全 文 ：　　基金项目:沈阳市科学技术计划项目(1091142-9-00)
　　通信作者:初阳
·研究生论坛 ·
淡竹叶中总黄酮物质的提取工艺考察
沈阳药科大学中药学院(110016)　杨　倩
中国医科大学附属第一医院　　　　　初　阳
　　中药淡竹叶为禾本科植物淡竹叶(Lopharhe rum g rac-
ile.Brongn.)的干燥茎叶。其主要有效成分为黄酮糖苷和
香豆素类 ,具有降血脂 、抗血栓 、抗氧化 、免疫调节等生理活
性[ 1] 。竹叶黄酮具有优良的抗活性自由基 、抗氧化 、抗衰
老 、抗疲劳 、增强免疫力 、抗菌等生物学功能 , 由于其广泛的
生物活性[ 2] ,近年来已受到国内外学者的广泛关注 , 而我国
竹叶资源十分丰富 ,因此开发其药用资源具有重要的意义。
本文利用紫外分光光度法 ,以浓缩液中总黄酮含量作为指
标 ,考察了用乙醇提取淡竹叶中总黄酮的各提取条件 , 并采
用正交设计加以优化。
1　仪器与试药
UV-9100 紫外-可见分光光度计(北京瑞利分析仪
器公司),真空干燥箱(上海医用仪器厂),水浴锅(巩义市予
华仪器有限责任公司), 淡竹叶饮片(辽宁省药材公司 , 经鉴
定为真品);芦丁对照品(批号:100080-200707 , 中国药品
生物制品检定所);乙醇(天津市富宇精细化工有限公司),
NaNO 2 、NaOH(天津市博迪化工有限公司)。
2　方法与结果
2.1　总黄酮的含量测定方法
2.1.1　标准曲线的制备:标准溶液的制备:精密称取在 105
℃干燥下的芦丁对照品 25 mg ,置 100 mL容量瓶中 , 加适量
80%的乙醇溶解 ,摇匀 ,定容至刻度, 即得对照品溶液。
标准曲线的绘制[ 3] :精密吸取上述对照品溶液 0、2.0、
4.0、6.0、8.0 、10.0、12.0 mL 分别置于 50 mL容量瓶中 ,并
分别用 80%乙醇补足体积至 12 mL。分别加入 5% NaNO2
溶液 1.5 mL , 混匀 , 放置 6 min 后加入 10% Al(NO3)3 溶液
1.5 mL , 混匀, 放置 6 min后再加入 4% NaOH 溶液 20 mL ,
混匀 , 用水定容至刻度 , 放置 15 min。以第一管为空白 ,于
510 nm 处测吸光度(A值)。芦丁的浓度 C(mg/mL)对应吸
光度 A绘制标准曲线 , 结果表明 , 芦丁的浓度 C 在 0.01 ～
0.06 mg/ mL线性关系良好 , 回归方程为:A =13.149C-
0.0125 , r =0.999 6。
2.1.2　总黄酮含量的测定:将竹叶黄酮浓缩液加入 50 m L
容量瓶中 ,以 80%乙醇定容至刻度。精密吸取上述溶液 2
mL 置于 50 mL 容量瓶中 , 并以 80%乙醇补充体积至 12
mL。加入 5% NaNO 2 溶液 1.5 mL ,混匀 , 放置 6 min 后加
入 10% Al(NO 3)3 溶液 1.5 mL ,混匀 , 6 min 后再加入 4%
NaOH 溶液 20 mL ,混匀 , 用水定容至刻度。以阴性对照为
空白 ,按 2010版《中国药典》(一部)[ 4] 的规定方法 , 于 510
nm 处测 A 值。
2.1.3　竹叶黄酮提取液的浓缩[ 5] :将回流提取液抽滤 , 减
压蒸馏至提取液无醇味 , 蒸馏水稀释一定体积 , 加入等体积
石油醚洗涤 3次 , 洗涤液减压蒸馏至一定体积 , 加入多倍量
浓醇 , 放置过夜。将醇沉液以 4 000 r/ min 高速离心 ,上清
液减压蒸馏至一定体积 ,即为竹叶黄酮浓缩液。
2.2　提取竹叶总黄酮乙醇浓度的考察
称取 10 g 淡竹叶 3 份 , 粉碎过筛 , 分别加入 60%、
70%、80%乙醇各 200 m L , 70 ℃下水浴回流 2 h ,提取液按
2.1.3 项下洗涤浓缩 ,按 2.1.2 项下测定 , 计算出原药材中
总黄酮含量。总黄酮含量随乙醇浓度的增加降低(乙醇浓
度为 60%、70%和 80%时含量分别为 4.93、6.84 和 5.05
mg/g), 故乙醇浓度为 70%时总黄酮含量最大。
2.3　提取时间的考察
称取 10 g淡竹叶 3 份 , 粉碎过筛 , 加入 70%乙醇 200
m L , 70 ℃下水浴分别回流 1.5 , 2 和 2.5 h。提取液按
2.1.3 项下浓缩干燥 , 按 2.1.2 项下测定总黄酮含量。表
明提取时间 1.5 、2、2.5 h 对总黄酮含量影响不大 , 分别为
4.90、4.86 和 4.92 mg/ g。
2.4　提取温度的考察
称取 10 g淡竹叶 3 份 , 粉碎过筛 , 加入 70%乙醇 200
m L ,分别在 70 ℃, 80 ℃和 90 ℃下水浴回流 2 h。提取液
按 2.1.3 项下浓缩干燥 , 按 2.1.2 项下测定总黄酮含量。
总黄酮含量在提取温度为 70 ℃, 80 ℃和 90 ℃时含量分别
为 5.83、5.96 、5.29 mg/ g , 80 ℃时达到最大。
2.5　溶剂量的考察
称取 10 g淡竹叶 3 份 ,粉碎过筛 ,按照淡竹叶和乙醇
量比 1∶15 , 1∶20 , 1∶25 分别加入 70%乙醇 150 、200 和
250 mL , 在 80 ℃下水浴回流 2 h。提取液按 2.1.3 项下浓
缩干燥 , 按 2.1.2 项下测定总黄酮含量。 当溶剂量为 250
m L时 , 总黄酮含量最高 ,为 4.94 mg/g 。
2.6　正交试验
根据单因素试验结果 , 选择对本实验影响最大的 3 个
因素 , 即乙醇的浓度(60%、70%、80%)、提取温度(70 、80、
90 ℃)、溶剂量(150、200 、250 mL),做三因素三水平的正交
试验 , 以竹叶总黄酮在浓缩液中的含量(X)为评价指标 , 对
提取工艺进行优化。含量越高 , 工艺越优。 按正交表 L9
(43)设计实验。
3　讨　　论
正交实验结果表明 , 醇浓度对实验结果的影响最大。
由方差分析的 F 检验结果可知 , 各因素对竹叶总黄酮含量
的影响差异均无统计学意义 ,原因可能为本实验误差自由
·1128· 山西医药杂志 2010年 12月第 39卷第 12期上半月　Sh anxi Med J , Decem ber 2010 , Vol.39 , No.12 th e Fi rst
度较小 ,使检验的灵敏度低而使考察因素的显著性不明显。
由于各因素对总黄酮的影响均不显著 , 故不进行各因素水
平的多重比较。综上所述 , 选择各因素含量平均值最大的
水平为本实验的最佳工艺 , 即为 70 ℃时 ,以 250 mL 70%
乙醇水浴回流 2 h , 得到竹叶总黄酮提取率最高。
经实验比较发现将洗涤浓缩后的竹叶黄酮提取液直接
溶解测定总黄酮含量的方法比将浓缩液真空干燥后测定的
结果高 ,原因可能是由于真空干燥过程使有效成分在容器
壁上吸附造成损失。总黄酮的乙醇提取液经浓缩后加入多
倍量浓醇是为了将提取液中的多糖等水溶性大分子沉淀出
去 ,使得到的总黄酮精制度更高。整体提取纯化过程中石
油醚洗涤和醇沉的过程都有可能造成有效成分的损失而使
含量测定的结果偏低。
参 考 文 献
1 孙永林.竹子的化学成分.生物学教学 , 2007 , 32(12):9-10.
2 刘利艳 ,张季林.竹叶黄酮的生物学作用研究进展.江西中医学
院学报 , 2009 , 21(4):98-100.
3 岳秀梅.淡竹叶中总黄酮的提取与含量测定.世界中西医结合
杂志 , 2009 , 4(3):177-178.
4 国家药典委员会.中国药典(一部).北京:中国医药科技出版
社 , 2010.
5 李志洲.淡竹叶总黄酮最佳萃取工艺及其抗氧化性的研究.食
品研究与开发 , 2008 , 29(11):42-45.
(收稿日期:2010-08-06)
作者简介:杨倩 ,女 , 1986 年 4 月生 , 在读硕士 , 沈阳药科大
学中药学院 , 110016
·病例报告 ·
成功救治宫内妊娠 40周脐带脱垂一例
中国辐射防护研究院附属医院(030006)　尹雅莉
　　患者女 , 24岁。因“停经 9 个月 , 规律腹憋 8 h 伴阴道
流液”于 2010年 4月 18 日入院。平时月经规律 , 末次月经
约在 2009 年 8 月 ,预产期在 2010 年5 月 , 但 2010 年 2 月 3
日 B超推算预产期为 4月 20 日左右。早孕反应不明显 ,妊
娠早期否认感冒 、发热史 , 否认毒害物质 、放射性物质接触
史。孕 4个月始觉胎动 ,孕期无头晕 、眼花史 ,无腹痛 、腹泻
史。 2010 年4 月 17 日晚 22:00出现规律腹憋伴阴道流液 ,
18 日晨 6:00 入院。
入院查体:一般情况良好 ,心肺听诊无阳性体征。骨盆测
量在正常范围。取膀胱截石位, 见孕妇外阴有大量胎粪 ,阴道
口处见紫蓝色脐带及胎儿左足, 脐带血管有搏动 ,宫口开大 9
cm ,急行胎心监护, 提示胎心波动在 120～ 160 次/min。辅助
检查:2010 年 3 月 9 日 B 超胎儿臀位 , 胎头双顶径(BPD)
8.4 cm ,胎儿股骨长径(FL)6.1 cm ,羊水 5.4 cm , 胎心搏动
可见 ,胎心率 137 次/ min , 脊柱齐整 , 胎盘位于子宫前壁 , Ⅱ
级。诊断:①宫内妊娠 40 周临产;②臀位左足 、脐带先露;
③早破水;④显性脐带脱垂。
因胎心波动在 120 ～ 160 次/ min , 有抢救新生儿的机
会 ,因此立即在产房进行剖宫产手术。 首先对暴露在阴道
口的脐带和先露进行严格消毒 ,将先露还纳 , 采取蛛网膜下
腔麻醉 ,在 3 min 之内开腹 , 将胎儿娩出 ,经初步复苏 , 新生
儿皮肤红润 ,心跳 、呼吸均在正常范围 , Apgar 评分一评 10
分。救治成功 ,患者与新生儿均安全返回病房。术后应用
抗生素 、缩宫素等对症治疗 。 5 d 后患者腹部伤口拆线 , 愈
合良好。新生儿一般情况良好 ,大小便均正常 , 如期出院。
讨论　脐带是胎儿获取营养和氧气的重要通道。正常
分娩时 ,胎儿头最先娩出 , 紧接着胎儿身体顺次娩出 , 最后
脐带和胎盘才相继娩出。胎儿最先露出的部位未能与骨盆
入口处衔接或是衔接得不好 ,就会出现空隙。胎膜破裂时 ,
脐带可随羊水从这个空隙先于胎盘而露脱出;胎位不正时 ,
如胎儿的双脚在下 , 当一只脚滑出时 ,脐带通常也跟着滑落
到子宫颈口外;羊水过多 、脐带的附着处接近子宫颈口 , 脐
带从空隙脱出子宫颈口或阴道口外 , 这些情况都称为脐带
脱垂。
发生脐带脱垂时 , 脐带往往被压于胎儿最先露出的部
分和骨盆壁之间 , 脐带的血液循环因此受到阻碍 , 此时胎儿
的心跳减慢并且变得不规律 ,连续<100 次/min , 胎儿监护
仪也会显示胎儿在子宫内缺氧现象。 3 min 内胎儿即可由
于缺血缺氧而发生宫内窘迫 , 甚至死亡 ,因此脐带脱垂是分
娩时威胁胎儿生命的危险状况。
应急处理的办法:①一旦发现脐带脱垂 , 应立即让产妇
采取头低脚高平卧姿态 , 把婴儿先露还纳 ,避免脐带受压;
②尽快结束分娩。如宫口开全 ,必须把脐带还纳至先露之
上;还纳顺利 ,可尝试经阴道分娩;如果无法还纳 , 必须在 8
min内完成剖腹 , 结束分娩。与此同时 , 需要做好新生儿窒
息复苏准备。并且应提前与患者及家属沟通 , 做好新生儿
有可能窒息死亡的心理准备。
预防办法:孕期要定期进行产检 , 掌握孕期保健的知
识 , 尽量避免胎膜早破。对于分娩开始时胎儿最先露出的
部分还未入盆 、胎位不正常及羊水过多的产妇 , 一定要求产
妇静卧床上 , 尽量减少活动 ,以免引起胎膜早破。一旦出现
胎膜早破 , 要立即入院救治。
(收稿日期:2010-09-23)
作者简介:尹雅莉 , 女 , 1973 年 12 月生 , 主治医师 , 中国辐
射防护研究院附属医院 , 030006
·1129·山西医药杂志 2010年 12月第 39卷第 12期上半月　Sh an xi Med J , December 2010 , Vol.39 , No.12 th e Fi rst