全 文 ：黄花软紫草多糖的提取及清除自由基的研究
马厉芳 ` , 古丽 巴哈尔 · 阿 巴拜克力 2 , 阿不都拉 · 阿巴斯 ’
1( 新疆大学生命科学与技术学院 ,新疆乌鲁木齐 , 83。。 4 6 ) 2( 新疆师范大学生命科学与化学学院 ,新疆乌鲁木齐 , 8 3 0 0 54)
摘 要 研 究了黄花软紫草水溶 性多搪的提取及对 F e nt o n 反 应产生 · O H 自由基的清除效果 。 结果表明 , 以
水为溶剂提取 的紫草多糖的得率为 2 . 53 % , 且此粗多糖清除自由基的能力与其浓度呈线性关系 。
关键词 黄花软紫草 , 多糖 , 提取 , 自由墓 , 清除
黄花软紫草 ( A : n e b i a g u t z a t a B g e . ) 为紫草科软
紫草属植物 。 紫草中除 了根含色素可做药用外 ,还含
有紫草多糖 。 研究发现 , 紫草多糖具有抗病毒活性 ,
能够激活巨噬细胞的吞噬功能 , 促进 T 淋巴细胞的
免疫应答作用 ,具有促进机体非特异性免疫和特异性
的细胞免疫作用 。 为促进紫草多糖的应用 ,本文对紫
草多糖进行提取 ,并鉴别提取物对经基的清除作用 。
得粉末 , 即为精制多糖 。
1
.
2
.
3 标准曲线的绘制
1
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2
.
3
.
1 标准贮备液的配制
精密称取干燥至恒重的葡萄糖对照品 16 m g , 置
于 10 0 m L 容量瓶中以蒸馏水定容至刻度 ,摇匀 。
1
.
2
.
3
.
2 5 0 9 / L 苯酚溶液的配制
称取苯酚 1 0 0 9 , 加铝条 0 . 2 9 和 N a Z C ( ) 。 0 . 0 5
g
,用 电热套加热蒸馏 , 收集 1 82 ℃ 馏分 , 冷却后称取
20 9
,加纯水溶解并稀释至 4 0 m I J , 摇匀 ,装入棕色
瓶中备用 。
1
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2
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3
.
3 标准曲线的制备
精密吸取葡萄糖标准液 。 . 。 、 0 . 2 、 0 . 4 、 0 . 6 、 0 . 8 、
1
.
0 m L 于试管中 , 分别加水定溶至 2 . 0 m I J ,得 系列
对照品溶液 。 再加入 50 9 / L 的苯酚溶液 l m l廿 , 摇
匀 ,然后再向各管加人浓 H Z 5 0 ; 5 m L , 充分摇匀 , 室
温放置 2 5 m in , 同时做一空 白 , 在 51 0 n m 处测其吸
光度 ,绘制标准曲线 (见图 1 ) 。
()564洲
1 试验材料与方法
1
.
1 仪器 、 试剂与材料
恒温水浴锅 ,分光光度计 ,循环水式真空泵 ,高速
冷冻离心机 ,电子分析天平 ,旋转式蒸发器等 。
苯酚 , H C I , F e S ( ) 。 · 7 H Z O ,水杨酸 , 体积分数为
3 0 %的 H Z 0 2 , 葡萄糖 , 乙 醇 ,浓 H Z S ( ) 4 等试剂 ,化学
试剂均为分析纯 。
黄花软紫草 (经过鉴定 ) 。
1
.
2 试验方法
1
.
2
.
1 多糖提取
黄花软紫草~ 浸泡~ 乙醚脱脂一 加水提取一过
滤~ 减压浓缩 ~ 除蛋 白~ 浓缩 ~ 乙 醇沉淀 ~ 乙醇洗
~ 低温干燥~ 多糖粗品
1
.
2
.
2 操作要 ,点
精密称取 1 5 9 黄花软紫草粉末 ,用滤纸包裹置索
氏提取器中 ,先用乙醚再用 80 % 乙醇 回流提取 Z h ,
除去单糖和低聚糖 。 将渣料加人 10 倍蒸馏水 , 沸水
提取 Z h , 过滤 ,滤渣加 8 倍蒸馏水提 Z h , 合并滤液 ,
减压浓缩 。 以 4 0 0 0 r /m i n 离心 1 0 m i n 除去沉淀 ,得
粗提液 。 加 se va g 液除蛋 白 , 反复进行至无蛋 白层 。
上清液减压浓缩 , 用 4 倍的无水 乙醇沉淀 , 冷藏 24 h
后过滤 ,沉淀物即为粗多糖 。 粗糖加水溶解 ,加 双氧
水脱色 ,乙醇沉淀 ,过滤 ,沉淀用乙醚洗涤 , 60 ℃干燥 ,
第一作者 : 硕士研究生 `阿不都拉 · 阿巴斯教授为通讯作者 ) 。
收稿 日期 : 2 0 0 7一 () 9一 1 0 . 改回 日期 : 2 0 0 7一 1 2一 1 4
}:
.
:
ǎ呼à侧架岁
浓度 /m g · m L一 ,
图 1 标准曲线
1
.
2
.
4 多糖含量的测定 :
苯酚 一硫酸法测定川 。
1
.
2
.
5 多糖对 · O H 的清除作用
参照 F en ot n 方 法 建 立反 应 体系模 型困 , 利 用
H
2
0
: 与 F eZ 十混合产生 · O H 。 但由于 · O H 具有很
高的反应活性 ,存活时间短 , 若在反应体系中加人水
杨酸 ,就能有效地捕捉 · O H , 并产生有色产物 。
该产物在 5 10 n m 处有强吸收 , 若在此反应体系
2 0 0 8 年第 3 4 卷第 , 期 (总第 2刁 , 期 ) 11 4 7
DOI : 10. 13995 /j . cnki . 11 -1802 /ts . 2008. 01. 041
50ù九冷ó冶3q净八`巾ó1
示、并渔壮一淤王征
中加人具有清除 · O H 功能的被测物 ,便会与水杨酸
竞争 · O H , 从而使有色产物生成量减少 。 采用 固定
反应时间法 , 在相同体积的反应体系 (8 . s m m ol / L
H
2
0
2
1 m L
,
9 m m o l / L F e
Z +
1 m I
J ,
9 m m o l / L 1 m L
水杨酸一乙醇溶液 )中加人一系列不 同浓度的提取液 ,
并以蒸馏水为参比 , 与试剂空 白液 比较 , 在 51 0 n m
处测量各浓度下的吸光度 , 便能测定被测物对 · O H
的清除作用 ,其清除率计算公式 : 浓度 l
m g m L
一 ,
A有除 华 / 为 - 一 一 A
A
。
图 2 多糖浓度与经基清除率
X 10 0
式中 : A : , 为加人多糖后的经 自由基体系的吸光
度值 ; A 。 , 为不加多糖时经自由基体系的吸光度值 。
3 结 论
2 结果与分析
2
.
1 样品多糖含 , 测定
取供试样品液按标准曲线方法操作 , 测定吸光
度 ,从回归方程求出供试液中葡萄糖含量 。 按下式计
算样品中多糖含量 :
多糖含量 / % 一 C 只 D X F / m X 10 0
式中 : C 为样品液中葡萄糖浓度 ( m g I/ J ) , D 为多
糖稀释因素 , F 为换算因素 , m 为多糖质量 ( m g ) 。
换算因素测定 : 精密称取紫草多糖 20 m g ,置 10
m I
J 容量瓶 中 , 加水溶解并稀 释至刻度 ,摇匀 ,作多糖
液备用 。 测定其吸光度 ( A ) 。 按下式计算换算因素 :
F 一 m / C D
式中 : m 为多糖质量 ( m g ) , C 为多糖液中葡萄糖
浓度 ( m g / L ) , D 为多糖稀释因素 。
测得黄花软紫草中多糖的含量为 2 . 53 % 。
2
.
2 对 · O H 的清除能力
以实验的提取液粗多糖作为样品 ,取不同体积的
样品定容到 SOm I J ,分别测定对 · O H 的清除作用 。
从 图 2 中可看出 , 紫草粗多糖提取液对 由 F e nt -
o n 体系产生 的 · O H 有一定的清除作用 , 随着提取
液浓度的增加 ,对 · O H 自由基的清除能力也增强 ,
说明当多糖的浓度增加 .时 ,其清除率也增大 。
S t u d i e s o n E x t r a c t i o n T e e h n o l o g y a n d
( 1) 采用传统的水提醇沉的方法提取黄花软紫草
中多糖的含量 ,测得粗多糖的含量为 2 . 53 % 。
( 2) 试验结果表明 , 黄花软紫草水溶性多糖具有
一定的清除自由基的能力 ,且 在试验 的浓度范围内 ,
该多糖对 · O H 自由基的清除作用呈现出线性关系 。
参 考 文 献
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E f fe c t s o f S c a v e n g i n g F r e e R a d i c a l s
b y A r n e b i a g u t t a t a B g e
.
P o l y s a c c h a r i d e s
M
a L i f a n g
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G u l ib a h
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K e y w o r d s A
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