150040，Heilongjiang，China)
Abstract:Objective:To evaluate the content and antioxidant activity of the total phenolic from Chirita longgangensis var．
hongyao． Methods:Different polarity solvent and extraction methods were attempted for the extraction of the total phenolic from
·315·辽宁中医杂志 2011 年第 38 卷第 3 期
DOI：10.13192/j.ljtcm.2011.03.134.wangj.063
Chirita longgangensis var． hongyao in this investigation． Folin － Ciocaileu method was developed for evaluation of the total phenolic
content of extracts． The antioxidative activity of total phenolic was determined by the capacity of scavenging 1，1 － diphenyl － 2 －
picrylhydrazyl(DPPH)free radical，and the evaluated unit was expressed as the equivalent concentration of ascorbic acid． Results:
The content of total phenolic and antioxidant activities of n － butanol extraction and soaking methods was the highest，respectively;
the efficiency increased with the content of total phenolic extracted from plants． Conclusion:The extracts owned obvious antiradical
capacity．
Key words:Chirita longgangensis var． hongyao;total phenolic;DPPH;antioxidant
红药是苦苣苔科(Gesneriaceae)唇柱苣苔属
(Chirita)植物红药(Chirita longgangensis W. T. Wang
var. hongyao S. Z. Huang)的全草，微甘，涩，平，具有温
补养血、消肿止痛、活血补血的功效［1］，为壮医常用药
材。
苦苣苔科大部分植物的研究并不深入。王文采
等［2］对我国苦苣苔科植物进行资源调查，整理发现许
多新的属种，自发表以来，除开展一些经典分类学方面
的研究外，尚未开展过其他方面的研究。近年来，国内
外对本科植物的研究逐渐深入，发现了一些具有生理
活性的新成分。从化学分类学的角度提出，本科植物
的特点为多含有苯乙醇苷类［3］，这类物质具文献报道
有抗炎、抗血小板聚集、抗菌、增强小鼠学习记忆、抗肿
瘤等多种生物活性［4 － 5］。
目前，对红药的药理活性研究的报道较少，王满元
等［6］在红药的化学成分和生物活性上进行研究，采用
动物实验初步验证了红药在传统功效方面的活性。覃
筱燕等［7］采用红药提取物对小鼠免疫功能的调节作用
进行研究。对红药的抗氧化活性研究在国内还未见报
道。
1 仪器与材料
Backman － DU800 紫外可见分光光度计(美国) ;
N － 1001 旋转蒸发仪(上海爱郎仪器有限公司) ;
SHB －Ⅲ循环水式多用真空泵(郑州长城科工贸有限
公司) ;BS － 124S 电子天平(德国) ;Elma － S180H 超
声清洗器(德国) ;加样枪(德国)。
红药(购于北京同仁堂长春药店，经长春中医药
大学鉴定教研室王淑敏教授鉴定为中药红药) ;抗坏
血酸、DPPH、Folin － Ciocalteu 试剂(购于 Sigma 公司，
美国) ;无水乙醇、甲醇、正丁醇等分析纯试剂(购于北
京精细化学品有限责任公司)。
2 方法与结果
2. 1 样品的制备
精密称取 1. 0010g，1. 0043g，1. 007g 红药样品粉
末，用 30mL，80%的乙醇溶液浸泡 1h。将浸泡液置于
30℃超声清洗器中，超声 1h。过滤样品溶液，旋转蒸
发至无乙醇味(＜ 40℃)。分别用 20mL 水饱和正丁
醇、乙酸乙酯和正己烷进行萃取 2 次，合并萃取液。旋
转蒸发至干，4mL甲醇溶出残渣，得红药粗提物。将样
品储存在 － 20℃冰箱中，备用。
精密称取 1. 0011g 红药样品粉末，用 50mL，80%
乙醇溶液浸泡 1h。将浸泡液置于 90℃水浴中，回流
1h。过滤样品溶液，减压回收至无乙醇味(＜ 40℃)。
使用 20mL 水饱和正丁醇萃取，萃取 2 次，合并萃取
液。减压回收至干，用 4mL 甲醇溶出残渣，得红药粗
提物。精密称取 1. 0032g 红药样品粉末，用 50mL，
80%乙醇溶液浸泡 1h。将浸泡液于常温下，使用磁力
搅拌器冷浸提取 1h。过滤样品溶液，减压回收至无醇
味(＜ 40℃)。处理同上，得红药粗提物。精密称取
1. 0018g红药样品粉末，用 50mL，80%乙醇溶液浸泡
1h。将浸泡液置于 35℃超声清洗器中，超声 1h。过滤
样品溶液，减压回收至无醇味(＜ 40℃)。处理同上，
得红药粗提物。将 3 份样品储存在 － 20℃冰箱中，备
用。
2. 2 红药抗氧化活性的评价
二苯基苦味肼基自由基［DPPH·］是一种稳定的
自由基，在 515nm 波长处有最大吸收。［DPPH·］溶
液呈紫色，其浓度与吸光度呈线性关系。在其溶液中
加入抗氧化剂，抗氧化剂可以与［DPPH·］自由基结
合或发生替代，使［DPPH·］自由基数量减少，溶液颜
色变浅，表现为吸光度不断减小，至达到稳定。借此可
评价抗氧化活性的大小，吸光度越小，其自由基清除剂
的清除能力越强。
精确称取抗坏血酸(Vc)1. 5mg，用 95%乙醇溶液
溶解，配成 150mg /L 的 Vc 的 95%乙醇溶液。分别将
Vc溶液稀释为 80mg /L，40mg /L，20mg /L 和 10mg /L，
避光保存，待用。精确称取 DPPH 2. 4mg 溶于少量
95%乙醇溶液，定容至 100mL，避光保存，待用。
将红药的提取物用甲醇稀释 100 倍，待用。取
0. 05mL溶液加入 2mL DPPH 溶液中，迅速混匀，室温
下静置 10min，以原溶剂调零点，在检测波长为 515nm
处测吸光度记为 Ai;同法 0. 05mL溶剂加入 2mL DPPH
溶液混匀测定吸光度记为 Ac;0. 05mL 样品溶液加入
2mL溶剂混匀测其吸光度记为 Aj。每一样品平行测 3
次，取其平均值。按照以下公式计算自由基清除率:
IP% =1 －［(Ai － Aj)/Ac］× 100，其中 Aj 反映了样品
自身对吸光度的贡献;Ac 为［DPPH·］本身在测定波
长的吸收;Ai样品对［DPPH·］作用后的吸光度数值。
同样方法测不同浓度的抗坏血酸溶液对 DPPH的清除
率。
2. 2. 1 抗坏血酸浓度与清除 DPPH 的关系 抗坏血
酸是常用的抗氧化剂，本试验采用抗坏血酸作为标准
品，抗坏血酸浓度与其对 DPPH 的清除率绘制标准曲
线，可以得到抗坏血酸浓度与 DPPH 清除率有较好线
性关系 y = 0. 587x + 2. 7937(r = 0. 9972)。样品的抗氧
化活性的当量浓度计算，根据所得线性方程换算成抗
坏血酸的浓度。
2. 2. 2 不同提取方法所得红药提取物的抗氧化活性
将不同方法所提取红药的粗提物，测定其对 DPPH
的清除率，然后根据所得线性方程将每克红药中抗氧
·415· 辽宁中医杂志 2011 年第 38 卷第 3 期
化成分的清除率换算成抗坏血酸溶液的浓度，结果如
表 1 所示。
表 1 不同提取物的抗氧化活性
提取方法
浓度
(mg /mL)
清除率
(%)
每克红药溶液的清除率换算成
抗坏血酸溶液的浓度(mg /g)
正丁醇 2. 5 40. 660 25. 803
乙酸乙酯 2. 5 21. 220 12. 556
正己烷 2. 5 9. 820 4. 788
冷浸提取 2. 5 49. 768 32. 009
超声提取 2. 5 46. 454 29. 752
回流提取 2. 5 39. 745 25. 180
从表 1 可以看出，不同溶剂提取物的抗氧化活性
有明显不同，其中，正丁醇提取物表现出最好的抗氧化
活性，其次是乙酸乙酯，正己烷提取物的抗氧化活性最
差。不同提取方法对所得到的提取物的抗氧化活性有
较大的影响，对 DPPH的清除率依次为常温冷浸提取、
超声波提取，最后为回流提取。
2. 3 样品总多酚含量测定
采用 Folin － Ciocalteu 方法，以没食子酸为标准
品，测定红药在冷浸、回流和超声提取物的总酚含量。
取 2mol /L的福林试剂，配制 0. 5mol /L 的福林标准试
剂，待用;称取 Na2CO30. 7521g，用蒸馏水定容至
100mL，得 7. 5%的 Na2CO3 溶液。用甲醇将待测样品
稀释 20 倍，待用。
准确移取样品稀释液 0. 2mL，加入 7. 5% 的
Na2CO3 标准溶液 0. 8mL，再加 1mL，0. 5mol /L 福林试
剂，混合后迅速摇匀。室温下静止 30min，于 765nm的
波长下，测定吸光度(以甲醇溶液代替样品液做空
白) ，平均测定 3 次。
结果表明，没食子酸浓度和吸光度线性关系较好
(r = 0. 9999) ，方程为 y = 9. 5623x － 0. 1332，测定了红
药不同提取物的总酚含量，如表 2 所示。结果表明，3
种不同提取溶剂对红药提取物影响较大，其中正丁醇
提取的效果最好，其次是乙酸乙酯，正己烷提取效果较
差;采用不同提取方法的实验中，冷浸提取物总酚的含
量最高，其次为超声提取物和回流提取物。
表 2 红药提取物的总多酚含量
提取方法 浓度(mg /mL)
每克红药中的总酚含量换算
成没食子酸含量(mg /g)
正丁醇 12. 5 8. 68
乙酸乙酯 25 2. 57
正己烷 25 0. 15
冷浸提取 12. 5 8. 83
超声提取 12. 5 8. 71
回流提取 12. 5 8. 03
2. 4 提取物的总酚含量与抗氧化活性关系
如表 1 和表 2 所示，正丁醇提取物的总酚含量和
抗氧化活性均比乙酸乙酯和正己烷的提取物的效果
好，因此，在不同方法提取中选用水饱和正丁醇对乙醇
提取物进行萃取。
结合表 1 和表 2 可以看出，提取物的总酚含量和
对 DPPH 自由基的清除能力，都是冷浸提取法 ＞超声
提取法 ＞回流提取放，可以看出红药提取物的总酚的
含量越高，其抗氧化活性越强。冷浸提取是在室温条
件下进行的，超声提取的温度为 35℃，回流提取在
90℃水浴中进行，可以看出随着提取温度的增高，提取
物对 DPPH的清除率明显下降(见表 1)。结合表 2 也
可以看出，提取物中的总酚含量也受到温度的影响，在
高温的情况下，含量较低。这可能是高温破坏了有效
成分，使其总酚含量下降，且抗氧化活性明显降低。
3 讨 论
以红药中的总酚为研究对象，分别应用了 3 种不
同的萃取溶剂(80%乙醇、正丁醇、乙酸乙酯)和(和 3
种不同方法即超声提取、回流提取及冷浸提取)进行
对其进行提取，采用 Folin － Ciocaileu 比色法测定红药
提取物中的总酚的含量，并以抗坏血酸作为标准物质，
结合 DPPH法评价红药提取物的抗氧化活性。实验结
果表明:水饱和正丁醇的萃取效果较好;而采用冷浸提
取得到的样品中总酚的含量较高，其次为超声提取，回
流提取的含量最低。研究发现红药具有很强的抗氧化
活性，室温下冷浸提取物抗氧化活性最强，回流提取物
最弱，可以看出温度对于提取物的抗氧化能力有一定
的影响。
参考文献
［1］ 中国药材公司．中国中药资源志要［M］．北京:科学出版社，1994:
1177．
［2］ 王文采．中国苦苣苔科的研究［J］． 植物分类学报，1975，13(2) :
62 － 75．
［3］ Jensen SR． Caffeoyl phenylethanoid glycoside in Sanango racemostum
and in the Gesneriaceae［J］． Phytochemistry，1996，43(4) :777 －
783．
［4］ Houghton PJ，Hikino H． Anti － hepatotoxic activity of extracts and con-
stituents of Buddleija species ［J］． Planta Medica，1989，55(1) :
123 － 126．
［5］ Kimura Y，Okuda H，Nishibe S，et al． Effects of caffeoyl glycosides on
arachidonate metabolism in leukocytes［J］． Planta Medica，1987，53
(1) :148 － 153．
［6］ 王满元，杨岚，屠呦呦，等．红药苯乙醇苷类化学成分的研究［J］．
中国中药杂志，2005，30(24) :1921 － 1922．
［7］ 覃筱燕，黎荣昌，唐丽，等． 红药提取物对小鼠免疫功能的调节作
用［J］．辽宁中医杂志，2008，35(6) :
檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾
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931 － 934．
《辽宁中医药大学学报》
2011 年征稿征订启事
《辽宁中医药大学学报》，月刊，2008 年入选中国科
技论文统计源期刊 CSTPCD(中国科技核心期刊) ，为辽宁
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年第 1 期封三)。本刊为 A4 开本，224 页，每册定价 8． 00
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vip． 163． com，地址:沈阳市皇姑区崇山东路 79 号，邮编:
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·515·辽宁中医杂志 2011 年第 38 卷第 3 期