全 文 ：中国民族民间医药
Chinesejournalofethnomedicineandethnopharmacy
黄连花中黄酮类化合物提取方法的研究
杨洪武 1 王丽君 2 王志刚 3 田 嵩 2
1.辽宁天峰实业股份有限公司,辽宁 沈阳 110027;2.沈阳医药股份有限公司,辽宁 沈阳 110001;
3.辽宁省医药工业研究院,辽宁 沈阳 110015
【关键词】:黄连花 黄酮 提取
【中图分类号】R284.2;R282.71 【文献标识码】B 【文章编号】1007-8517(2008)07-0049-01
报春花科珍珠菜属植物黄连花 Lysimachia
davurica Ledeb. 为多年生草本植物,具有镇静、
降压之功,东北民间常用于治疗高血压、头痛、
失眠等症。本实验采用超声浸提和水浴浸提两种
方法,对提取黄连花中黄酮类化合物进行实验研
究,为实际应用提供科学依据。
1 仪器、试剂及材料
UV1100型紫外分光光度仪 (北京瑞利仪器厂)
TCQ-250型超声波仪 (北京医疗设备二厂),AND-
FR-200电子分析天平 (日本)。芦丁 (中国药品生
物制品检定所),其它试剂均为分析纯其他。黄连
花采自辽宁东部山区,经辽宁中医药大学中药鉴
定教研室鉴定,干燥后粉碎备用。
2 黄酮含量测定及计算
2.1 芦丁标准液配制 精确称量芦丁 (120℃干燥至
恒重)18.6mg,于 100mL烧杯中,以 60%EtOH溶
解,定容于100mL量瓶中,浓度为0.186g·L-1。
2.2 标准曲线的测定 分别取芦丁标准液0.0,0.5,
1.0,2.0,3.0,4.0mL于 6只 10mL量瓶中,加入
60%EtOH使成 5.0mL。加 5%NaNO20.3mL,摇匀,
放置6min;再加10%A1(NO3)30.3mL,摇匀,放置
6min;加 4.0mL 1.0mol·L-1NaOH,稀释至 10.0
mL,摇匀,放置10～15min,在 λ=510nm处测定吸
光度A,测得结果如下:当浓度为0.0093,0.0186,
0.0372,0.0558,0.0744g·L-1时,吸光度 A分别为
0.1222,0.2394,0.4802,0.6907,0.9619。以吸光
度A为纵坐标,浓度c为横坐标,绘制标准吸收曲
线。用最小二乘法经线性回归,得芦丁浓度 (c)与
吸光度 (A)的关系曲线的回归方程式:A=
0.078411c+0.001446,r=0.9993。
3 实验步骤
通过预实验,选定水浴、超声方法各条件。
按正交表 L9(34)安排三因素三水平正交实验:水
浴法选定乙醇浓度 (A,50%,70%,90%,依次为
水平 1,2,3,下同)、温度 (B,50,70,90℃)、
浸渍时间 (C,1,2,3 h)进行试验;超声法选
定乙醇浓度 (D,50%,70%,90%)、液固比 (E,
20∶1,30∶1,40∶1)和超声时问 (F,20,40,60
rain)进行试验。取浸提液 0.5mL定容到 50mL量
瓶中,按 “2”项测定吸光度并计算黄酮含量。
4 结果与讨论
4.1 最佳条件的选择 根据正交实验与数据处理
可知,水浴法与超声法测定的总黄酮浓度总和分
别 为 : 2554.7和 2925.4μg·mL-1。 方 差 为 A:
3222.4,B:8965.3,C:2963.0,D:1510.7,E:
40796.1,F:10279.7。显著性检测发现,F值为,
A:1.05,B:3.02,C:1;D:1,E:27.04,F:
6.80。①水浴法:水浴温度是显著性因素,从数据
的直观分析和方差分析以及显著性检验可知,三
种因素对提取结果影响大小依次为 B>A>C,其最
佳组合为 A1B3C3,即最佳提取条件为 50%乙醇于
90℃水浴提取3h,所得黄酮类物质的浸出率最高。
②超声法:液固比的影响最显著,时间也是一个
显著性因素。从数据的直观分析和方差分析以及
显著性检验表明,三种因素对浸提结果影响大小
依次为E>F>D,其最佳组合为D2E1F2,即超声方法
用 20倍原料重的 70%乙醇超声 40min,黄酮类物
质浸出率最高。
4.2 水浴与超声方法中,影响黄酮类物质提取的主
要条件基本相同,但超声条件下提取效果优于水浴。
4.3 超声次数扩展实验 以样品作两次超声提取,
第一次超声处理即有95%得率 (以超声40min两次,
并多次浸滤所得含量,多次平行结果作为总含量),
可见第二次超声作用较小,可以超声40min代替。
4.4 不同部位黄酮含量测定以超声最佳条件对黄
连花不同部位进行了比较,其中根中黄酮含量为
0.25%,茎中为 0.32%,叶子含量为 0.55%。可见
叶中黄酮类物质含量最高。
4.5 以超声最佳条件对同地区不同采收时间产的
黄连花的黄酮含量测定,结果 5～6月份样品:根
为 0.18%,茎为 0.25%,叶为 0.38%;7～8月份样
品根为0.28%,茎为0.33%,叶为0.40%,可见7～
8月份为最佳采收季节。
(收稿日期:2008.4.20)
药 物 研 究
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