全 文 ：药 物 研 究
The medicine study
作者简介:杨超燕，硕士，实验师，从事新药开发与研究。E － mail:y1c2y@ 163． com。
通讯作者:陈艳芬，博士，副教授，从事中药抗炎活性物质筛选及作用机制研究。E － mail:xwnai@ 163． com。
光叶娃儿藤镇痛抗炎作用的实验研究
杨超燕 陈艳芬 陶曙红 唐春萍 崔红花
广东药学院中药学院，广东 广州 510006
【摘 要】 目的:观察光叶娃儿藤的镇痛和抗炎作用。方法:采用小鼠热板法、醋酸致扭体法和甲醛致痛法，观察其镇痛作用;用二甲苯所致
小鼠耳廓肿胀法及甲醛致小鼠足跖肿胀法观察其抗炎作用，同时通过紫外分光光度法测定小鼠甲醛致炎足渗出物中的前列腺素 E2 (PGE2)的含量。
结果:与生理盐水组比较，光叶娃儿藤高剂量组 (48g·kg －1)不能使小鼠热板致痛反应的痛阈值显著延长，但对醋酸所致扭体次数明显减少，能显
著抑制甲醛所致小鼠足跖肿胀和二甲苯所致小鼠耳廓肿胀，并明显抑制 PGE2的合成。结论:光叶娃儿藤具有镇痛抗炎作用。
【关键词】 光叶娃儿藤;镇痛;抗炎;实验研究
【中图分类号】R965. 2 【文献标识码】A 【文章编号】1007 － 8517 (2012)16 － 0047 － 02
光叶娃儿藤为萝藦科 (Asclepiadaceac)娃儿藤属
(Tylophora)的多年生匍匐性藤状草本植物，主要分布于台
湾和广东［1］，在民间广泛应用于治疗感冒发热，咽喉肿痛
等，且疗效显著。但目前国内外尚未见其药理作用报道。本
研究根据光叶娃儿藤的临床主治，分别采用小鼠热板法、醋
酸致扭体法和甲醛致痛法，观察其镇痛作用;用二甲苯所致
小鼠耳廓肿胀法及甲醛致小鼠足跖肿胀法观察其抗炎作用。
为本品在应用上呼吸道感染疾病的应用提供实验依据。
1 试验材料
1. 1 药材
光叶娃儿藤全草采于广东吴川，经中国科学院华南植
物研究所标本馆叶华谷研究员鉴定为萝藦科娃儿藤属的光
叶娃儿藤 (Tylophora ovata (Lindl．)Hook． ex Steud． var．
brownii (Hay．)Tsiang et P． T． Li ) ，标本存放于中国科学
院华南植物研究所标本馆。
1. 2 药品及试剂
称取光叶娃儿藤鲜品 200 g，切段，置烧杯中加入大约
10 倍体积的水煎煮 3 次，每次 0． 5 h，提取液合并过滤、浓
缩光叶娃儿藤水提取物浓缩液 (相当于 2． 4 g 生药 /mL) ，
给药前配成所需浓度;冰醋酸 (分析纯，天津市富宇精细
化工有限公司，批号:110920) ;甲醇 (分析纯，天津市百
世化工有限公司，批号:20100630) ;甲醛 (广州市化学试
剂厂，批号:20120204 － 1) ;二甲苯 (广州市化学试剂厂，
批号:0509071) ;氢氧化钾 (天津市福晨化学试剂厂，批
号:20120210) ;罗通定片 (四川康福来药业集团有限公
司，批号:100301) ;吲哚美辛片 (广东华南药业有限公
司，批号:110601) ;羧甲基纤维素钠 (天津市百世化工有
限公司，批号:20100908)。
1. 3 动物
SPF级 NIH小鼠，由广东省医学实验动物中心提供，生
产许可证号:SCXK (粤)2008 －0002，正常饲养 3 d后供试。
1. 4 仪器
UV －1800 紫外分光光度计 (北京瑞利分析仪器公司) ;
AY －120 电子分析天平 (岛津仪器公司)。
2 方法
2. 1 镇痛作用
2. 1. 1 对小鼠热板痛阈值的影响［2］
以 55 ± 0. 5℃热板筛选痛阈值在 5 － 30 s 的雌性小鼠，
随机分成 4 组:正常对照组，罗通定阳性组，光叶娃儿藤
高、低剂量组。每组每天 ig相应的药物，灌胃容积 20 mL /
Kg，对照组给予等容量的生理盐水，连续给药 7 天。末次
给药后 1、2h测量各组小鼠的痛阈值 (若 60s 内无痛觉反
应，按 60s计算)。
2. 1. 2 对醋酸所致小鼠扭体实验的影响［3］
取 NIH 小鼠 48 只，雌雄各半，随机分成 4 组:正常对
照组，引哚美辛阳性组，光叶娃儿藤高、低剂量组。每组
每天 ig相应的药物，灌胃容积 20 mL /Kg，对照组给予等容
量的生理盐水，连续给药 7 天。于末次给药后 1 h，各小鼠
分别腹腔注射 0． 7%冰醋酸 0． 2 mL /只，观察并计记录 15
min内的扭体次数。
2. 1. 3 对小鼠甲醛致痛实验的影响［4］
取 NIH 小鼠 48 只，雌雄各半，随机分成 4 组:正常对
照组，引哚美辛阳性组，光叶娃儿藤高、低剂量组。每组
每天 ig相应的药物，灌胃容积 20 mL /Kg，对照组给予等容
量的生理盐水，连续给药 7 天。于末次给药后 1 h，用 2．
5%甲醛生理盐水溶液 50 uL /只皮下注射小鼠右后足键膜下
(从后肢足掌心向踝关节方向进针，皮下给药) ，置大烧杯
中，分别记录注射后 0 ～ 10 min (第Ⅰ时相)和 15 ～ 30 min
(第Ⅱ时相)两个时间段小鼠累计舔足时间。
2. 2 抗炎作用
2. 2. 1 对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响［5］
取 NIH 小鼠 48 只，雄性，随机分成 4 组:正常对照
组，引哚美辛阳性组，光叶娃儿藤高、低剂量组。每组每
天 ig相应的药物，灌胃容积 20 mL /Kg，对照组给予等容量
的生理盐水，各实验组连续给药 7 天，于末次给药后 1 h，
在小鼠右耳背腹两侧均匀涂布二甲苯 50μL致炎，30 min后
脱臼处死，沿耳廓基线剪下两耳，取样用直径为 6 mm的不
锈钢打孔器，分别在左、右耳同一部位打下圆耳片，精密
称重，以左、右耳片重量之差作为肿胀度。
2. 2. 2 甲醛致小鼠足肿及组织中 PGE2 含量测定实验［6］
取 NIH 小鼠 48 只，雄性，随机分成 4 组:正常对照
组，引哚美辛阳性组，光叶娃儿藤高、低剂量组。每组每
天 ig相应的药物，灌胃容积 20 mL /Kg，对照组给予等容量
的生理盐水，连续给药 7 天。末次给药后 1h，各小鼠右后
足跖皮下注射 2. 5%甲醛生理盐水溶液 50μL /只，1 h 后处
死，从踝关节处对称剪下左右后足，精密电子天平称量，
计算肿胀度 (mg)。取已称重的右后足，剪碎，加入生理
盐水 5 mL 浸泡 1 h，离心浸泡液 15 min (3 000 r·min －1) ，
·74·
中国民族民间医药
Chinese journal of ethnomedicine and ethnopharmacy
药 物 研 究
The medicine study
取上清液 0. 5 mL，加入 0. 5 mol /L KOH 甲醇液 2 mL，在
50℃水浴中异构化 20 min，加入甲醇稀释至 5 mL后，用紫
外分光光度计在 278 nm 处测定吸光度值。按下式计算
PGE2 含量 (ug /g)。PGE2 (ug /g) = A278 × 13. 13 × D ×
V /炎足爪重 (V － PGE2 溶液体积、D 稀释倍数，其中，V
=5 mL、D =10) ;肿胀度 (mg) = 右足重 (mg) － 左足
重 (mg)。
3 统计学处理
计量资料以 (x ± SD)表示，采用 SPSS 13． 0 软件，组
间显著性差异用方差分析，以 P ＜ 0． 05 为有统计学意义。
4 结果
4. 1 镇痛作用
4. 1. 1 对小鼠热板痛阈值的影响
和对照组比较，光叶娃儿藤高和低剂量组在药后 1h 和
2h都不能显著延长小鼠热板痛阈值，没有显著性差异。结
果见表 1。
表 1 光叶娃儿藤对小鼠热板痛阈值的影响 (x ± SD，n = 12)
组别
剂量
(g·kg －1)
痛阈值 (s)
药前 药后 1h 药后 2h
生理盐水对照 － 17. 70 ±5. 06 13. 00 ±7. 32 13. 18 ±7. 58
罗通定 0. 2 g 17. 48 ±5. 20 51. 72 ±14. 49★★ 54. 76 ±12. 98★★
娃儿藤 48 18. 08 ±4. 42 13. 67 ±4. 44 13. 35 ±3. 93
娃儿藤 24 17. 48 ±5. 03 9. 26 ±2. 75 9. 44 ±2. 82
与生理盐水组比较:★P ＜0． 05，★★P ＜0． 01。
4. 1. 2 对醋酸所致小鼠扭体实验的影响
和对照组比较，光叶娃儿藤高剂量组小鼠扭体次数明
显少于生理盐水对照组，差异有显著性意义 (P ＜ 0. 05)。
结果见表 2。
表 2 光叶娃儿藤对醋酸所致小鼠扭体
实验的影响 (x ± SD，n = 12)
组别 剂量 (g·kg －1) 扭体次数 (次)
生理盐水对照 － 43. 1 ± 7. 8
吲哚美辛 0. 06g 27. 1 ± 12. 5★★
娃儿藤 48 33. 5 ± 5. 4★
娃儿藤 24 36. 7 ± 9. 3
与生理盐水组比较:★P ＜ 0. 05，★★P ＜ 0. 01。
4. 1. 3 对小鼠甲醛致痛实验的影响
和对照组比较，光叶娃儿藤高剂量组对甲醛引起疼痛
的第二时相有显著镇痛作用 (P ＜ 0． 01) ，低剂量组作用
不明显。结果见表 3。
表 3 光叶娃儿藤对小鼠甲醛致痛
实验的影响 (x ± SD，n = 12)
组别
剂量
(g·kg －1)
舔右后足时间 (s)
0 ～ 10 min 15 ～ 30min
生理盐水对照 － 33. 5 ± 9. 6 165. 4 ± 47. 9
吲哚美辛 0. 06g 35. 2 ± 8. 2 83. 31 ± 23. 7★★
娃儿藤 48 35. 6 ± 3. 4 82. 7 ± 31. 0★★
娃儿藤 24 37. 6 ± 11. 5 138. 4 ± 34. 8
与生理盐水组比较:★P ＜ 0. 05，★★P ＜ 0. 01。
4. 2 抗炎作用
4. 2. 1 对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响
和对照组比较，光叶娃儿藤高和低剂量组对二甲苯所致小
鼠耳廓肿胀均有显著抑制作用 (P ＜0. 01)。结果见表 4。
表 4 光叶娃儿藤对二甲苯所致小鼠
耳廓肿胀的影响 (x ± SD，n = 12)
组别 剂量 (g·kg －1) 肿胀度 (mg)
生理盐水对照 － 2. 45 ± 0. 63
吲哚美辛 0. 06g 0. 52 ± 0. 39★★
娃儿藤 48 1. 28 ± 0. 67★★
与生理盐水组比较:★P ＜ 0. 05，★★P ＜ 0. 01。
4. 2. 2 对甲醛致小鼠足肿胀及足组织中 PGE2 含量的影响
和对照组比较，光叶娃儿藤高和低剂量组对甲醛致小
鼠足肿胀及足组织中 PGE2 含量均有显著抑制作用 (P ＜
0. 05) ;对 PGE2 含量影响呈量效关系，高剂量组和低剂量
组比较有显著性差异 (P ＜ 0. 05)。结果见表 5。
表 5 光叶娃儿藤对甲醛致小鼠足肿胀
及足组织中 PGE2 含量的影响 (x ± SD，n = 12)
组别
剂量
(g·kg －1)
肿胀度
(mg)
PGE2
(ug·g － 1)
生理盐水对照 － 107. 06 ± 14. 70 334. 69 ± 64. 32
吲哚美辛 0. 06g 88. 57 ± 15. 03★ 197. 17 ± 53. 46★★
娃儿藤 48 91. 29 ± 12. 07★ 233. 44 ± 52. 15★★▲
娃儿藤 24 91. 89 ± 10. 41★ 276. 58 ± 42. 27★
与生理盐水组比较:★P ＜ 0. 05，★★P ＜ 0. 01;与娃儿藤低剂
量组比较:▲P ＜ 0. 05。
5 讨论
研究镇痛药物常用的实验方法有热板法、扭体法与甲醛
法。热板法主要用于中枢性镇痛药的筛选，扭体法主要反映
外周性镇痛，小鼠足键膜皮下注射甲醛的甲醛法可引起两个
时相的疼痛［7］，0 ～ 10min 出现者为Ⅰ相 (早期相) ，10 ～
60min 出现的反应为Ⅱ相 (迟发相)。第 1 相主要是直接刺激
C 纤维所致，如受试药物对此相有抑制作用则表明其作用为
中枢性镇痛;第 2相反应主要是炎症介质释放参与的疼痛反
应，如药物对此相有抑制作用则表明其作用为外周镇痛。实
验结果表明，光叶娃儿藤不能延长小鼠热板痛阈值，但能减
少小鼠扭体次数，对甲醛引起疼痛的第二时相有显著镇痛作
用，说明光叶娃儿藤能抑制继发的炎性反应所导致的炎性疼
痛。用二甲苯所致小鼠耳廓肿胀法及甲醛致小鼠足跖肿胀法
观察其抗炎作用，结果显示，光叶娃儿藤高和低剂量组对二
甲苯所致小鼠耳廓肿胀和甲醛致小鼠足肿胀及足组织中
PGE2 含量均有显著抑制作用，说明其对急性非特异性炎症
有明显的抑制作用。综上所述，光叶娃儿藤水提取物可能是
通过抑制炎症介质释放达到镇痛抗炎作用。
参考文献
［1］ 国家中医药管理局《中华本草》编委会． 中华本草 (6) ［M］． 上海:
上海科学技术出版社，1999:5733．
［2］ 陈奇． 中药药理研究方法学 ［M］． 第 2 版． 北京:人民卫生出版社，
2006:353 － 354．
［3］ 李仪奎． 中药药理实验方法 ［M］． 上海:上海科学技术出版社，2006:
769．
［4］ 徐元翠． 贯叶连翘提取物抗炎镇痛作用研究 ［J］． 中国药师，2010，13
(10) :1435 － 1436．
［5］ 李仪奎． 中药药理实验方法学 ［M］． 北京:人民卫生出版社，2006:
753 － 765．
［6］ 沙爱龙，陈红玲，孟庆艳． 维药芳香新塔花水提取物的抗炎镇痛作用及
其急性毒性 ［J］． 中国实验方剂学，2012，18 (4) :202 － 204．
［7］ 姚东，孟宪生，潘英，等． 气滞胃痛颗粒镇痛作用研究及机制初探
［J］． 中成药，2012，34 (3) :556 － 558．
(收稿日期:2012. 06. 24)
·84·
中国民族民间医药
Chinese journal of ethnomedicine and ethnopharmacy