全 文 ：天然产物研究与开发 NatProdResDev2010, 22:395-397
文章编号:1001-6880(2010)03-0395-03
　
　
　收稿日期:2009-04-02　　　接受日期:2009-07-31
　基金项目:云南中医学院科学研究基金项目(2007年重点项目);
云南省应用基础研究计划面上项目(2006C0045)
＊通讯作者 Tel:86-871-5729436;E-mail:qingzhaoyn2008@126.com
滇姜花二萜成分的抗肿瘤活性研究
赵　庆 1, 2 ,贺小琼 3 ,郝小江 2 ,邹　澄 3＊
1云南中医学院中药学院 , 昆明 650200;2中国科学院昆明植物研究所植物化学与西部植物资
源持续利用国家重点实验室 ,昆明 650204;3昆明医学院药学院 , 昆明 650031
摘　要:对滇姜花粗提物 、滇姜花素 A(1)和姜花酮(2)进行了动物体内抗肿瘤活性测试 , 结果表明它们均能显
著性抑制小鼠体内移植性肿瘤 H22的生长 , 其中滇姜花素 A对小鼠 H22肿瘤生长抑制率达 54.27%,作用最
强。体外抗肿瘤实验发现 ,滇姜花素 C(3)对体外培养的人类乳腺癌细胞株 MDA-MB-231具有较强的细胞毒作
用 , 并具有明显的剂量效应关系。
关键词:滇姜花;滇姜花素 A;滇姜花素 C;姜花酮;抗肿瘤活性
中图分类号:R285;Q946 文献标识码:A
AnticancerEffectofDiterpenesfromHedychiumyunnanense
ZHAOQing1, 2 , HEXiao-qiong3 , HAOXiao-jiang2 , ZOUCheng3＊
1FacultyofPharmacy, YunnanTraditionalChineseMedicalColege, Kunming650200 , China;2StateKey
LaboratoryofPhytochemistryandPlantResourcesinWestChina, KunmingInstituteofBotany, ChineseAcademyofSciences,
Kunming650204 , China;3SchoolofPharmaceuticalSciences, KunmingMedicalUniversity, Kunming650031 , China
Abstract:TheinvivoanticanceractivityofyunnancoronarinA(1), hecychenone(2), andcrudeextractofhedychium
yunnanensewastestedhere.ResultrevealedthatyunnancoronarinA, hecychenoneandthecrudeextractlshowedsignifi-
cantinhibitoryeffectonH22tumorinICRmice.YunnancoronarinAhadthestrongestinhibitoryefect, withtheinhibito-
ryratioof54.27%.YunnancoronarinC(3)alsoshowedstronganticancerefectonhumanbreastcancercelllineMDA-
MB-231 invitro.
Keywords:Hedychiumyunnanense;yunnancoronarinA;yunnancoronarinC;hedychenone;anticanceractivity
　　国内外已对姜科姜花属植物抗肿瘤活性二萜成
分进行了一些研究。日本学者曾从姜花属植物姜花
中分离得个数个对 V-79细胞具有体外抗肿瘤活性
的成分 [ 1] 。我们曾对姜花属植物滇姜花和圆瓣姜
花根茎的化学成分进行了研究 ,分离得到了多个萜
类成分 [ 2-7] ;并对一部分二萜成分进行了对 KB细胞
的细胞毒活性筛选 ,大部分被筛选的成分显示有活
性 ,其中二萜成分滇姜花素 B、C对 KB细胞的细胞
毒活性十分显著 [ 3, 4] 。此后我们又从圆瓣姜花中分
离得到了数个二萜成分 ,其中部分二萜成分对 K-
562细胞和 A-549细胞显示了显著的体外细胞毒活
性 [ 6] 。到目前为止 ,对姜花属二萜成分的抗肿瘤活
性研究仅仅局限于体外抗肿瘤实验 ,尚未见到有关
体内抗肿瘤活性的研究报道。因此 ,我们十分关注
姜花属二萜成分是否具有体内抗肿瘤活性 ,并开展
了相关的研究工作 。
1　材料与方法
1.1　样品制备
滇姜花根茎样品采于云南省昆明市 ,植物标本
由中国科学院昆明植物研究所童绍全研究员鉴定为
HedychiumyunnanenseGangep.,保存于中国科学院
昆明植物研究所植物化学实验室 。
取滇姜花根茎样品 14 kg用 95%乙醇回流提取
三次 。乙醇提取物依次用石油醚提取三次 ,乙酸乙
酯提取一次 ,正丁醇提取三次。石油醚提取部分共
805 g,取其中 500 g经硅胶柱层析 、石油醚 -乙酸乙
酯梯度洗脱 ,其中的石油醚-乙酸乙酯(40:1)洗脱部
分再经氧化铝柱层析 、石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱 ,
得到姜花酮(1)14g,滇姜花素 A(2)3.2g。石油醚 -
乙酸乙酯(2:1)洗脱部分再经硅胶柱层析 、氯仿-甲
醇(80:1)洗脱 ,得滇姜花素 C(3)210 mg。上述三
个化合物经核磁共振法测试为纯品 ,纯度均在 95%
以上。另取 200g滇姜花根茎样品用 95%乙醇回流
提取三次 ,提取液浓缩后得滇姜花粗提物 12 g。
图 1　化合物 1 ～ 3的化学结构
Fig.1　Structuresofcompound1-3
　　在小鼠体内抗肿瘤实验中 ,滇姜花粗提物 、滇姜
花素 A和姜花酮以二甲基亚砜(DMSO)溶解进行实
验 ,使用剂量分别为 100、50、50 mg/kg。在体外细
胞培养抗肿瘤实验中 ,滇姜花素 C以 DMSO溶解 ,
使用浓度分别为 0、2.5、5.0、10.0μg/mL。
1.2　小鼠体内抗肿瘤实验
清洁级 ICR小鼠共 50只 ,雌雄各半 ,体重 19 ～
21 g,由云南白药股份集团有限公司提供(滇实动证
2002106,编号 0000057)。将小鼠随机分为 5组 ,分
别为阴性对照组 、阳性对照组 、滇姜花素 A组 、姜花
酮组和滇姜花粗提物组 ,每组 10只小鼠 ,雌雄各半 。
小鼠在适应性喂养 2 d后 ,于右前肢皮下接种新鲜
的 H22肿瘤细胞悬液(0.1 mL/鼠 , 1 ×106细胞),
H22细胞株由云南省肿瘤研究所提供 。在接种肿瘤
细胞后的第 2日开始按分组给药 。阴性对照组腹腔
注射给予 DMSO,阳性对照组给予环磷酰胺 ,其它各
组给予相应的待测物。每天给药 1次 ,于给药的第
7 d将动物脱臼处死 ,完整剥离肿瘤并在电子称称
肿瘤重量及肿瘤剥离后的动物体重。比较分析各组
肿瘤重量及瘤重抑制率 。
瘤重抑制率(%)=(阴性对照组肿瘤平均重
量 /g-样品组肿瘤平均重量 /g)/阴性对照组平均肿
瘤重量 /g×100%
1.3　体外抗肿瘤活性
MDA-MB-231是美国国立癌症研究所推荐的抗
肿瘤药物筛选的癌细胞株之一 ,是雌激素受体阴性
的人类乳腺癌细胞株 ,是乳腺癌研究中常用细胞株 ,
并能在裸鼠体内进行普通接种。本次采用 MDA-
MB-231进行实验 ,不仅能观察体外抗癌效果 ,并能
为以后的裸鼠体内抗癌实验提供参考依据。 MDA-
MB-231细胞株由美国 ATCC公司提供 。将培养的
肿瘤细胞接种于 6孔板 ,于 37 ℃、5%CO2培养箱培
养 24 h后 ,吸去培养液 ,用 PBS洗一遍 ,再加入含有
不同浓度待测物滇姜花素 C的培养液 ,每个剂量同
时做 3孔平行检测 。加样培养 72h后收集细胞 ,于
显微镜下计数癌细胞数 ,统计分析结果并绘制细胞
增殖抑制曲线 。
细胞增殖抑制率(%)=(阴性对照组细胞数 -
待测物组细胞数)/阴性对照组细胞数 ×100%
1.4　统计方法
小鼠的体重 、瘤重和体外癌细胞均数采用 t检
验进行统计分析。
2　结果与分析
2.1　滇姜花粗提物 、滇姜花素 A及姜花酮对小鼠
体内 H22肿瘤生长的抑制活性
体内抗肿瘤实验研究结果见表 1。
表 1　体内抗肿瘤实验研究结果
Table1　Resultoftheinvivoanticanceractivity
组别
Group
动物数
MiceNo.
给药剂量
Dose(mg/kg)
小鼠体重
Mousebody
weight(g)
肿瘤重量
Tumorweight(g)
抑制率
Inhibitoryratio
(%)
阴性对照组 10 – 24.57±5.29 2.11±0.56 –
环磷酰胺组 10 25 25.30±2.02 1.14±0.40＊＊ 45.81
滇姜花粗提物组 10 100 21.61±1.73 1.07±0.48＊＊ 49.23
滇姜花素 A组 10 50 20.66±3.06 0.96±0.45＊＊ 54.27
姜花酮组 10 50 22.79±2.21 1.51±0.58＊ 28.58
　　注:与阴性对照组比较 ＊P<0.05;与阴性对照组比较 , ＊＊ P<0.01。 Note:Comparedwiththenegativecontrolgroup, ＊P<0.05;Compared
withthenegativecontrolgroup, ＊ ＊ P<0.01.
　　肿瘤生长研究结果表明 ,滇姜花粗提物 、滇姜花
素 A和姜花酮均显示了明显的体内抑瘤活性 ,其中
滇姜花素 A、姜花粗提物的体内抑瘤活性很强 ,肿瘤
生长抑制率超过了环磷酰胺阳性对照组 ,姜花酮的
抑瘤活性最低 。
表 1结果还显示 ,三个给药组动物体重增长缓
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慢 ,尽管结果比较未发现各组之间体重有显著性差
异 ,但各给药组动物的平均体重都低于阴性对照组 ,
说明滇姜花粗提物 、滇姜花素 A和姜花酮在本研究
的使用剂量下可能有一定毒性 。
2.2　滇姜花素 C对人类乳腺癌细胞株 MDA-MB-
231的体外细胞毒活性
滇姜花素 C对人类乳腺癌细胞株 MDA-MB-231
细胞的体外细胞毒活性 ,结果见表 2和图 2。
表 2　滇姜花素 C对 MDA-MB-231乳腺癌细胞株的抑制率
Table2　InhibitoryrateofyunnancoronarinCagainsthuman
breastcancercelllineMDA-MB-231 invitro
浓度(μg/mL)
Concentration
癌细胞数(×105 /孔)
CancercelNo.
抑制率(%)
Inhibitoryratio
0 11.50±0.99 0
2.5 10.43±0.90＊ 9.56
5 5.67±0.49＊＊ 50.70
10 0.00±0.00＊＊ 100
　　注:与空白对照组比较 , ＊ P<0.05;与空白对照组比较 , ＊＊ P<
0.01。 Note:Comparedwiththecontrolgroup, ＊ P<0.05;Compared
withthecontrolgroup, ＊ ＊ P<0.01.
图 2　滇姜花素 C对 MDA-MB-231乳腺癌细胞株的抑制
率曲线
Fig.2　InhibitorycurveofyunnancoronarinCagainsthuman
breastcancercellineMDA-MB-231invitro
　　结果表明 ,滇姜花素 C对 MDA-MB-231乳腺癌
细胞株具有很较强的抑制作用 ,并具有很好的剂量
反应关系 ,其 IC50 <5 μg/mL。在剂量为 10 μg/mL
时 ,抑制率可达 100%。该实验结果具有较好的重
现性。
3　讨论
滇姜花 (HedychiumyunnanenseGangep.)为姜
花属植物 ,主产于云南 。滇姜花中含量最高的二萜
成分为姜花酮(hedychenone, 1)与滇姜花素 A(yun-
nancoronarinA, 2),在过去的研究工作中 ,这两个二
萜成分均具有体外抗肿瘤活性 。本次研究结果表
明 ,滇姜花素 A、滇姜花的粗提物和姜花酮对小鼠体
内移植性肿瘤均具有显著的抗肿瘤活性 ,其中以滇
姜花素 A的作用最强。体外的抗肿瘤实验结果显
示 ,滇姜花素 C对人类的肿瘤细胞株具有较强的细
胞毒作用 ,与前期的体外细胞毒作用研究 [ 4]一致。
已经取得的研究结果表明 ,滇姜花中的二萜成分在
体内体外对动物肿瘤细胞株和人类肿瘤细胞株均有
很好的抗肿瘤活性 ,值得作为抗肿瘤药物进行进一
步研究。
本次在动物体内抗肿瘤实验中也发现 ,滇姜花
提取物对动物的体重生长有明显影响 ,在本次实验
剂量下 ,实验组动物体重生长缓慢且出现了一定的
毒性反应 。因此 ,在今后的研究中 ,应该对其进行安
全性毒理学评价 ,了解其毒性作用 。滇姜花的二萜
成分的体内体外抗肿瘤作用机制将在今后的研究中
进行探讨 。
参考文献
1　ItokawaH, MoritaH, KatouI, etal.Cytotoxicditerpenesfrom
therhizomesofHedychium coronarium.PlantaMedica,
1988, 54:311-315.
2　ZhaoQ(赵庆), HaoXJ(郝小江), ChenYZ(陈耀祖), et
al.StudiesonditerpenoidconstituentsofHedychiumyun-
nanense.ChemJChinUniv(高等学校化学学报), 1995,
16:64-68.
3　ZhaoQ(赵庆), HaoXJ(郝小江), ChenYZ(陈耀祖), et
al.StudiesonditerpenoidsfromHedychiumforrestiandtheir
antitumoractivity.ActaPharmSinica(药学学报), 1995,
30:119-122.
4　ZhaoQ(赵庆), HaoXJ(郝小江), ChenYZ(陈耀祖), et
al.AntitumorditerpenoidsfromHedychiumyunnanenseand
theirphotosensitizedoxidation.ActaBotanicaSinica(植物学
报), 1999, 41:528-530.
5　ZhaoQ(赵庆), HaoXJ(郝小江), ZouC(邹澄), etal.Two
newcomponentsfromHedychiumyunnanense.NatProdRes
Dev(天然产物研究与开发), 2008, 20:761-764.
6　ZhaoQ(赵庆), QingC(卿晨), HaoXJ(郝小江), etal.
Cytotoxicityoflabdane-typediterpenoidsfrom Hedychium
foresti.ChemPharmBull, 2008, 56:210-212.
7　ZhaoQ(赵庆), HaoXJ(郝小江), ZouC(邹澄), etal.
NorditerpenoidsfromHedychiumvillosum.NatProdResDev
(天然产物研究与开发), 2009, 21:10-12.
397Vol.22 　　　　　　赵　庆等:滇姜花二萜成分的抗肿瘤活性研究