全 文 ：实用药物与临床 2 05 0年第 8卷第 3期 P rac ti 因 Ph a~
y An d Cl ini
c al R e m诫es , 2 0 0 5, v 6 1.吕, 凶Q
·实验研究 ·
紫外分光光法测定薄叶莺尾中总异黄酮的含量
吴 芳 , 李 蓉
(江苏苏北人民医院药剂科 , 扬州 2 2 50 0 2)
〔摘 要 1 目的 建立紫外分光光度法浏定 薄叶聋尾中 总黄酮的含全 。 方法 药材粉末 经 80 % 乙 醉提取 1
h 后 , 米用 萦外分光光度法 , 检 测波长 为 26 4 n m , 对薄叶著尾 中 总黄明的含贡进行浏定 。 结果 未用 该方 法可 以 准
确地浏定薄叶聋尾中 总 黄 明 的含童 , 给尾普在 3 . 4 一 20 . 64 井g /耐 范 围 内峰吸光度 与浓度 线性 关 来 良好 ( 二 =
0
.
9 9 9
, n = 5)
, 样 品平均回 收率为 1 02 . 5% , 精度 密 R S D 为 0 . 2 % ( n = 5) , 重复性 R S D 为 4 . 2 % ( n = 5) , 德定性
R sD 为 0
.
2 % ( 6 h 内 ) 。 结论 该方法 筋单 、 准确 , 可 用 于 薄叶 聋尾 中总黄酮的含童浏定 。
「关键词」 薄叶着尾 ; 总黄酮 ; 紫外分光光度法
eD te rm i
n a t io n o f th e to at l fl a v o on id es in I r is l
e p t o p h y lla b y UV s eP c t or Ph o tom et
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,
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n e e , Y a n g z h o u 225 002
,
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)
[ A加 t ar e t ] o bj ec t i v e 孔 es t a b五s h a u v s p e e tor p h o tom e r r y fo r d e t e mr i na t i o n of t h e ot t目 n a v o no id es in xd s l e p -
t o p h y l la
.
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,
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.
T h e w a ve l
e n g t h 15 2 6 4 n m
.
R e s u l ts T h e r e w as a l i n e a r re l a t i o n s肠 p f r o m 3 . 4 4 拜 g / rnl t o
2 0
.
6 4 拜以耐 . T h e re co v e r y ar t e 15 1 0 2 . 5 % . T h e r d a t i v e s t a n d a dr d e v i a t i o n o f a e e u ar t el y t es t a n d s t a b i五t y t es t a r e o · 2 %
a n d 4
.
2 % res
p e e t i v el y
.
C o n e l us i on T h
e m e t h o d 15 s im P l e a n d a e e u ar t e
,
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n o id es in I ir s l e p t o p h yl l a
.
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; U V
s P e e t r o p h o t o m e t羚
中图分类号 : R 9 2 7 . 2 文献标识码 : A 文章编号 : 1 67 3 一 0 0 7 0 ( 20 0 5 ) 0 3 一 0 0 1 4 一 0 2
莺尾属植物 中所含特征性成分为异黄酮 , 测
定的方法有紫外分光光度法 、 薄层色谱扫描法 、 方
波伏安分析法 、 R P 一H P L C 法等 。 但薄叶莺尾至今
没有确切 的质量标准 , 为对其进行深入的研究和
评价 , 本文采用紫外分光光度法对薄叶莺尾中的
总异黄酮含量进行测定 。
1 仪器与试药
75 2 紫外光栅分光光度计 (上海分析仪器制造
厂 ) ;十万分之一分析天平 (上海天平仪器厂 ) 。 莺
尾昔对照品为 自提 , 结构经 u v 、 IR 、 ` H一 N M R 及”
G N M R 等鉴定 , 纯度经 H P L C 检测为 98 . 0 % 。 其
他试剂均为分析纯 。 药材样品均采 自四川坟川 ,
分别为 1 9 9 2 年样品 , 2 0 0 1 年居群 l 、 2 样品 , 2 0 0 2
年居群 1 、 2 、 3 样品 , 共 6 份样品 , 均经鉴定为薄叶
莺尾 I r i S l e p t o p h y l la 的干燥根茎 。
2 实验方法与结果
2
.
1 对照品及供试品溶液的制备
2
.
1
.
1 对照 品溶液的制备 精密称取对照 品莺
尾昔约 0 . 5 6 0 m g , 置于 2 5 m l量瓶中 , 用 5 0 % 乙醇
溶解并定容至刻度 , 摇匀 , 配制成 0 . 034 4 m g / m l
的溶液 。
2
.
1
.
2 供试品溶液的制备 精密称取薄叶莺尾
药材粉末 ( 6 0 目 )约 3 0 m g , 加 5 0 % 乙醇 2 0 m l , 热
收稿日期 : 2 0 0 4 一 1 0 一 12
作者简介 :吴芳 ( 1 9 70 一 ) , 女 , 江苏南通人 , 药师 。
回流提取 l h , 趁热过滤 , 放冷 , 置于 25 ml 容量瓶
中定容 , 摇匀 。 精密量取 1 m l 于 10 m l 容量瓶 中
定容 。
2
.
2 检测波 长的选择 对照 品溶液及供试品溶
液在 2 0 0 一 4 0 0 n m 之间进行扫描 , 发 现均 在 2 64
n m 附近有最大吸收峰 , 由于 264 n m 处吸收较强 ,
故实验 中选择测定波长为 2 64 n m 。
2
.
3 线性关系的考察 分别精密吸取 1 , 2 , 4 , 6,
8
,
1 0
,
1 2 m l 对照 品溶液置于 5 0 m l 容量瓶中 , 加
8 0 % 乙醇定容至刻度 , 摇匀 ;以 80 % 乙醇为空白对
照 , 于 2 64 n m 处测定吸收度 。 用最小二乘法以浓
度 ( x , m g / m l) 对吸收度 ( Y )进行线性回归 , 回归方
程为 : Y = 4 6 . 6 6 1 X 一 0 . 0 2 5 5 ( r = 0 . 9 9 9 9 ) , 线性范
围 3 . 4 4 x 10 一 3一 2 . 0 6 4 义 1 0 一 2 m g / m l。
2
.
4 提取方法的考察
2
,
4
.
1 提取溶剂对提取效率的影响 称取 四季
青药材粉末 ( 6 0 目) 3 0 m g , 分别加 90 % 乙醇 , 5 0 %
乙醇 , 7 0 % 乙 醇 , 60 % 乙 醇 、 水 、 甲醇 2 0 m l , 按
“
2
.
1
.
2 项 ” 下操作制备供试品溶液 。 以各 自的溶
剂为空 白 , 于 2 6 4 n m 处测定吸收度 , 按标准 曲线
计算总异黄酮含量 (以莺尾普计 ) 。 结果表明 , 提
取溶剂以 80 % 乙醇最好 。 见表 1 。
2
.
4
.
2 提取时 间对提取效率的影 响 称取薄叶
莺尾药材粉末 ( 6 0 目 ) 3 0 m g , 加 5 0 % 乙 醇 2 0 m l ,
按照 “ 2 . 1 . 2 项 ” 下操作 , 分别 加热 回流 0 . 5 , 1 , 2 ,
DOI : 10. 14053 /j . cnki . ppcr . 2005. 03. 006
实用 药物与临来 2 5 0 0年 第 8卷第 3期 Pa rt c、以 P ha m ra ey And C ln i i以 Rm e汕s e. 2 5 0 0. v o l. 8. N o. 3
3
,
4
,
s h
。 以 8 0 % 乙醇为 空白对照 , 于 2 6 4 n m 处
测定吸收度 , 按标准曲线计算总异黄酮含量 (以莺
尾昔计 ) 。 结果表明 , 提取 l h 即可将总异黄酮基
本提 取完全 。 根 据 以上 结果 , 确定提取条件为
8 0 % 乙醇提取 l h 即可 。 见表 2 。
表 1 提取的结果 ( n = 3)
溶液 粉末 (mg ) 吸收度
0
.
4 16
0
.
4 9 8
0
.
4 7 8
含量 (% ) 平均含量 ( % )
甲醇
h 内稳定 。
2
.
8 加样 回收率实验 精密称取薄叶莺尾药材
粉末 ( 60 、 目 )约 2 0 m g (5 份 ) , 分别加对照品适量 ,
加 2 0 m l 甲醇 , 加热回流 , 放冷 , 用 甲醇定容到 25
m l
, 摇匀 。 以 80 % 乙醇为空 白对照 , 在 2 64 n m 下
进行测定 , 计算加样 回收率 。 结果表明该方法加
样 回收率良好 , 符合分析要求 , 见表 3 。
表 3 回收结果
乙醉
90 % 乙醉
8 0 % 乙醉
7 0 % 乙醉
8 0
.
3 9 7
9 0
.
3 9 1
1 0
.
4 5 8
6 0
.
4 7 1
8 0
.
4 8 0
9 0
.
4 2 6
9
.
1 7
9
.
3 5 9
.
2 0
9
.
0 8
7
.
8 6
8
.
0 0 8
.
0 6
8 3 3
9
.
30
9
.
0 9 9
.
2 4
9
.
3 4
1 0
.
7 4
1 1
.
17 1 0
.
8 0
1 0
.
4 8
9
.
0 5
9
.
4 1 9
.
1 9
9
.
1 1
7
.
7 6
7
.
6 5 7
.
52
7 14
5
.
7 3
6
.
0 6 5
.
9 4
6
.
0 4
弊、 g 尹 加人量 测得量 回收 平均回收率(吨 ) (m g ) ( % ) ( % ) R S D
0
.
5 5 6
0
.
5 2 3
0
.
5 3 6
0
.
4 5 6
0
.
4 5 2
0
.
4 6 6
0
.
42 9
0
.
4 4 3
0
.
3 9 3
0
.
30 3
0
.
2 7 2
0
.
3 14
原含量
( m g )
3
.
4 3 44
3
.
3 0 4 8
3
.
1 2 1 2
3
.
1 7 52
3
.
5 1
0
.
7 6 9 3
.
8
1
.
0 2 10 6
.
3
0
.
7 8 10 9
.
8 10 2
.
5 6
.
1
1
.
30 10 4
.
0
1
.
62 9 8
.
8
,1
6
j.几一、ú4OOC,726.…onù01上,二n入乙UC夕4ùj,上nUn692内J八2凡」
nU内J7一、一20矛
ō、曰
g0Qé71二Rà9ùI一Q`U只ùn6工
.
I
2飞úù,ù
R一47内J,1,ù1盖06nU,J飞口门JZù6 0 % 乙醉
水
表 2 提取的结果 《抢 = 3)
时间 ( h ) 粉末 ( g )
2 8
.
9
0
.
5 3 2
.
0
32
.
2
2 9
.
0
1 26
.
3
2 8 7
2 8
.
5
2 2 9
.
4
2 8
.
4
2 8
.
4
3 30
.
7
3 1
.
4
3 1
.
0
4 32
.
1
2 7 4
3 1
.
4
5 2 7
.
6
2 7 1
吸收度
0
.
4 8 3
0
.
5 6 3
0
.
5 62
0
.
5 5 6
0
.
52 3
0
.
5 3 6
0
.
5 4 0
0
.
57 3
0
.
5 02
0
.
5 6 1
0
.
57 8
0
.
5 82
0
.
5 8 5
0
.
5 9 9
0 52 1
0
,
6 0 3
0
.
5 3 9
0
.
5 2 9
食量
( % )
平均含量
( % )
9
.
4 3
9
.
8 5 0
.
9 6 9
9
.
7 8
10 7 4
1 1
.
1 7 10
.
8 0
10
.
4 8
10
.
6 3
1 0
.
9 1 1 0
.
5 0
9
.
9 5
1 1
.
0 6
1 0
.
5 3 1 0
.
6 5
10
.
3 7
1 0
.
5 5
10
.
4 2 10
.
0 2
1 0
.
6 9
10
.
7 2
10
.
9 6 10
.
8 8
1 0
.
9 6
2
.
5 重复性实验 称取样品粉末 30 m g , 按以上
确定提取方法 , 按 “ 2 . 1 . 2 项 ” 平行制备 5 份样品 ,
以 8 0 % 乙醇为空白对照 , 在 2 64 n m 下进行测定吸
光度 , 5 次实验结果的 R S D 为 4 , 2 % , 表明该方法
重复性符合要求。
2
.
6 精密度实验 取同一份对照品溶液 , 在 2 64
nr 处测定其吸光度 , 连续测定 5 次 。 测定结果的
R S D 为 0 . 2 % , 表明仪器精密符合要求 。
2
.
7 稳定性实验 取样品适量 , 按 “ 2 . 1 . 2 项 ” 制
备供 试品溶液 , 以 80 % 乙醇为空 白对照 , 在 2 64
mn 下进行测定 , 每隔 l h 测定一次 , 连续测 s h , 5
h 内测定结果的 R S D 为 0 . 5 % ,表明样品溶液在 5
回收率 ( % ) = 【(测得量 一药材原含量 ) /加入
量 ] X 1 0 0 %
2
.
9 样品测定 精密称取薄叶莺尾药材粉末 ( 60
目)约 3 0 m g , 加 8 0 % 乙 醇 , 加热 回流 , 放冷 , 于 2 5
m l容量瓶中定容 , 摇匀 。 精密量取 1 m l溶液于 10
m l容量瓶中 , 稀释至刻度 。 所得溶液于 264 n m 处
测定吸收 度 。 按照标准 曲线计算总异黄 酮含量
(以莺尾昔计 ) , 结果见表 4 。
表 4 总黄酮的测定结果
粉末 (gm ) 吸收度 含量 ( % )
1 9 9 2 年样品 3 5 7 0 9 0 6 13 . 9 8
2 0 0 1 年居群 1 3 5 . 2 0 . 6 3 0 9 . 9 8
2 0 0 1 年居群 2 3 1 . 6 0 . 6 0 5 10 . 6 9
2 0 0 2 年居群 1 3 2 . 3 0 . 6 9 6 1 1 . 9 7
2 0 0 2 年居群 2 3 5 . 4 0 . 7 1 1 11 . 1 5
2 0 0 2年居群 3 3 2 . 8 0 . 7 0 4 1 1 . 9 2
3 讨论
3
.
1 异黄酮成分为薄叶莺尾根茎中的主要成分 ,
与其他异黄酮成分相 比 , 莺尾昔的含量 比其他 的
异黄酮高很多 , 所以采用鸯尾昔为标准品来计算
总异黄酮的含量 。
3
.
2 样品测定结果表 明 , 6 份薄叶鸯尾样品中总
异黄酮的含量都在 10 % 以上 , 其中 1 9 9 2 年药材总
异黄酮含量最高 , 2 001 年居群 1 的总异黄酮含量
最低 。
3
.
3 有关薄叶莺尾中总异黄酮的含量测定方法
未见报道 。 本文采用紫外分光光度法对薄叶莺尾
中总异黄酮 的含量进行测定 , 是一 种方便有效 的
含量测定方法 , 为对薄叶莺尾进行全面质量评价
提供了一定的科学依据 。
参考文献 :
〔l] 沙怀 , 陈桂先 , 马莉 . 银杏叶中总黄酮的提取与测定【J ] . 中国
药房 , 1 9 9 5 , ( 5 ) : 2 8 一 2 9 .
〔2 ] 徐雷鸣 , 汪索兰 . 紫外分光光度法测定百蕊草总黄酮的含量
[ J ]
.现代中药研究与实践 , 1 9 9 5 , ( 4 ) : 3 5 一 4 2 .