全 文 ：植 物 学 报 i , 3 , , 3 1 ( 1 ) : , 0一 , 3
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微孔草油中脂肪酸的分离和鉴定
李京民 王静萍 于凤兰 `
(中国科学院植物研究嗽, 北京 )
摘 要
微孔草 [ M i c r o u l a 万攻天i。 。 。 s 蔺, ( c l a r k e ) H e m s l · ] 种子含油 朽% , 其油中含有 : 一亚麻酸
,
(顺井一 6 , ” , 12 一十八碳三烯酸 ) 8 . 1% 。 通过硝酸银硅胶柱层析和高压液相色谱分离 , 采用高
、碘酸钠 、 高锰酸钾氧化裂解的方法和红外光谱 ,紫外光谱 ,气相色谱分析 , 质谱分析 , 对油中的
卜亚麻酸 , 顺式一 6 , 9 , 12 , 1 5一十八碳四烯酸 , 顺式一 1 1 一廿碳烯酸 , 顺式一 1 3 一廿二碳烯酸 , 顺
式 一 1 5 一廿四碳烯酸进行了分离 、 鉴定 。
关键词 : 微孔草 ;种子油 ; 丫 一亚麻酸 ;脂肪酸
微孔草 [M i` r 。 u l 。 ; i及友im e , 5 15 ( e l a r k e ) H e m s l . I 属紫草科一年生草本值物 , 主要
分·布于我国西藏 、甘肃 、 青海等地 。 它适应性强 ,易于种植 。青海海北自治州某些地区有食
用含有微孔草种子油的混合菜籽油的历史 。
微孔草种子油中的脂肪酸成分国内外至今尚未见报道 。 为了开发利用我国高寒地区
的植物资源 ,为营养保健药物事业的发展 , 寻找更多的含 1 一亚麻酸的新油源 。 因此 , 对微
孔草种子油中脂肪酸的成分做了较全面的分析 。 微孔草种子油经药理试验。 , 已证实它具
有较强的降血脂作用 ,经动物急性毒性试验 , 证明无毒 。 为其开发利用提供了科学依据。
实 验 与 结 果
(一 ) 种子油的提取及含油量测定
用索氏抽提器 ,石油醚 ( 30 一 60 ℃ ) 为溶剂。
(二 ) 油的碘值 、皂化值和不皂化物含量测定
均采用标准方法仁1] 。
(三 ) 脂肪酸甲醋的制备
油脂皂化后 , 用乙醚提取不皂化物 。 混合脂肪酸与三氟化硼甲醇溶液回流加热制备
成甲醋 1L 。
( 四 ) 气相色谱分析
色谱仪 S P一 2 3 0 5 全型 (北京分析仪器厂 ) 。
本文于 1夕8 7 年 9 月收到 , 19 88 年 1 月收到修改稿 。
本所祝凤池同志协助进行红外光谱和高压液相色谱分析 ,冯丽洁同志测定紫外光飞翻在此一并致谢。
幼 江宁中医学院药理教研室 。
1期 李京民等 :微孔草油中脂肪酸的分离和鉴定
色谱柱 不诱钢柱长 Zm , 内径 4 m m ; 柱温 2 0 ℃ 。
固定液 巧多二乙二醇琉拍酸聚醋 ( L A C 一 7 2 8 )八 5务二乙二醇季戊四醇己二酸交联
聚酉旨 ( L A C 一 ZR 一 4 4 6 ) 。
担体 C hr o m o s or b . w . A w . D M C S . 80 一 1 0 目 ,将上述两种固定液分别涂渍后 , 以
4 : 6 ( w /W ) 比例混合均匀后装柱 。
鉴定器 氢火焰离子化检测器 ,温度 24 0℃ 。 汽化室温度 30 0℃ 。
载气 (氮气 )流速 40 m l/ 分 。
计算机 C D M C 一 I A 色谱数据处理机 (上海计算技术研究所 ) 。
(五 ) + 八碳三烯酸和+ 八碳四烯酿的分离 、鉴定
1
. 硝酸银硅胶柱层析 脂肪酸甲醋在 巧 倍量的 20 务 硝酸银硅胶柱中层析 , 先用石
油醚 ( 30 一 60 ℃ ) , 冲下饱和酸 ;再分别用 1多 , 2多乙醚的石油醚冲下单烯酸和二烯酸 ; 用
5务乙醚的石油醚冲下两个三烯酸 ;最后用 10 多乙醚的石油醚冲柱 , 得到一个四烯酸 。
2
. 十八碳三烯酸的鉴定 将上述柱层析分离出的三烯酸进行气相色谱分析 , 其中一
个成分为亚麻酸 , 另一个成分根据保留值初步定为 7 一亚麻酸 。
采用高碘酸钠和高锰酸钾氧化裂解的方法 〔41 进行确证 。 方法有所改进 。 步骤如下 :
高碘酸钠 1 . 1 9 , 溶于 15 m l 水中 , 加人高锰酸钾 24 .7 m g , 无水碳酸钠 0 . 12 9 , 叔 丁 醇
25 m l
, 样品 20 m g , 回流加热 2 小时 , 冷却 。 加氢氧化钠 0 . 1 9 , 2关的亚砷酸钠溶液至呈
棕色 。 减压蒸馏至约 5 m l 。 加水 25 m l 和亚硫酸氢钠至溶液呈浅黄色 。 加乙醚 20 m l ,用
6 : n o l/ 1 盐酸酸化 , 分出醚液 , 得氧化产物 。 按上法制成脂肪酸 甲醋进行气相色谱分析 。
氧化裂解产物有丙酸 、 己酸 、 丙二酸 、 己二酸和壬二酸 。 因此证实了除亚麻酸 (顺
式 一 9 , 1艺 , 15 一十八碳 三烯酸 )外 , 另一个三烯酸为 卜亚麻酸 (顺式 一 6 , 9 , 1 2一十八碳三烯
酸 ) 。
3
. 十八碳四烯酸 的鉴定
红外光谱 : , K B r c m 一 ` 8 5 0 , 1 1 6 0 , 1 2 6 0 , 1 3 5 0 , 14 2 0 , 1 6 2 0 , 1 72 0 , 2 8 4 0 , 2 9 1 0 , 29 9 0 。
无 9 7 0 c m 一 ` 反式吸收峰 。
紫外光谱分析 : 此脂肪酸无文献 31[ 报道的 2 3 3 , 2 6 8 , 3 1 5 n m 共扼四烯酸的特征吸收
峰 。
质谱分析 : M S m / e 2 9 0 ( M + ) , 2 6 1 , 2 2 1 , 1 9 4 , 16 1 , 14 7 , 1 3 5 , 1 1 9 , 1 0 8 , 9 3 , 9 1 ,
8 1 , 夕9 (基峰 ) , 6 7 , 5 5 。 ,
氧化裂解 : 方法 同上 。 十八碳四烯酸的氧化裂解产物有丙酸 , 己二酸 。 说明第一个
双键的位置在 6 位 ,最后一个双键是在 巧 位 。 综合以上分析确定它为顺式 一 6 , 9 , 1 2 , l , -
十八碳四烯酸 。
(六 ) C Z。 , C Z, 和 q 4 烯酸的分离 、鉴定
l
·
C Z。 , C 2 2 和 C 2 . 烯酸的分离
a
. 硅胶柱层析 : 取混合脂肪酸甲醋 4 9 , 在 12 0 9 硅胶柱中层析 。 先用石油醚 ( 3 0一
60 ℃ )冲下饱和酸 ,再依次用 1外 , 1 . 5务和 2多苯的石油醚冲柱 ,得到混合单烯酸的甲醋 。
b
. 高压液相色谱制备分离 : 把混合单烯酸甲醋进行反相液相色谱 。 制备色谱柱为
w a t e r s 产 B o n d a p a k C : 。 8一 1 0 户 , 柱长 3 0 c m , 内径 7 . 8 m m 。 流动相为甲醇 /水 ( 9 0 : 1 0
植 物 学 报 3 1 卷
V /V )
, 流速 3 m l/ 分 。 示差折光检测器 。 每次收集约 10 m l , 气相色谱检查 , 合并相似
馏份 , 先后得到以 C oz, C 22 和 C Z; 烯酸为主的各个馏份 。
2
.
C
Z。 ,
C
Z , 和 C , ; 烯酸的鉴定
红外光谱 : 无 9 70 。 m 一 , 反式吸收峰 。
氧化裂解的方法同上 。 各单烯酸氧化裂解产物的测定用气相色谱分析与标准脂肪酸
保留值对照 。 廿二碳烯酸产生壬酸和十三碳二酸 ;廿四碳烯酸产生壬酸和十五碳二酸 。 廿
碳烯酸产生壬酸和一个二元酸。 根据 同条件下 同系物的比保留体积 ( V g ) 的对数和分子
中的碳数成线性关系 `刀 , 对几个二元酸进行了测定 (图 1 ) 。 廿碳烯酸产生的二元酸按其相
对保留值 2 . 9 3 与十一碳二酸的保留值吻合 。
碳数 E q u i v a le n t ` a r b o n c h a 压。
图 l 脂肪酸同系物保留值和碳数的关系
F i g
.
1 T h e r e l a t io n s h i p b e t w e e n r e t e n t io n t i m e o f f a t t 了 a e id 五o m , lo g y
a n d i t s e q u i v a l e n t c a r ob n e h a i n
根据以上分析 ,此三种单烯酸分别确定为是顺式 一 1 1一廿碳烯酸 ,顺式一 1 3 一廿二碳烯酸
和顺式 一 15 一廿四碳烯酸 。
表 1 徽孔草种子油的分析擞据
T a b l e 1 A n a l y t i e a l d a t a o f s e o d 0 11 o f 对 i c o t, l a : i友及i解 。 n s i s ( C l a r k e ) H e m s ! ·
脂肪酸组成 (% )含葱
油的理化常数
P h y s ico e h e m i e a )
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e o m p o s i t io n o f f a t t y a e i d (% )
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叫uod.的化三
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油率ǎ%à
2 0 0
。
4
18: 1 1 8: 2 18 : 3
1〕 18 : 3 18 : 4
( 6
, 9 , 12 ) ( 6
, 9
, 12 , 15 )
另含肉豆袭酸 , 十六碳烯酸 ,十七碳酸 ,花生酸和山箭酸微量 (微量 < 。 . 1% o)
l ) 了
一亚麻酸 。 I n a d d i t i o 。 , M y : i s t i e , h e x a d e e 。。 i e , m a r g a r i` , a r a e h i d i e , a n d b e h e n i e a c id s : t r a e e ( 1 0 . ,
t h a o 0
.
1% )
·
l ) 了一 11如 l o n ie a d d ·
1期 李京民等 :微孔草油中脂肪酸的分离和鉴定 5 3
闷 . . ., ~ 一一一-一~一 .一一一一-一一一微孔草种子含油量高达 45 多 , 且大部分是不饱和脂肪酸 , 因此微孔草种子油有可能做为有医疗价值的含 1 一亚麻酸的新油源 。 油的理化常数及各脂肪酸组成见表 1。参 考 文 献[ 1 〕 中国油脂植物编写委员会 , 1 9 8 7 : 中国油脂植物 。 科学出版社 ,北京 , , 7。一 , 75 页 。〔 2 〕 中国科学院大连化学物理研究所 , 19 7 2 : 气相色谱法 。 科学出版社 , 北京 , 14 ?一 1 , 0 页。〔 3 〕 林启寿编著 , 1 9 7:7 中草药成份化学 。 科学 出版社 , 北京 , 53 页 。1 4 ] p r i v o t t , 0 . 5 · a n d E . C . N i c k e l l , 1 96 3 : p r e p a r a t i o n o f h i沙 l y P u r i f i o d f a t t v a e id ` v i a l i q u i d p a r t i t三o n e h r o-m a t o g r a P h y . J才O C占, 4 0 ( 5) : 1 8 9一 193 .I S O L A T I O N A N D ID E N T I F I C A T I O N O F F A T T Y A C ID C O M P O ·
N E N T F R OM S E E D O I L O F 几叮C R O U L A S I K滋:I M E川5 1 5
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w e r e id e n t if i e d b y P e r io d a t a
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,
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T h e y a r e c i s
-
11祀 i c os e n o i c , e i s一 13一d o e o s e n o i e , e is 一 15一e t r a c os e n o ic , e is一 , 9 , 12一oc t a d e c a t r i e n o i e a n d c i s一 , 9 , 12 , 15一
o e t a d e e a t e t r a e n o i e a e l d
s
.
K e y w o r d s S
e e d 0 11; 衬 i c r o u l a 5 1反天i o e , 51: . 丫一 l i n o l e n i e a c id ; F a t t v a c id .