全 文 ： 制剂与炮制
收稿日期:2009-05-26; 修订日期:2009-09-14
基金项目:国家 “ 973”计划前期研究专项(No.2007CB516805);
广西科技厅应用基础研究专项(桂科基 0731050);
广西医药产业人才小高地项目(No.0809)
作者简介:杨瑞云(1978-),女(汉族),广西桂林人 ,现任广西师范大学化
学化工学院副教授 ,博士学位 ,主要从事天然有机化学研究工作.
灵香草中总黄酮的提取工艺研究
杨瑞云 ,李 远 ,梁凤琴 ,兰艳素 ,楚利敏 ,管海波 ,银小玲
(广西师范大学药用资源化学与药物分子工程教育部重点实验室 ,广西 桂林 541004)
摘要:目的 研究灵香草中总黄酮的最佳提取工艺。方法 采用正交实验 , 考察了溶剂浓度 、液料比 、提取时间 、提取次数
对灵香草中总黄酮提取量的影响。结果 灵香草中总黄酮最佳提取工艺为 60%乙醇 , 液料比 10∶1, 提取 3次 , 2 h/次。
结论 该工艺简单易行 ,是灵香草中提取总黄酮的有效途径。
关键词:灵香草; 总黄酮; 提取工艺; 正交实验
DOI标识:doi:10.3969 /j.issn.1008-0805.2010.07.071
中图分类号:R284.2 文献标识码:A 文章编号:1008-0805(2010)07-1718-02
StudyontheExtractionConditionoftheTotalFlavonoidsfromLysimachiafoenum -
graecumHance
YANGRui-yun, LIYuan, LIANGFeng-qin, LANYan-su, CHULi-min, GUANHai-bo, YINXiao-ling
(KeyLaboratoryforChemistryandMolecularEngineeringofMedicinalResources, MinistryofEducationofChi-
na, GuangxiNormalUniversity, Guilin541004 , China)
Abstract:ObjectiveTostudyandoptimizetheextractiontechniqueofthetotalflavonoidsinLysimachiafoenum -graecum
Hance.MethodsOrthogonaltestwascarriedouttoinvestigatetheeffectsofconcentrationofsolvent, theradioliquidtomaterial,
timeofextraction, andfrequencyofextractiononextractionresultsoftotalflavonoidsfromLysimachiafoenum-graecumHance.
ResultsTheoptimumextractiontechniquewastoextractLysimachiafoenum -graecumHancein60% ethanolwiththeratioof
liquidtomaterialat10∶1 3 times, with2 hoursforeachtime.ConclusionTheoptimaltechniqueissimpleandfeasible, and
canprovidereferenceforfurtherresearchofLysimachiafoenum -graecumHance.
Keywords:Lysimachiafoenum -graecumHance; Totalflavonoids; Orthogonaltest; Extractiontechniques
灵香草 Lysimachiafoenum-graecumHance为报春花科排草
属植物 [ 1] , 主产于广西 、广东 、云南等地 ,有 “香中之王”的称号 ,
是一种重要的天然香料来源。同时 , 灵香草全草入药 , 味甘 , 性
平 , 归肺 、胃经 , 具有解表 、止痛 、行气 、驱蛔的功效 [ 2] , 极具药用
研究价值。本课题组在对灵香草化学成分的研究中 ,发现其中富
含黄酮类成分。黄酮类化合物在自然界分布广泛 , 具有抗肿瘤 、
抗氧化 、抗菌消炎 、抗衰老等功效。然而迄今针对灵香草中总黄
酮提取工艺的研究尚未见报道。 本文通过正交实验优选灵香草
中总黄酮的最佳提取工艺条件 ,为开发和利用灵香草中的黄酮类
成分提供理论参考。
1 材料与仪器
1.1 材料 灵香草 2007-07采于广西金秀县 , 自然风干后 ,在真
空干燥箱中以 60℃干燥至恒重 , 粉碎备用;芦丁标准品(中国药
品生物制品检定所);所用试剂均为分析纯 。
1.2 仪器 TU-1901双光束紫外可见分光光度计(北京普析通
用仪器有限公司);BS124S型电子天平 [赛多利斯(北京)科学有
限公司)] ;R-1001型旋转蒸发仪(郑州长城科工贸有限公司);
DZF-1B型真空干燥箱(上海跃进医疗器械厂)。
2 方法与结果 [ 3]
2.1 总黄酮含量的测定
2.1.1 芦丁标准溶液的配制 精密称取已干燥至恒重的芦丁标
准品 5 mg, 用 80%甲醇定容至 50mk容量瓶中 , 摇匀即配得 0.10
mg/ml芦丁标准液。
2.1.2 测定波长的选择 精密量取 2.0 ml芦丁工作液于 10 ml
容量瓶中 ,加 80%甲醇溶液至 5 ml, 加入 5%亚硝酸钠溶液 0.3
ml, 摇匀 ,放置 6 min后 ,加 10%硝酸铝溶液 0.3 ml,摇匀 ,放置 6
min,加 10%氢氧化钠溶液 1.5 ml, 再加 80%甲醇定容 , 放置 15
min。以试剂空白做参比 ,在 260 ～ 600 nm波长范围内进行紫外
光谱扫描 ,确定 505nm为最大吸收波长。
2.1.3 标准曲线的制作和回归方程的建立 分别精密量取对照
品溶液 0.0, 0.5, 1.0, 2.0, 3.0, 4.0, 5.0 ml置于 10 ml容量瓶中 ,
各加 80%甲醇溶液至 5 ml,再加 0.3ml5%亚硝酸钠溶液 ,摇匀 ,
放置 6 min后 , 加 10%硝酸铝溶液 0.3 ml, 摇匀 , 放置 6 min, 加
10%氢氧化钠溶液 1.5 ml,用 80%甲醇溶液定容至 10 ml, 摇匀 ,
放置 15min后 ,以空白液作参照 ,在 505 nm波长处测定吸光度。
以芦丁浓度(X)和吸光度(Y)绘制标准工作曲线(见图 1), 并作
最小二法线性回归 ,得线性回归方程:Y=5.803 8X+0.050 7, 相
关系数为 R2 =0.999 4。
2.1.4 样品液的制备和黄酮含量的测定 精密称取 20 g已干燥
至恒重的灵香草样品 ,按单因素实验和正交实验中不同的提取条
件进行回流提取。提取液过滤后减压浓缩 , 用 80%甲醇定容至
250 ml, 精密吸取样品溶液 0.3 ml置 10 ml容量瓶中 , 用 80%甲
醇定容至刻度 ,摇匀 , 冷藏备用。
精密量取样品液 0.1 ml,按 “ 2.1.3”项操作的方法测定吸光
度。由回归方程计算样品总黄酮的含量。
2.2 单因素实验
2.2.1 乙醇浓度对总黄酮提取的影响 称取灵香草药材 6份 , 每
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时珍国医国药 2010年第 21卷第 7期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2010VOL.21NO.7
份 20g, 分别以 10%, 30%, 50%, 70%, 80%, 95%的乙醇回流提
取 , 用 10倍量的液料比第 1次提取 2 h, 第 2次提取 1 h, 合并两
次提取液 , 浓缩得浸膏 , 按照 “ 2.1.4”项配制样品溶液并测定其
吸光度。由回归方程计算出供试样品中总黄酮的含量。
不同浓度乙醇对提取的影响如图 2所示。实验结果表明 ,
70%乙醇的提取效果较好 ,往后随着乙醇浓度的加大 ,黄酮含量
反而下降 , 有可能是随着乙醇浓度的增加 , 某些脂溶性杂质的溶
出的量增加 , 干扰因素增多。
图 1 芦丁标准曲线
图 2 乙醇浓度对总黄酮提取的影响
2.2.2 液料比对总黄酮提取的影响 称取灵香草药材 5份 ,每份
20 g, 分别用液料比为 8∶1, 12∶1, 16∶1, 20∶1, 25∶1的 80%
乙醇回流提取 2 h,过滤 ,浓缩得浸膏 , 按照 “ 2.1.4”项配制样品
溶液并测定吸光度 , 计算出样品中总黄酮的含量。
液料比对提取的影响如图 3所示。从图中可知 , 随着液料比
增加 , 黄酮含量也在不断增大。但当溶剂量大于 10倍时 , 提取率
增加缓慢 , 即灵香草中黄酮类化合物溶出量已趋向最大值。从环
境保护和节约溶剂的角度出发 ,我们选择液料比 10∶1左右作为
考察对象。
图 3 液料比对灵香草总黄酮提取的影响
2.2.3 提取时间对总黄酮提取的影响 称取灵香草药材 5份 ,每
份 20g, 用 100 ml80%乙醇回流提取 , 提取时间分别为 0.5, 1.0,
1.5, 2.0, 2.5 h, 过滤 , 浓缩得浸膏 , 按照 “ 2.1.4”项测定吸光度 ,
计算样品中总黄酮的含量。
提取时间对总黄酮提取的影响如图 4所示。结果表明 ,提取
1.5h后总黄酮总量增长速度有所减缓。考虑到生产工艺对时间
的要求 ,我们选择 1.5 h左右的时间作为考察对象。
2.2.4 提取次数对总黄酮提取的影响 称取灵香草药材 5份 , 每
份 20g, 用 50 ml80%乙醇回流提取 2 h, 提取次数分别为 1, 2, 3,
4, 5次 ,过滤 , 浓缩得浸膏 ,按照 “2.1.4”项测定吸光度 , 计算样品
中总黄酮的含量。 提取次数对总黄酮含量的影响如图 5所示。
结果表明随着提取次数增加 ,总黄酮的含量也增加。但提取 3次
后 , 含量变化曲线已较为平缓。考虑到生产工艺对时间的要求和
溶剂量的损耗 ,提取次数以 3次为宜。
图 4 提取时间对灵香草总黄酮提取的影响
图 5 提取次数对灵香草总黄酮提取的影响
2.3 正交实验 采用 L9(34)正交实验设计 , 结合单因素实验结
果 , 进一步考察乙醇浓度(A)、液料比(B)、提取时间(C)、提取次
数(D)对黄酮含量的影响 , 以确定最佳提取工艺条件。正交实验
因素设计见表 1, 实验结果见表 2, 方差分析见表 3。
从表 2可知 , 在实验范围内影响灵香草总黄酮提取的主次因
素为 D>A>C>B,即提取次数 >乙醇浓度 >提取时间 >液料
比。从表 3方差分析可知提取次数和乙醇浓度为显著因素 ,其它
两个为不显著因素。通过综合以上因素 ,确定最佳提取工艺条件
为 A1B2C2D3 , 即 60%乙醇 、液料比 10∶1、2h/次 、提取 3次。
表 1 因素水平表
序号 A溶剂浓度(%)
B
液料比 /ml∶g
C
提取时间 t/h
D
提取次数
1 60 8∶1 1.5 1
2 70 10∶1 2.0 2
3 80 12∶1 2.5 3
2.4 最佳提取工艺条件的验证 按上述最佳提取工艺条件进行
3次验证试验。结果见表 4。 由验证结果可知 ,按最佳工艺条件
得到的总黄酮含量为 0.98%, 均高于其他各正交实验值 , RSD =
0.64%(n=3),说明此工艺条件稳定 、可行。
2.5 精密度实验 精密量取同一测试样品 ,按照 “ 2.1.4”项测定
吸光度 ,重复测定 6次。 结果见表 5。 RSD为 0.76%, 表明本方
法精密度良好。
2.6 稳定性实验 取同一样品 , 按照 “ 2.1.4”项测定吸光度 , 每
隔 5min测 1次吸光度 , RSD为 1.10%, 表明样品溶液在 1 h内测
定基本稳定。见表 6。
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LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2010VOL.21NO.7 时珍国医国药 2010年第 21卷第 7期
表 2 正交设计及数据处理
试验号 A B C D 黄酮含量(%)
1 1 1 1 1 0.61
2 1 2 2 2 0.97
3 1 3 3 3 0.95
4 2 1 2 3 0.90
5 2 2 3 1 0.62
6 2 3 1 2 0.75
7 3 1 3 2 0.64
8 3 2 1 3 0.67
9 3 3 2 1 0.59
K1 0.84 0.72 0.68 0.56K
2 0.75 0.75 0.74 0.78K
3 0.59 0.72 0.73 0.84R 0.25 0.04 0.06 0.27
表 3 方差分析结果
方差来源 自由度 离差平方和 方差 F
A 2 0.032 213 0.016 107 47.79
B(误差) 2 0.000 674 0.000 337 1.00
C 2 0.002 402 0.001 201 3.56
D 2 0.041 481 0.020 740 1 61.54
F0.05(2, 2)=19.00
表 4 验证试验结果
编号 总黄酮含量(%) 平均含量(%) RSD(%)
1 0.98
2 0.98 0.98 0.64
3 0.97
表 5 精密度实验结果
次数 吸光度(A) RSD(%)
1 0.156
2 0.155
3 0.157 0.76
4 0.158
5 0.156
6 0.155
表 6 稳定性实验结果
间隔时间 t/min 吸光度(A) RSD(%)
0 0.158
5 0.162
10 0.156
15 0.157
20 0.157
25 0.158 1.10
30 0.157
35 0.157
40 0.156
45 0.156
50 0.157
55 0.158
60 0.156
3 讨论
正交实验结果表明 ,在乙醇热浸提取灵香草中总黄酮时 , 各
因素对提取量的影响大小次序为:提取次数 >乙醇浓度 >提取时
间 >固液比 , 其中提取次数的影响最大 , 固液比的影响最小。 在
选定的水平范围内 ,随着回流温度和固液比的增大 , 提取量亦提
高 , 但由于本试验中使用的固液比值较大 , 提取充分 ,故对灵香草
总黄酮提取量的影响较小。从极差分析中可见 ,乙醇提取灵香草
总黄酮的最佳工艺条件是 A
1
B
2
C
2
D
3
, 即 60%乙醇 , 液料比 10∶
1, 2 h/次 ,提取 3次。按此方案提取 , 所得总黄酮含量最高。 该
工艺简单易行 ,稳定性好 , 是灵香草中提取总黄酮的有效方法。
参考文献:
[ 1 ] 龚复俊 ,王有为.广西灵香草挥发油化学成分 [ J].植物资源与环
境学报 , 2004, 13(3):59.
[ 2 ] 江苏新医学院.中药大辞典 , 下册 [ M].上海:上海科学技术出版
社 , 1986:2470.
[ 3 ] 杨瑞云 ,何瑞杰 ,李 远 , 等.正交试验法优选广豆根中总黄酮提
取工艺 [ J] .中药材 , 2009, 32(3):441.
收稿日期:2009-06-26; 修订日期:2009-10-20
基金项目:广西壮族自治区科技攻关项目(No.0630002-1D)
作者简介:姜平川(1963-),女(汉族),山东乳山人 ,现任广西中医药研究
院副研究员 ,学士学位 ,主要从事植物化学 、新药开发研究工作.
复方千黄凝胶成型工艺研究
姜平川 ,李 嘉 ,陈 锋 ,麦少洁 ,杨炯珍
(广西中医药研究院 ,广西 南宁 530022)
摘要:目的 优选复方千黄凝胶的最佳成型工艺。方法 以凝胶的外观颜色 , 均匀细腻度 , 光泽度 , 粘稠度为指标 ,采用正
交设计法 , 对凝胶剂基质中卡波姆 、羟丙基甲基纤维素钠(HPMP)、甘油 、丙二醇的投料量进行优选。结果 凝胶剂基质最
佳投料量为卡波姆 2.0%,羟丙基甲基纤维素钠 1.5%, 甘油 20%,丙二醇 15%。结论 复方千黄凝胶成型工艺切实可行 ,
为工业化生产提供了依据。
关键词:复方千黄凝胶; 成型工艺; 正交实验
DOI标识:doi:10.3969 /j.issn.1008-0805.2010.07.072
中图分类号:R283 文献标识码:B 文章编号:1008-0805(2010)07-1720-02
复方千黄凝胶由复方千黄洗液改剂型而成 , 由岗松油 、大叶
桉油 、满山香油等中药提取物加上凝胶基质制成。主要用于湿热
下注所致的阴部瘙痒 ,或灼热痛 , 带下量多 ,色黄;霉菌性 、滴虫性
阴道炎见以上症候者。其制备中有关药材的提取工艺已经另文
报道 , 本工艺就复方千黄凝胶基质的成型进行了研究。
1 仪器与试药
1.1 仪器 JM-L65胶体磨(中国鼎邦机械制造有限公司);电
子天平 FA1004(上海精科天平);D40 -2F电动搅拌机(杭州仪
表电机有限公司)。
1.2 试药 羟丙基甲基纤维素钠(HPMP)、卡波姆 、甘油 、丙二
醇 、月桂氮卓酮(国药集团化学试剂有限公司 , 化学纯);无水硫
酸钠(广东汕头市西陇化工厂 , 分析纯)。
2 方法与结果
2.1 凝胶剂的制备工艺 [ 1] 取羟丙基甲基纤维素钠 、卡波姆 , 加
水适量 ,搅匀 ,浸泡 4 ～ 5 h, 使充分溶胀 , 加入月桂氮卓酮搅拌混
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