全 文 ：川滇桤木（Alnus ferdinandi-coburgii）为桦木科
桤木属植物，为中国特有植物。分布于中国大陆的
贵州、四川、云南等地，在民间被广泛用于治疗鼻
衄，肠炎，痢疾等症。有研究显示，桤木属植物主要
含有二芳基庚烷类化合物〔1〕和齐墩果酸、喜树碱、
绿原酸〔2〕等化学成分，并具有抗氧化活性和抗肿瘤
成分〔3-4〕。其中黄酮类化合物具有保肝、降压、抗菌、
抗病毒、抗炎、泻下、解痉及雌性激素样〔5-8〕等多种
药理作用，有着独特的医疗、保健功能。本实验研究
采用紫外-可见分光光度法，建立川滇桤木果实中
总黄酮的含量测定方法，为川滇桤木资源的进一步
开发利用提供理论依据。
1 仪器与试药
1.1 仪器 双光束紫外-可见分光光度计（TU-
1901，北京普析通用仪器有限公司）；超声波清洗器
（SB2200，宁波新芝生物科技股份有限公司）；电子
天平（AE240，瑞士梅特勒）；恒温水浴锅（SSY-4，北
京泰克仪器有限公司）；电热恒温鼓风干燥箱
（DHG-9420A，上海一恒科学仪器有限公司）。
1.2 试药 桤木（采自大理苍山花甸坝、清碧溪、感
通寺三个地点，由大理学院生药学教研室杨月娥老
师鉴定为川滇桤木）；芦丁对照品（中国药品生物制
品检定所，批号：110721-200613），其它试剂均为分
析纯。
2 方法与结果
2.1 溶液的配制
2.1.1 对照品溶液的制备 精密称取芦丁对照品
9.5 mg于10 mL量瓶中，加70％甲醇溶解并定容，摇
匀，即得浓度为0.95 mg/mL的对照品溶液〔9-10〕。
2.1.2 供试品溶液的制备 精密称取桤木果实粉
末0.5 g，置100 mL具塞圆底烧瓶中，精密加入70％
甲醇25 mL，密塞，称重，超声处理50 min，用70％甲
醇补足减失重量，用0.45 μm过滤器滤过，即得。
2.2 测量波长的选择 分别精密量取“2.1.1项”下
川滇桤木果实中总黄酮的含量测定
杨晓珍，尹腊梅，杨永寿*
（大理学院药学与化学学院，云南大理 671000）
［摘要］目的：建立川滇桤木果实中总黄酮的含量测定方法。方法：采用紫外-可见分光光度法，以芦丁为对照品测定川滇桤木果
实中总黄酮的含量。结果：芦丁在0.19~0.95 mg/mL范围内呈良好的线性关系，A=1.082 6C+0.049 7（r=0.999 6），平均加样回收率
为99.6％，RSD为1.09％（n=6）。结论：该方法操作简便、快速、准确、重现性好，可作为川滇桤木果实中总黄酮的含量测定方法。
［关键词］川滇桤木；总黄酮；紫外-可见分光光度法
［中图分类号］R284.2 ［文献标志码］A ［文章编号］1672-2345（2013）12-0009-03
Determination of Content of Total Flavones in Alnus ferdinandi-coburgii
YANG Xiaozhen, YIN Lamei , YANG Yongshou*
（College of Pharmacy and Chemistry, Dali University, Dali, Yunnan 671000, China）
〔Abstract〕Objective: To establish a method for determining the content of flavonoid in Alnus ferdinandi-coburgii. Methods: The
content of flavonoid was detected from Alnus ferdinandi-coburgii by UV-visible method and the rutin was used as control．Results:
Rutin was good linear in the range of 0.19 ~ 0.95 mg/mL :A=1.082 6C+0.049 7（r=0.999 6）the average recovery of 99.6﹪ and RSD
of 1.09﹪（n=6）. Conclusion: The method is simple, rapid and accurate. It can be used for determining the content of total flavones
in Alnus ferdinandi-coburgii.
〔Key words〕Alnus ferdinandi-coburgii; flavonoid; UV-visible method
［DOI］10. 3969 / j. issn. 1672-2345. 2013.12. 003
大理学院学报
JOURNALOFDALIUNIVERSITY
第12卷 第12期 2013年12月
Vol.12 No.12 Dec. 2013
9
对照品溶液和“2.1.2项”下供试品溶液1 mL于10 mL
量瓶中，加入5％NaNO2溶液0.1 mL，摇匀，放置6 min，
加入10％Al（NO3）3溶液0.1 mL，摇匀，放置6 min，加
入4％NaOH溶液1 mL，加入60％乙醇至刻度，摇匀，
放置15 min，即得对照品和样品测定液，同法配制空
白对照液。以空白对照液校正仪器，在400～800 nm
范围分别扫描对照品测定液和样品测定液。实验结
果表明对照品和样品测定液在500 nm处均有最大
吸收，故实验中选择500 nm作为测量波长。见图1。
图1 对照品（Ⅰ）和样品（Ⅱ）溶液的光谱吸收曲线
2.3 单因素考察
2.3.1 溶剂浓度考察 精密称取过2号筛的桤木果
实粉末6份，每份0.5 g，置100 mL具塞圆底烧瓶中，
分别精密加入50％、60％、70％、80％、90％、100％的
甲醇溶液25 mL，称重，超声（300 W，50 Hz）处理40
min，冷却，补重，按“2.2项”下方法从“加入5％NaNO2
溶液0.1 mL”起显色，在500 nm处测定吸光度，结果
表明溶剂的最佳提取浓度为70％的甲醇溶液。
2.3.2 提取时间考察 精密称取过2号筛的桤木果
实粉末6份，每份0.5 g，置100 mL具塞圆底烧瓶中，
精密加入70％的甲醇溶液25 mL，称重，提取时间分
别为20、30、40、50、60、70 min，冷却，补重。按“2.2
项”下方法从“加入5％NaNO2溶液0.1 mL”起显色，在
500 nm处测定吸光度，结果表明超声提取50 min即
可将桤木果实中总黄酮提取完全。
2.3.3 显色时间考察 精密称取过2号筛的桤木果
实粉末5份，每份0.5 g，置100 mL具塞圆底烧瓶中，
精密加入70％的甲醇溶液25 mL，超声提取50 min，
冷却，补重，按“2.2项”下方法从“加入5％NaNO2溶
液0.1 mL”起显色，显色时间分别为10、15、20、25、
30 min，在500 nm处测定吸光度，结果表明最佳显
色时间为15 min。
2.4 标准曲线的绘制 精密移取“2.1.1项”下配制
的对照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL于10 mL量瓶
中，按“2.2项”下方法从“加入5％NaNO2溶液0.1 mL”
起显色，在500 nm下测定其吸光度并以未加对照
品溶液为空白对照。以浓度（C）为横坐标，吸光度
（A）为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程为：A=
1.082 6C+0.049 7（r=0.999 6）。结果表明芦丁在
0.19~0.95 mg/mL范围内呈良好的线性关系。
2.5 精密度试验 取“2.1.1项”配制的对照品溶液，
按“2.2项”下方法从“加入5％ NaNO2溶液0.1 mL”起
显色，于500 nm处重复测定吸光度6次，测定结果的
RSD为0.13％（n=6），表明仪器的精密度良好。
2.6 稳定性试验 精密称取同一批次桤木果实样
品0.5 g，按照“2.1.1项”下方法制备样品溶液，精密
量取1.0 mL样品溶液于10 mL量瓶中，按“2.2项”下
方法从“加入5％NaNO2溶液0.1 mL”起显色，每隔
10 min测定1次吸光度，结果表明样品溶液在60 min
内稳定，RSD为2.50％（n=7）。
2.7 重复性试验 精密称取同一批次桤木果实样
品6份，每份约0.5 g，按照“2.1.1项”下方法制备样品
溶液，精密量取1.0 mL于10 mL量瓶中，按照“2.2项”
下方法从“加入5％NaNO2溶液0.1 mL”起显色，测定，
计算得样品中总黄酮的平均含量为42.38 mg/g，RSD
为1.49％（n=6），表明方法的重复性良好。
2.8 回收率试验 精密称取已知总黄酮含量
（42.38 mg/g）的桤木果实样品6份，每份约0.25 g，分
别依次精密加入新配的10 mg/mL对照品溶液10
mL，按照“2.1.2项”下方法制备样品溶液（总溶剂量
25 mL），精密量取1.0 mL于10 mL量瓶中，按“2.2项”
下方法从“加入5％NaNO2溶液0.1 mL”起显色，测定
其吸光度，计算回收率。见表1。
2.9 样品含量测定 分别精密称取采自大理苍山
三个不同地点（花甸坝、清碧溪、感通寺）的桤木果实
样品粉末约0.5 g，各3份，按“2.1.2项”下方法制备样
品溶液，按“2.2项”下方法从“加入5％ NaNO2溶液
0.1 mL”起显色测定，计算样品中总黄酮的含量。见
表2。
3 讨论
在进行川滇桤木果实中总黄酮的含量测定研
大理学院学报总第 120期 医学
Ab
s
波长/nm
10
究之前，我们已对桤木的各个部位：花、果实、枝、
叶、皮进行了预实验，结果表明川滇桤木果实和花
中存在黄酮类化合物，为测定其含量，分别对川滇
桤木果实和花的甲醇提取液进行紫外-可见光谱扫
描，结果表明川滇桤木果实和花的甲醇提取液和芦
丁对照品溶液具有相同的光谱吸收曲线，果实中黄
酮类化合物的含量较高，吸收较强，而花中黄酮类
化合物的含量很低，吸收很弱，用紫外-可见分光光
度法不能准确测定。
实验对川滇桤木果实中影响总黄酮测定的各
因素进行了考察，分别考察了提取时间、甲醇浓度、
显色时间，结果表明用70％甲醇超声提取50 min可
将川滇桤木果实中黄酮类化合物提取完全，最佳显
色时间为15 min。
本实验建立的紫外-可见分光光度法测定川滇
桤木果实中总黄酮含量，方法简便、快捷、灵敏度
高、稳定性好、结果准确可靠，可作为川滇桤木果实
中总黄酮的含量测定方法。
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［基金项目］大理学院大学生科研基金资助项目（DXSKY201213）
［收稿日期］2013-08-30 ［修回日期］2013-10-15
［作者简介］杨晓珍，药学专业2010级本科生.
*通信作者：杨永寿，高级实验师.
（责任编辑 李 杨）
表1 加样回收率试验结果（n=6）
样品采摘地 含量/（mg/g） 平均值/（mg/g） RSD/％
大理苍山花甸坝
38.98
39.5039.42 1.44
40.11
大理苍山清碧溪
42.09
42.45
45.87
42.82 0.86
42.43
大理苍山感通寺
45.36
46.07 0.8045.77
表2 不同地区桤木果实中总黄酮的含量测定结果（n=3）
称样量/g 样品含量/mg 加入量/mg 测得量/mg 回收率/％ 平均回收率/％ RSD/％
0.250 9 10.63 10.00 20.69 100.6
99.6 1.09
0.248 7 10.54 10.00 20.39 98.5
0.249 9 10.59 10.00 20.56 99.7
0.250 2 10.60 10.00 20.51 99.1
0.249 3 10.56 10.00 20.43 98.7
0.250 3 10.61 10.00 20.73 101.2
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杨晓珍，尹腊梅，杨永寿 川滇桤木果实中总黄酮的含量测定 第 12卷总第 120期
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