全 文 ：第 10卷第 4期
2000年 12月
哲里木畜牧学院学报
Journal of Zhelimu Animal Husbandry College
Vol.10 No.4
Dec.2000
地梢瓜甙对神经细胞脂质过氧化反应和 DNA损伤的
保护作用实验研究
商战平1　王德兴2　商　朝1　吕　群1　唐云凤3
(1　内蒙古蒙医学院　通辽　028041　2　白求恩医科大学　长春　130021)
(3　通辽市医院检验科　通辽　028000)
摘　要　通过采用离体乳鼠大脑皮层神经元的培养 , 观察了谷氨酸 、H2O2 对皮层神经元的损伤及
地梢瓜甙的抗损伤作用。结果表明:地梢瓜甙组神经元 DNA 断裂率明显降低 ,且可降低损伤后皮
层神经元的 MDA水平。说明地梢瓜甙能够抑制脂质过氧化反应 ,对神经元具有保护作用。
关键词　地梢瓜甙;神经元;脂质过氧化;DNA;鼠
中图分类号　Q421　文献标识码　A　文章编号　1008-5149(2000)04-0008-03
地梢瓜又名萝摩 ,其全草及果实均可入药 ,具有较强的免疫强化〔1〕和抗肿瘤〔2〕的活性 。
地梢瓜属于萝摩科植物 ,有文献报道萝摩科植物白首乌等具有较强的抗自由基作用〔3〕 。地梢
瓜常被用于治疗肝炎 、尖锐湿疣 、肿瘤等 ,但对中枢神经系统的影响尚未见报道 。因此 ,本实验
研究了地梢瓜甙对大脑皮层神经元抗脂质过氧化反应和 DNA 损伤的保护作用 。
1　材料方法
1.1　材料及试剂
出生 24小时的乳鼠(由白求恩医科大学动物部提供)。地梢瓜甙(由白医大化学教研室
制)。细胞培养液(DMEM)及 HEPES为 Gibco 产品 ,Glu为华美公司产品 ,其余均为国产分析
纯。
1.2　方法
神经细胞的培养参照 Choil〔4〕等人的方法。将培养 6 天的神经元 ,分别加药 ,然后进行
MDA 、DNA(%)的测定。
皮层神经元 DNA裂解率的测定:采取分光光度法〔5〕 。
DNA断裂率(%)= 上清吸收值上清吸收值+沉淀吸收植×100%
MDA含量的测定:采用 TBA 法 ,用 Low rry 法测定蛋白含量。
按照金呜等人的方法〔6〕测定·OH 活力 。根据此方法 ,加入不同浓度的地梢瓜甙后 ,再加
入H2O2 ,37℃水浴震荡 60min ,测 A536时的清除率。
清除率=A536(未损伤)-A536(损伤)-〔A536(药未损)-A536(药损)〕
A536(未损伤)-A536(损伤)
收稿日期:2000—09—06
　　　商战平 ,女 , 1961年生 ,硕士研究生 ,讲师 ,主要从事病理生理学教学及研究。
2　结果
2.1　地梢瓜甙对 H2O2损伤神经元产生 MDA及 DNA 损伤的保护作用
表 1可见 ,与对照组比较 ,H2O2 损伤组 MDA含量和 DNA 断裂率明显增高 ,而加入地梢
瓜甙 100mg/l组与 H2O2 损伤组比较 MDA含量和 DNA断裂率明显减少 ,说明地梢瓜有保护
作用 。
表 1　地梢瓜甙对 H2O2 损伤神经元产生 MDA及 DNA损伤的影响
Table 1　The effect of Cyn on MDA and breaking rate of DNA induced by H2O2(X±S)
I tem n MDA(nmol·mg pro-1) breaking rate of DNA(%)
control 6 69.66±15.73 32.89±8.555
H2O2 6 133.66±33.81### 50.65±3.611
Cyn100 6 71.00±10.35 34.20±7.978
Cyn100+H2O 2 6 79.12±14.08＊＊ 42.47±5.703＊
##P <0.01　###P<0.001　VS　centrol　　　　＊P<0.05　＊＊P<0.01 VS　H2O2
2.2　地梢瓜甙对谷氨酸诱导丙二醛产生 DNA损伤的保护作用
表 2可以看出 ,与对照组比较 ,谷氨酸损伤组 MDA 含量和 DNA 断裂率明显升高 ,而
100mg/ l地梢瓜甙组与损伤组比较 , MDA含量和 DNA断裂率明显下降 ,说明地梢瓜甙有抗谷
氨酸损伤作用。
表 2　地梢瓜甙对谷氨酸诱导 MDA产生及 DNA 损伤的影响
Table 2　The effect of Ase on MDA and breaking rate of DNA induced by Glu(X±S)
I tem n MDA(nmol·mg pro-1) breaking rate of DNA(%)
control 6 69.66±15.73 32.89±8.555
Glu 6 148.80±31.97### 52.93±4.392##
Cyn100 6 71.01±10.35 34.20±7.978
Cyn100+glu 6 96.18±21.16＊＊ 44.88±4.352＊
##P <0.01　###P<0.001　VS　control　　　　＊P <0.05　＊＊P<0.01 VS　glu
2.3　地梢瓜甙对 Fenton反应生成的·OH 的清除作用
地梢瓜甙对 Fenton反应生成的·OH 的清除
The effect of Asc of getting rid of ·OH
9第 4 期　　　商战平等:地梢瓜甙对神经细胞脂质过氧化反应和 DNA损伤的保护作用实验研究　　　　
　　实验结果表明:随着地梢瓜甙浓度的增加 , ·OH生成的吸光度逐渐下降 ,提示地梢瓜甙对
Fonton反应生成的·OH 有明显的清除作用 。当地梢瓜甙的浓度分别为 1mg·ml-1 , 2mg·
ml
-1 , 4mg·ml-1 ,8mg·ml-1时 ,其清除率分别为 27.52%,38.46%,49.16%,52.49%(见图)。
3　讨论
机体在代谢过程中可产生·OH 、H2O2 等活性氧自由基 ,在正常生理状态下 ,这些活性氧自
由基的产生和消除处于生理低水平的平衡状态 ,对人体是必需的 、有利的〔7〕 。而在某些病理
情况下 ,这些活性氧代谢失衡 ,氧自由基增多 ,脂质过氧化作用增强 ,进而诱发一系列损伤 。而
谷氨酸是中枢神经系统的一种重要的兴奋性神经介质 。在维持神经元正常的信号传递过程中
起重要作用 。在病理状态下 ,谷氨酸大量释放可导致神经元损伤 ,甚至死亡 ,使 MDA 水平升
高 ,地梢瓜甙可降低 H2O2 、谷氨酸损伤后神经元的 MDA 含量 ,说明地梢瓜甙具有抑制神经元
脂质过氧化反应的作用。而脂质过氧化损伤正是脑缺血神经元损伤的重要环节 。可以推测地
梢瓜甙具有抗脑缺血性神经元损伤 、保护脑功能的作用 。为了进一步证实地梢瓜甙是否具有
直接中和自由基作用 。本研究采用体外实验 ,观察了其对羟自由基清除作用 。根据 Fenton反
应原理 ,利用 H2O2与 Fe2+反应产生大量羟自由基来观察地梢瓜甙对羟自由基有无直接的清
除作用。结果表明:地梢瓜甙具有明显的直接清除羟自由基的作用。由此可见 ,地梢瓜甙具有
清除自由基抑制神经元脂质过氧化反应作用 ,从而保护了神经元 。地梢瓜甙是否是通过直接
消除羟自由基来抑制脂质过氧化反应有待进一步研究 。
4　结论
总之 ,地梢瓜甙可抑制H2O2 、谷氨酸引起的神经元的脂质过氧化反应 ,表明地梢瓜甙具有
较强的抗自由基及抗兴奋性氨基酸毒性作用 。
参 考 文 献
1　Keiji wada , Koji Flayashi , Hiroshi mitsuhash , et al.Studies on the Constituents of Asclepiadaceae P lants Z
〔J〕.Chem Pharm Bull , 1982 , 30(10):3500～ 3504.
2　Kenidu yakushijin , Junko sekikawa , Rika Suzuki , et al.Antitumor Active G ly coaides from Condurango Cor-
tex〔J〕.Chem Pharm Bull , 1980 , 28(6):1954～ 1958
3　宋俊梅 , 丁霄霖.白首乌中 C21甾甙及甾甙元清除羟自由基的功能〔J〕.无锡轻工大学学报 , 1998 , 17
(2):43 ～ 46
4　Koh H Y , choi D W.Quantitative determination of g lutamate mediated cortical neuronal injury in cell cul-
ture by lactate Dehudrogenase efflus assay〔J〕.J Neurosci me thod , 1987 , 7:357～ 362
5　周禾 , 段丹霞 ,尹忆民等.CD4 单克隆抗体在体内诱导小鼠胸腺细胞凋亡〔J〕.中华微生物学和免疫学
杂志 , 1995 , 15(6):376 ～ 380
6　金呜 ,蔡亚新 ,李金容等.邻二氮菲—Fe2+氧化法检测 H2O2/ Fe2+产生的羟自由基〔J〕.生物化学与
生物物理进展 , 1996 , 23(6):553 ～ 555
7　Halliwell B , Gulleridge Jme.Antioxidants of human ex tuacellular fluids〔J〕.Arch Biochem Biophys , 1990 ,
280:1～ 8
(下转第 15页)
10　　　　　　　　　　哲　里　木　畜　牧　学　院　学　报　　　　　　　　　第 10卷
Grey Correlative Degree Analysis of Major Characters and
Yield of Tropical Subtropical and Temperate Maize Hybrids F1
Tian Xun et al
(Zhelimu Animal Husbandry College　Tongliao　028042)
Abstract　The result of g rey co rrelative degree analysis of 15 major characters and yield per plant
of tropical subtropical and temperate maize hybrids F 1 showed:the co rrelative degree between
characters and yield per plant was ear w eight per plant>100 kernel w eight>row s per ear>ker-
nels per row >ear diameter>ear leaf chlorphy ll content>ear leng th>plant height>day s to pollen
shedding>ear height>days to silking>ear leaf MDA content>leaf area per plant>stalk phloem
strength>PSSI.
The characters concering yield w as:ear leaf chloroghyll content ,plant height , days to pollen
shedding ,days to silking , ear height and leaf area per plant.
Key words　Maize;Characters;Grey correlative deg ree
(上接第 10页)
Study on the Protective Effect of Cynanchum against
the Neuronal Damage -free Radical ,Break DNA
Shang Zhanping et al
(Inner Mongolia National College　Tongliao　028041)
Abstract　The cell culture w as made to study the effect of Cynanchum on infuried neuron(H2O2 ,
g lutamate).the result indicatal that Cynanchum was ef fective on anti-overoxidizing and could
get rid of·OH produced by Fe2+ and H2O2 direct ly .So cynanchum protect the neuron.
Key words　Cynanchuwm;Wistar;Neuron;DNA free Radiual
15第 4 期　　田　迅等:热带亚热带玉米与温带玉米杂交 F 1代主要性状与产量的灰色关联度分析