全 文 ：书［收稿日期］ 20130321(017)
［基金项目］ 国家自然科学基金项目(81173515) ;江苏高校优势学科建设工程项目;南京中医药大学中药学一级学科开放课题
(2011ZYX1-003)
［第一作者］ 雷玲玲，在读硕士，从事中药化学研究，Tel:15895897365，E-mail:leixling_1988@ 163. com
［通讯作者］ * 梁侨丽，副教授，从事中药化学研究，Tel:025-85811512，E-mail:liangqiaoli2008@ 163. com
·工艺与制剂·
荆三棱中有效成分的提取工艺优选
雷玲玲，梁侨丽* ，邹娜姝，李军，崔晓东
( 南京中医药大学药学院，南京 210046)
［摘要］ 目的:优选荆三棱中三棱内酯 B和三棱双苯内酯的提取工艺。方法:采用 HPLC测定三棱内酯 B和三棱双苯内
酯含量，色谱条件为汉邦色谱柱(4. 6 mm × 250 mm，5 μm) ，流动相甲醇-1%冰醋酸(65∶ 35) ，流速 1. 0 mL·min －1，柱温 30 ℃，
检测波长 385 nm，进样量 10 μL。以三棱内酯 B和三棱双苯内酯提取量为指标，通过正交试验考察乙醇体积分数、乙醇用量、
提取时间及提取次数对提取工艺的影响。结果:各因素对三棱内酯 B 提取量的影响顺序依次为提取次数 ＞乙醇体积分数 ＞
乙醇用量 ＞提取时间，各因素对三棱双苯内酯提取量的影响大小依次为乙醇体积分数 ＞提取次数 ＞提取时间 ＞乙醇用量。
优选的提取工艺为加 10 倍量 70%乙醇水浴加热 2 次，每次 1. 5 h，三棱内酯 B、三棱双苯内酯平均提取量分别为 13. 95，5. 95
μg·g －1。结论:优选的工艺稳定可行，提取效率高;建立的 HPLC测定方法灵敏、准确、重复性好。
［关键词］ 荆三棱;提取工艺;三棱内酯 B;三棱双苯内酯;含量测定;方差分析
［中图分类号］ Ｒ283. 6;Ｒ284. 2 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2013)20-0001-03
［doi］ 10． 11653 /syfj2013200001
Optimization of Extraction Technology of
Active Components from Scirpus yagara
LEI Ling-ling，LIANG Qiao-li* ，ZOU Nuo-shu，LI Jun，CUI Xiao-dong
(School of Pharmacy，Nanjing University of Chinese Medicine，Nanjing 210046，China)
［Abstract］ Objective:To optimize extracting technology of sparstolonin B and sanleng diphenyllactone
from Scirpus yagara． Method:Contents of sparstolonin B and sanleng diphenyllactone were determined by HPLC，
chromatographic conditions were as follows:Hanbang column (4. 6 mm × 250 mm，5 μm) ，mobile phase of
methanol-1% acetic acid (65∶ 35) ，flow rate 1. 0 mL·min －1，column temperature 30 ℃，detection wavelength
385 nm，injection volume 10 μL． With extracting amounts of sparstolonin B and sanleng diphenyllactone as
indexes，orthogonal test was adopted to investigate effects of the concentration and dosage of enthanol，extraction
time，extraction times on technology． Ｒesult:Order of effects of each factors on yield of sparstolonin B was
extraction times ＞ ethanol concentration ＞ ethanol consumption ＞ extraction time，but effects of each factor on yield
of sanleng diphenyllactone was in order of ethanol concentration ＞ extraction times ＞ extraction time ＞ ethanol
consumption． Optimum extraction technology was as following:reflux extracted 2 times with 10 times the amount
of 70% ethanol，1. 5 h per time;Average extracting amounts of sparstolonin B and sanleng diphenyllactone were
13. 95，5. 95 μg·g －1，respectively． Conclusion:Optimized extraction technology was stable and feasible with
high extraction efficiency;This established determination method was sensitive，accurate and reproducible．
［Key words］ Scirpus yagara;extraction technology;sparstolonin B;sanleng diphenyllactone;content
determination;analysis of variance
·1·
第 19 卷第 20 期
2013 年 10 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 19，No． 20
Oct．，2013
荆三棱味苦、性平，具有破血行气、消积止痛的
功效，用于治疗癥瘕痞块、瘀血经闭、食积胀痛［1-2］，
主要成分为黄酮类、三萜类和茋类等［2-4］。前期试
验已从荆三棱中分离出了三棱双苯内酯和三棱内酯
B，其中三棱双苯内酯为首次从藨草属植物中分离
到［5］，三棱内酯 B 为新化合物［6］，均属天然异香豆
素类成分。研究发现三棱内酯 B 具有良好的抗炎
活性，是一个选择性的 Toll 样受体(TLＲ)2 和 4 的
拮抗剂［6］，能显著下调由 LPS (TLＲ4 配体)、
Pam3CSK4(TLＲ1 /2 配体)和 FSL-1(TLＲ2 /6 配体)
刺激的巨噬细胞炎性因子的 mＲNA 表达，但对 Poly
(I:C) (TLＲ3 配体)和 ODN1668(TLＲ9 配体)刺激
无影响;同时能明显降低 LPS，Pam3CSK4，FSL-1 诱
导的巨噬细胞 Erk1 /2，p38a，JNK，IkBα 信号蛋白的
磷酸化水平;能阻断 MyD88 与 TLＲ2，TLＲ4 的结合，
但不影响 MyD88 与 TLＲ9 的结合，其炎性信号传递
是通过 MyD88 依赖途径［7］。目前，荆三棱中有效成
分的提取方法研究较少，本实验采用正交设计优选
荆三棱中三棱内酯 B 和三棱双苯内酯的提取工艺，
利用 HPLC同时测定 2 种有效成分的含量，为荆三
棱资源的充分利用提供理论依据。
1 材料
515 型高效液相色谱仪(美国 Wasters 公司) ，
AG285 型电子分析天平(瑞士梅特勒-托利多公
司) ，H-HS型电热恒温水浴锅(巩义市英裕予华仪
器厂)。三棱内酯 B、三棱双苯内酯对照品(自制，
经 HPLC测定纯度均 ＞ 98%) ，甲醇为色谱纯，水为
娃哈哈纯净水，其他试剂均为分析纯。荆三棱于
2010 年 11 月采自江苏兴化，经南京中医药大学吴
启南教授鉴定为莎草科植物荆三棱 Scirpus yagara
Ohwi-S． fluviatilis (Torr．) A． Gray var． yagara
(Ohwi)T． Koyama．的块茎。
2 方法与结果
2. 1 提取工艺设计 在预试验基础上，选取乙醇体
积分数、提取时间、乙醇用量、提取次数为考察因素，
称取药材粉末(过 5 号筛)10 g，共 9 份，按 L9(3
4)正
交表进行试验，加乙醇水浴回流提取，过滤，合并滤
液，减压回收溶剂至干，置 10 mL 量瓶中，加甲醇定
容，以三棱内酯 B 和三棱双苯内酯含量为考察指
标，因素水平见表 1。
2. 2 有效成分的含量测定
2. 2. 1 色谱条件 汉邦色谱柱(4. 6 mm ×250 mm，
5 μm) ，流动相甲醇-1% 冰醋酸(65 ∶ 35) ，流速
1. 0 mL·min －1，柱温 30 ℃，检测波长 385 nm，进样
表 1 荆三棱中三棱内酯 B和三棱双苯内酯
提取工艺正交试验因素水平
水平
A乙醇体积
分数 /%
B提取时间
/h
C乙醇用量
/倍
D提取数
/次
1 70 1. 5 8 1
2 80 2. 0 10 2
3 90 2. 5 12 3
量 10 μL，见图 1。
A．混合对照品;B．供试品;1. 三棱内酯 B;2. 三棱双苯内酯
图 1 荆三棱 HPLC
2. 2. 2 对照品溶液的配制 精密称取一定量三棱内
酯 B和三棱双苯内酯对照品，置 10 mL 棕色量瓶中，
用甲醇定容，得质量浓度依次为 49. 0，51. 0 mg·L －1的
混合对照品储备液。
2. 2. 3 线性关系考察 精密量取混合对照品储备
液 5. 0 mL置 10 mL 量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇
匀，依次稀释，得 5 个不同质量浓度的混合对照品溶
液，进样，以峰面积为纵坐标，质量浓度为横坐标，得
回归方程 Y三棱内酯B =17 888X + 2 643. 3(r = 1. 000 0) ，
Y三棱双苯内酯 = 22 293X － 1 708. 6(r = 0. 999 8) ，线性范
围分别为 3. 1 ～ 49. 0，3. 2 ～ 50. 0 mg·L －1。
2. 2. 4 精密度试验 取混合对照品溶液适量，连续
进样 5 次，结果峰面积的 ＲSD 0. 22%，表明仪器精
密度良好。
2. 2. 5 重复性试验 取正交试验 2 号样品溶液 6
份，按 2. 2. 1 项下方法测定，测得峰面积的 ＲSD
1. 46%，表明该方法重复性良好。
2. 2. 6 稳定性试验 取正交试验 2 号样品溶液，每
隔 40 min按 2. 2. 1 项下方法进样 1 次，共 6 次，结果
峰面积的 ＲSD 1. 52%，供试品溶液在 4 h内稳定。
2. 2. 7 加样回收率试验 精密量取已知含量的正
交试验 2 号样品溶液 6 份，分别精密加入三棱内酯
B对照品溶液(50. 0 mg·L －1)0. 30 mL 和三棱双苯
内酯对照品溶液(50. 0 mg·L －1)0. 16 mL，制备供试
品溶液，测定峰面积，结果平均加样回收率分别为
112. 83%，99. 91%，ＲSD分别为 0. 83%，0. 25%。
2. 3 正交试验分析 试验安排及结果见表 2，方差
分析见表 3，4。
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第 19 卷第 20 期
2013 年 10 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 19，No． 20
Oct．，2013
表 2 荆三棱中三棱内酯 B和
三棱双苯内酯提取工艺正交试验安排
No． A B C D
三棱内酯 B
提取量
/μg·g － 1
三棱双苯
内酯提取量
/μg·g － 1
1 1 1 1 1 1. 12 6. 06
2 1 2 2 2 15. 27 7. 89
3 1 3 3 3 12. 07 4. 36
4 2 1 2 3 13. 12 5. 23
5 2 2 3 1 9. 37 3. 94
6 2 3 1 2 15. 24 5. 06
7 3 1 3 2 11. 85 4. 12
8 3 2 1 3 8. 01 2. 51
9 3 3 2 1 5. 45 1. 62
三棱
内酯 B
K1 28. 46 26. 09 24. 37 15. 94
K2 37. 73 32. 65 33. 84 42. 09
K3 25. 31 32. 76 33. 29 33. 20
Ｒ 12. 42 6. 67 9. 47 25. 85
三棱双
苯内酯
K1 18. 31 15. 41 13. 63 11. 62
K2 14. 23 14. 34 14. 74 17. 07
K3 8. 25 11. 04 12. 42 12. 10
Ｒ 10. 06 4. 37 2. 32 5. 45
表 3 三棱内酯 B方差分析
方差来源 SS f MS F P
A 27. 790 2 13. 895 2. 857 ＞ 0. 05
B(误差) 9. 726 2 4. 863 1. 000
C 18. 839 2 9. 419 1. 937 ＞ 0. 05
D 112. 381 2 56. 190 11. 555 ＜ 0. 01
注:F0. 01(2，2)= 9. 00。
表 4 三棱双苯内酯方差分析
方差来源 SS f MS F P
A 17. 068 2 8. 534 38. 013 ＜ 0. 05
B 3. 459 2 1. 730 3. 852 ＞ 0. 05
C(误差) 0. 898 2 0. 449 1. 000
D 6. 07 2 3. 035 6. 759 ＞ 0. 05
注:F0. 05(2，2)= 19. 00。
由直观分析可知，各因素对三棱内酯 B 提取量
的影响顺序依次为提取次数 ＞乙醇体积分数 ＞乙醇
用量 ＞提取时间，以极值最小的 B 因素为误差项进
行方差分析，表明 D 因素具有极显著影响，因素 A，
C则无显著影响，优化的提取工艺为 A2B3C2D2;各
因素对三棱双苯内酯提取量的影响大小依次为乙醇
体积分数 ＞提取次数 ＞提取时间 ＞乙醇用量，以极
值最小的 C因素为误差项进行方差分析，表明 A 因
素具有显著影响，因素 B，D 则无显著影响，优化的
提取工艺为 A1B1C2D2;综合生产成本和化合物性质
考虑，确定提取工艺为加 10 倍量 70%乙醇加热提
取 2 次，每次 1. 5 h。
2. 4 验证试验 精密称取荆三棱药材粉末 100 g，
共 3 份，按优化的工艺条件进行提取，进行 3 次验证
试验，结果三棱内酯 B 提取量分别为 13. 85，14. 07，
13. 94 μg·g －1，三棱双苯内酯提取量分别为 5. 78，
5. 95，6. 12 μg·g －1，表明优选的工艺稳定可行。
3 讨论
荆三棱临床多用于慢性炎症疾病［8］，三棱内酯
B和三棱双苯内酯为荆三棱的抗炎有效成分，这 2
种成分均为异香豆素类成分，易溶于乙酸乙酯、乙醇
等有机溶剂。香豆素类成分多选用醇提法从植物中
提取，但考虑到内酯环结构长时间受热可能会被破
坏，结合二者理化性质，最终选取乙醇用量、乙醇体
积分数、提取时间和提取次数为考察因素。
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［责任编辑 仝燕］
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雷玲玲，等:荆三棱中有效成分的提取工艺优选