全 文 ：［收稿日期］ 20100630(009)
［第一作者］ 梁成钦，助理研究员，主要从事天然药物化学研
究，Tel:13788571020，E-mail: lichqixing @ 163.
com
［通讯作者］ * 徐庆，教 授，主 要 从 事 药 理 学 研 究，Tel:
13978312099，E-mail:xq5895801@ 163. com
鹊肾树体外抗猴免疫缺陷病毒活性部位筛选
梁成钦1，周先丽1，段小群1，苏小建2，徐庆1*
(1. 桂林医学院，广西 桂林 541004;2. 广西师范大学环境与资源学院，广西 桂林 541004)
［摘要］ 目的:筛选鹊肾树枝提取物中具有抗猴免疫缺陷病毒(SIV)的活性部位。方法:以 SIV 为靶病毒和相应的
CEMx174 细胞系统为模型，以 3-叠氮胸苷(azidothymiding，AZT)为阳性对照药物，观察了鹊肾树枝的不同提取物对 SIV 的体外
抑制作用;以试管法和滤纸法鉴定活性部位可能含有的化学成分。结果:鹊肾树枝的石油醚萃取物在 62. 5 mg·L － 1时，对病毒
抗原细胞抑制率为 55. 9%;乙酸乙酯萃取物在其浓度为 15. 625 mg·L － 1时，对病毒抗原细胞抑制率为 41. 2%。石油醚萃取物
可能含有挥发油、油脂和甾体或三萜类物质，而乙酸乙酯萃取物可能含有酚类物质。结论:鹊肾树枝中具有一定的抗 SIV 作用
的成分可能为挥发油、油脂、甾体、三萜类或酚类物质。
［关键词］ 猴免疫缺陷病毒;鹊肾树;活性部位
［中图分类号］ R285. 5 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2011)01-0120-03
Screening of Active Fractions of Streblus asper
on Simian Immunodeficiency Virus
LIANG Cheng-qin1，ZHOU Xian-li1，DUAN Xiao-qun1，SU Xiao-jian2，XU Qing1*
(1. Guilin Medical College，Guilin 541004，China;
2. College of Environment and Resources of Guangxi Normal University，Guilin 541004，China)
［Abstract］ Objective:To screen the anti-simian immunodeficiency virus(SIV)active parts of the extracts
of stem of Streblus asper. Method:The inhibitory effects of different extracts on SIV were observed when SIV and
CEMx174 cell system were employed as the models and azidothymidine selected as the positive control drug. And
chemical constituents of the anti-SIV active parts were identified by the test tube method and round filter paper.
Result:The results showed that the inhibitory rates of SIV antigen positive cells were 55. 9% and 41. 2% when
62. 5 mg·L － 1 of petroleum ether extract and 15. 625 mg·L － 1 ethyl acetate extract of the stem of S. asper were used.
The petroleum ether extract might contain essential oil，grease，steroidal or triterpene material，while the ethyl
acetate extract contain phenolic compounds，indicating that the extract had certain inhibitory effect on SIV in vitro，
but the other extract of the stem had no such effect. Conclusion:Essential oil，grease，steroidal and triterpene or
phenolic compounds in the stem of S. asper may be the substance that has certain inhibitory effects on SIV.
［Key words］ simian immunodeficiency virus;Streblus asper;active part
当今社会危害最大的疾病之一的艾滋病 (AIDS)又称为获得性免疫缺陷综合征，它对人类生
存和社会的安定构成了巨大威胁，全世界科研工作
者正努力从各个方面寻找有效的抗艾滋病病毒的方
法［1］。
鹊肾树 Streblus asper 是 Streblus Lour.属，桑科植
物，分布广西、广东、云南等省，民间利用其提取液来
治疗发烧、痢疾、牙痛等疾病［2-3］。另外鹊肾树还可
以用于治疗溃疡，一些地区用它来减轻由于被蛇咬
·021·
第 17 卷第 1 期
2011 年 1 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol. 17，No. 1
Jan.，2011
DOI:10.13422/j.cnki.syfjx.2011.01.046
伤而产生的疼痛［4-5］。鹊肾树具有很多生理活性，具
有较大的开发价值。但至今为止，国内外尚未发现
有关其用于抗艾滋病毒(HIV)或抗猴免疫缺陷病毒
(SIV)的研究报道。SIV 与 HIV 同属慢病毒亚科，亲
缘关系较为密切，吴小闲等［6］的实验表明，SIV 可用
于模拟抗 HIV 药物的筛选。本文以 SIV 及相关细胞
(CEMx174)为模型，以 3-叠氮胸苷(azidothymiding，
AZT)为阳性对照药物，观察了鹊肾树枝的不同提取
物对 SIV 的体外抑制作用，并以试管法和滤纸法鉴
定具有抗 SIV 活性的部位可能含有的化学成分，为
进一步分离纯化出具有抗 SIV 的化合物打下基础。
1 材料
1. 1 药材和试剂 鹊肾树枝采自广西北海，并由中
国科学院广西桂林植物研究所黄定中副研究员鉴定
为桑科植物鹊肾树 S. asper 的枝;RPMI1640 为美国
GIBCO 公司(批号 1285082);AZT 为德国拜尔公司惠
赠;抗猴 IgG 荧光，抗 SIV 猴阳性血清来自中国医科
院实验动物研究所。其他试剂均为国产分析纯试剂。
1. 2 细胞系和病毒 细胞 CEMx174，病毒 SIV-
mac251 来源于美国 Aarond Diamond 艾滋病研究中
心，引自中国医科院实验动物研究所。
2 方法
2. 1 样品制备 取鹊肾树枝 2 kg，用适量 75%乙醇
浸提，用旋转蒸发器浓缩回收乙醇至溶液无乙醇味，
再分别用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，萃取液和
水溶液分别浓缩干燥后，便得到鹊肾树枝各部分样
品:样品 A (石油醚萃取物)、样品 B (乙酸乙酯萃取
物)、样品 C (正丁醇萃取物)、样品 D (萃取剩余的
水层)。这 4 种样品分别用质量分数为 10% 的
DMSO 溶解，使样品质量浓度为 25 g·L － 1储存，每次
试验时再用 RPMI 1640 溶液配成 2. 5 g·L － 1。
2. 2 样品对 CEMx174 细胞系的毒性试验 参照文
献［6］的方法进行。样品以 2. 5 g·L － 1为原液，然后
在 96 孔板上作系列 2 倍稀释。加入 3. 0 × 108 /L 的
CEMx174 细胞，100 μL /孔，置 37 ℃，5% CO2饱和湿
度培养箱培养，5 d 观察结果，选择对细胞无毒性的
药物浓度进行体外抑制实验。
2. 3 样品对 SIV 的体外抑制作用 在 24 孔板上每
孔加入 3 × 108 /L 10 个融合单位 SIV，CEMx174 单
细胞悬液各 0. 4 mL，然后加入待测药物 0. 8 mL，每
个药物稀释度做复孔，另设 AZT 阳性药及 SIV 对照
孔，置 37 ℃，5% CO2，饱和湿度培养箱，3 d 换 1 次原
稀释度药液，6 d ～ 7 d 待 SIV 对照孔细胞病变
(CPE)出现 ～时测定结果。
2. 4 病毒滴度滴定 将上清在 96 孔板上作 2 倍系
列稀释，加入 3 × 108 /L CEMx174 细胞 0. 1 mL，常规
培养，3 d 换液，6 d 观察细胞病变，以不加药物孔为
标准，观察药物细胞病变下降孔数。
2. 5 间接免疫荧光试验 细胞常规图片，冷丙酮固
定，用 SIV 阳性血清作间接免疫荧光染色，荧光显微
镜下计数各加样组 200 个细胞中 SIV 抗原阳性细胞
百分率和 SIV 对照孔的 SIV 抗原阳性细胞百分率，
计算阳性细胞抑制率
阳性细胞抑制率 =(病毒对照孔荧光细胞 －药物孔荧光
细胞)/病毒对照孔荧光细胞 × 100%
2. 6 结果判定 参照文献［6］，并根据实际实验中
阳性对照药物的试验结果，以病毒抗原阳性细胞抑
制率，病毒产量下降这 2 个参数来相互参考判定，具
体如表 1。
表 1 结果判定标准
结果判定
病毒抗原阳性
细胞抑制率 /%
病毒产量下降
(log2)
无抑制 < 30 < 0. 6
轻度抑制 31 ～ 40 0. 7 ～ 1. 2
中度抑制 41 ～ 60 1. 3 ～ 2. 0
高度抑制 > 60 > 2. 1
2. 7 化学成分预试验 将样品制备后根据供试液
可能含有的化学成分类型选择各类成分特有的化学
反应如颜色反应和沉淀反应等做一般定性预试。
3 结果
3. 1 毒性试验 从表 2 的结果可以看出，与空白对
照相比较，样品 A 在稀释度为 1 ∶ 40，B 在稀释度为
1∶ 160，C 在稀释度为 1 ∶ 320，D 在稀释度为 1 ∶ 20 时
无细胞毒性。
3. 2 药物对体外 SIV 的抑制作用 在本实验中，我
们采用 AZT 作为阳性对照，以 SIV 和 CEMx174 作为
模型系统，根据抗原阳性细胞的抑制率，培养物上清
中的病毒产量下降倍数和细胞病变 3 个指标来综合
判定实验结果。从表 3 结果看，样品 A(鹊肾树枝石
油醚萃取物)在 62. 5 mg·L － 1时具有中度的抗试管
内 SIV 活性，样品(鹊肾树枝乙酸乙酯萃取物)在
15. 625 mg·L － 1时具有轻度的抗试管内 SIV 活性，其
他的样品(正丁醇和水部分)在对细胞无毒浓度下
无试管内抑制 SIV 的作用。
·121·
梁成钦，等:鹊肾树体外抗猴免疫缺陷病毒活性部位筛选
表 2 鹊肾树枝提取物对 CEMx174 细胞的毒性
样品
药物稀释度
1∶ 10 1∶ 20 1∶ 40 1∶ 80 1∶ 160
A + + － － －
B    + －
C    + +
D + － － － －
空白对照 － － － － －
注::种入的细胞全部死亡;:种入的细胞大部分死亡，少数
细胞有暂时性分裂;:增殖的细胞少于细胞对照孔约 50%，死亡细
胞较多;+:增殖的细胞少于细胞对照孔约 25%;－:细胞生长良好，
与细胞对照孔比较无明显差异。
表 3 鹊肾树枝提取物对 SIV 活性的抑制作用
药物 稀释度
质量浓度
/μg·mL － 1
病毒抗原细胞
抑制率 /%
病毒滴度
下降 / log2
细胞病变
A 1∶ 40 62. 5 55. 9 1. 2 +
B 1∶ 160 15. 6 41. 2 1. 5 
C 1∶ 320 7. 8 26. 5 0. 9 
D 1∶ 20 125. 0 0 0 
AZT1) － 2 88. 2 2. 1 +
注:1)AZT 浓度单位是 μmol·L － 1。
3. 3 化学成分预试验 表 4 和表 5 的实验结果表
明，试验的石油醚萃取物的可能含有挥发油和油脂
类和甾体或三萜类物质，而乙酸乙酯萃取物可能含
有酚类而不含有生物碱、黄酮、蒽醌、强心苷和三萜
与甾体类化学成分。
4 讨论
在动、植物界中存在着无数的结构新颖且具有
活性的化合物，中草药是极具抗 SIV 治疗开发前景
的自然宝库。从以上实验结果可以看出，鹊肾树枝
的提取物具有一定的抗 SIV 作用，虽然相应的提取
物在考察的浓度内抗 SIV 活性与对照药物相比并不
是很高，但该研究结果说明，通过进一步分离和纯化
有可能提高其抗 SIV 作用，甚至有可能在该植物中
找到具有更好的抗 SIV 活性的化学单体成分。实验
结果表明，鹊肾树中抗 SIV 活性的成分可能为挥发
油、油脂、甾体、三萜类或酚类物质，这为进一步进行
鹊肾树化学成分分离和纯化明确了方向。由于 SIV
模型系统比 HIV 模型系统更安全和方便［6］，所以可
以继续采用该模型系统进一步在鹊肾树分离和纯化
过程中进行抗 SIV 药物成分选筛，以更快速和高效
找到高活性化学成分。
表 4 石油醚萃取物的化学成分预试结果
检查项目 试液或反应名称 正反应指标 现象 结论
甾体或三萜类 醋酐-浓硫酸试验 颜色由黄-红-紫-污绿色 污绿色 正反应
挥发油和油脂类 滤纸实验 滤纸上有油斑 无油斑 正反应
表 5 乙酸乙酯萃取物的化学成分预试结果
检查项目 试液或反应名称 正反应指标 试验现象 结论
酚类 三氯化铁试液 呈绿色、蓝色或暗紫色 暗紫色 正反应
生物碱类 硅钨酸试剂 有淡黄色或白色沉淀 棕黄色沉淀 负反应
黄酮 三氯化铝试剂 荧光变黄或加深 无荧光 负反应
蒽醌 碱性实验 加碱变红色，加酸褪色 不变色 负反应
三萜与甾体类 醋肝-浓硫酸试验 颜色由黄-红-紫-污绿色 不变色 负反应
强心苷 3，5-二硝基苯甲酸试液 呈紫色或红色 不变色 负反应
［致谢］ 广州中医药大学热带医学研究所张奉学研究
员在本实验中给予帮忙。
［参考文献］
［1］ 王晓华，王巍，程明和，等 . 抗艾滋病海洋天然产物的
研究进展［J］. 药学实践杂志，2008，26(5):334.
［2］ 中国科学院中国植物志编委会 . 中国植物志第一分
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［3］ Taweechaisupapong S，Wongkham S， Rattanathongkom
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Assoc Thai，2002，52:383.
［4］ 贺竹梅，张奉学，邓文娣，等 . 大豆皂甙复合物抑制猴
免疫缺陷病毒活性的观察［J］. 应用与环境生物学报，
1998，4(4):383.
［5］ Mukherjee，K，Roy，L. Chemical examination of Streblus
asper leaves［J］. International J Crude Drug Research，
1983(21):189.
［6］ 吴小闲，何伏秋，涂新明，等 . 应用 SRV21 和 SIV 靶病
毒建立模拟抗人免疫缺陷病毒药物筛选方法的研究
［J］. 中华实验和临床病毒学杂志，1993，7:230.
［责任编辑 聂淑琴］
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第 17 卷第 1 期
2011 年 1 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol. 17，No. 1
Jan.，2011