全 文 ：·贮藏保鲜加工· 北方园艺２０１３（０５）：１４４～１４６
第一作者简介：李文茂（１９８８－），男，青海民和人，硕士，研究方向为
生物无机化学。
责任作者：石玉平（１９５６－），女，教授，研究方向为分析化学。
Ｅ－ｍａｉｌ：Ｗａｎｇｙｎ－５１＠２６３．ｎｅｔ．
收稿日期：２０１２－１１－１２
藏药绿萝花中总黄酮含量的提取工艺研究
李 文 茂，石 玉 平，刘 春 缨，韩 世 芬，王 永 宁
（青海师范大学 化学系，青海 西宁８１００００）
摘 要：以藏药绿萝花为试材，以乙醇为提取剂，采用回流提取法，按正交实验设计，研究了
绿萝花中总黄酮提取的最佳工艺。结果表明：影响绿萝花中总黄酮提取的因素大小依次为：料液
比＞提取时间＞乙醇浓度，最优的提取工艺是料液比为１∶１２，提取时间９０ｍｉｎ，乙醇浓度７５％，
绿萝花中总黄酮含量达０．９７６％。
关键词：绿萝花；总黄酮含量；最佳工艺
中图分类号：Ｓ ５６７．２３＋９ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００１－０００９（２０１３）０５－０１４４－０３
藏药绿萝花（Ｓｃｉｎｄｅｐｕｓ ａｕｒｅｕｓ）属天南星科（Ａｒａ－
ｃｅａｓｅ）绿萝属多年生常绿藤本植物，别名马蹄金、黄金
葛、石柑子，是青藏高原寒冷地带特有的植物。性微寒，
具有浓烈的香气。西藏绿萝花对糖尿病、高血压、冠心
病、血管炎症等疾病有治疗作用。竺琴等［１］研究发现，
绿萝花的乙醇提取物不仅对α?葡萄糖苷酶的活性有较
强的抑制作用，而且其自由基清除功能也较强，使其在
降低血糖和抗氧化的应用方面有较高的开发利用价值。
黄酮类物质是绿萝花中重要有效成分，以黄酮为母核而
衍生的黄酮类化合物广泛存在于花草、水果、蔬菜等绿
色天然植物中，天然黄酮具有多种生物活性和药理作
用，在医药工业方面，可作为消炎、抗菌、抗病毒和健胃
消食类药物的主要成分；黄酮类化合物具有抗氧化、抗
衰老、降血脂、抗肿瘤等生物功效，又由于它来自天然
植物，毒性低，相对安全，所以被广泛用作食品添加剂，
如食品抗氧保鲜剂、天然色素、天然甜味剂等［２－５］。目前
黄酮类化合物的提取技术主要有超声波辅助溶剂提取
法、微波辅助溶剂提取法、固相萃取法、解析－热提取法
等［６］。植物中黄酮类化合物含量的测定方法有紫外分
光光度法、荧光光度法和高效液相色谱法等，这些方法
均需昂贵仪器设备。因此该试验采用准确性高、操作快
速简便的乙醇回流提取法对绿萝花中的总黄酮的提取
条件进行优化研究，并采用分光光度法对绿萝花中黄酮
类物质进行测定，以期为绿萝花总黄酮含量的提取提供
参考依据。
１ 材料与方法
１．１ 试验材料
供试绿萝花产自西藏自治区；芦丁（中国药品生物
制品鉴定所），亚硝酸钠、硝酸铝（均为分析纯，北京化工
厂）；氢氧化钠、乙醇、石油醚（均为分析纯，天津市富宇精
细化工有限公司）。试验仪器：７２２Ｓ分光光度计（上海精
密科学仪器有限公司）；ＲＥ－５２Ａ型旋转蒸发仪（上海亚
荣生化仪器厂产品）；７６－１Ａ型恒温水浴锅（上海比朗仪
Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ Ｓａｌｉｃｙｌｉｃ Ａｃｉｄ ｏｎ ｔｈｅ Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ ｏｆ Ｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｉｎ
Ｃｕｔ Ｆｌｏｗｅｒ ｏｆ ＤｉａｎｔｈｕｓｃａｒｙｏｐｈｙｌｕｓＳｅｎｅｓｃｅｎｃｅ
ＪＩ Ｙｕｅ１，ＪＩＡＮＧ Ｊｕａｎ２
（１．Ｃｏｌｅｇｅ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｈｅｎａｎ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ，Ｈｅｎａｎ ４５０００２；２．Ｃｏｌｅｇｅ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｈｕｂｅｉ Ｎｏｒｍａｌ Ｃｏｌｅｇｅ，
Ｈｕａｎｇｓｈｉ，Ｈｕｂｅｉ ４３５００２）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔａｋｉｎｇ ｒｅｄ Ｄｉａｎｔｈｕｓ ｃａｒｙｏｐｈｙｌｕｓ ａｓ ｍａｔｅｒｉａｌｓ，ｔｈｅ ｅｆｅｃｔｓ ｏｆ ｓａｌｉｃｙｌｉｃ ａｃｉｄ ｏｎ ｔｈｅ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ ｏｆ Ｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｉｎ
ｃａｒｎａｔｉｏｎ ｓｅｎｅｓｃｅｎｃｅ ｉｎ ｖａｓｅ－ｌｉｆｅ ｗｅｒｅ ｓｔｕｄｉｅｄ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ＳＡ ｃｏｕｌｄ ｐｒｏｍｏｔｅ ｉｓｏｃｉｔｒａｔｅ ｌｙａｓｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｎｄ ｔｈｅ
ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ｓｏｌｕｂｌｅ ｓｕｇａｒ ａｎｄ ｇｌｕｃｏｎｅｏｇｅｎｅｓｉｓ，ｐｒｏｍｏｔｅｄ ｔｈｅ ｇｌｙｃｏｌａｔｅ ｏｘｉｄａｓｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ａｎｄ ｏｘｉｄａｎｔｓ ｏｆ ｃｅｌ．
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｄｉａｎｔｈｕｓ ｃａｒｙｏｐｈｙｌｕｓ；ｓｅｎｅｓｃｅｎｃｅ；ｓａｌｉｃｙｌｉｃ ａｃｉｄ
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北方园艺２０１３（０５）：１４４～１４６ ·贮藏保鲜加工·
器有限公司产品）；ＦＷ１３５型高速中药粉碎机（上海岩征
生物科技有限公司）。
１．２ 试验方法
１．２．１ 绿萝花的预处理 准确称取用ＦＷ１３５型中药粉
碎机粉碎、过６０目筛、自然干燥后的绿萝花粉末１５ｇ，置
于圆底烧瓶中，加人石油醚１３０ｍＬ，加热回流３０ｍｉｎ，旋
转蒸发仪回收石油醚［７］，残留的石油醚在６５℃恒温水浴
锅中挥干，即得绿萝花预处理物。
１．２．２ 乙醇回流提取法的正交设计 以总黄酮百分含
量为指标，采用乙醇回流提取法，设计正交实验。考察
料液比、乙醇浓度、提取时间３因素，取３水平，设计正交
实验Ｌ９（３３），优化最佳提取工艺条件，因素水平设计见
表１。
表１ 正交实验设计因素与水平
Ｔａｂｌｅ １ Ｆａｃｔｏｒｓ ａｎｄ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ
水平 因素Ｆａｃｔｏｒｓ
Ｌｅｖｅｌｓ Ａ料液比／ｇ·ｍＬ－１ Ｂ乙醇浓度／％ Ｃ提取时间／ｍｉｎ
１ １∶８ ７５ ９０
２ １∶１０ ８５ １２０
３ １∶１２ ９５ １５０
１．２．３ 芦丁标准溶液的制备 精确称取在１２０℃干燥
至恒质量的芦丁２５．０ｍｇ，用体积分数为６０％的乙醇溶
液溶解，定容至２５０ｍＬ容量瓶中，摇匀，得质量浓度为
１００ｍｇ／Ｌ的芦丁标准溶液。
１．２．４ 显色方法及最大吸收峰的确定 采用亚硝酸钠、
硫酸铝、氢氧化钠显色体系进行显色分析。分别准确吸
取不同量的芦丁标准溶液，置于２５ｍＬ的容量瓶中，用
体积分数为６０％的乙醇稀释至１２．５ｍＬ；加入０．７ｍＬ
质量分数为５％的亚硝酸钠溶液并摇匀，放置５ｍｉｎ后，
加入０．７ｍＬ质量分数为１０％的硫酸铝溶液并摇匀，放
置６ｍｉｎ后，再加入５ｍＬ浓度为１．０ｍｏｌ／Ｌ的氢氧化钠
溶液并混匀，用体积分数６０％的乙醇溶液定容至刻度，
放置１０ｍｉｎ后，在２００～６００ｎｍ波长范围内进行光谱
扫描。
１．２．５ 标准曲线的绘制和回归方程的建立 分别精密
吸取芦丁标准溶液１．０、２．０、４．０、６．０、８．０、１０．０ｍＬ，分别
置于２５ｍＬ容量瓶中，按１．２．４显色方法显色，以试剂空
白为参比溶液，用紫外可见分光光度计在波长５１０ｎｍ处
测定芦丁标准系列的吸光度（Ａ）值［８］。
１．２．６ 绿萝花中黄酮的提取 准确称取质量为１５ｇ的
绿萝花粉末，按照１．２．１方法预处理，再按照１．２．２的正
交设计添加提取剂，在７０℃的恒温水浴锅中回流提取２ｈ，
趁热抽滤，回流提取２次，合并滤液，即得绿萝花总黄酮
提取液，避光保存。
１．２．７ 绿萝花中总黄酮含量的测定 精密吸取２．０ｍＬ
绿萝花总黄酮提取液，置于２５ｍＬ容量瓶中，按１．２．４
的方法显色，以试剂空白作参比溶液，在波长５１０ｎｍ处
测吸光度Ａ，计算总黄酮百分含量。
２ 结果与分析
２．１ 最大吸收峰
光谱扫描结果表明，在５１０ｎｍ处有最大吸收峰。
２．２ 标准曲线及回归方程
以吸光度Ａ为纵坐标，芦丁溶液浓度Ｃ为横坐标，
得标准曲线，进行回归分析，建立回归方程（图１）。图ｌ
结果表明，其线性回归方程为：ｙ＝０．０８９ｘ－０．０７７３（Ｒ＝
０．９９５６），其中ｘ为芦丁溶液的浓度，ｙ为吸光度值。说
明吸光度值与相应的芦丁溶液浓度呈良好的线性相关。
图１ 浓度与吸光度标准曲线
Ｆｉｇ．１ Ｓｔａｎｄａｒｄ ｃｕｒｖｅ ｏｆ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ａｂｓｏｒｂａｎｃｅ
表２ 标准系列溶液的吸光度
Ｔａｂｌｅ ２ Ａｂｓｏｒｂｅｎｃｙ ｏｆ ｓｔａｎｄａｒｄ ｓｅｒｉｅｓ ｓｏｌｕｔｉｏｎ
芦丁溶液浓度／ｍｇ·Ｌ－１ ４ ８ １６ ２４ ３２ ４０
吸光度（Ａ） ０．０３１ ０．０９１ ０．１６９ ０．２７３ ０．３８５ ０．４５７
２．３ 正交实验最佳提取条件
Ｉ１中，２．７４５＝０．８９４＋０．９１５＋０．９３６，２．７６４＝０．８９４＋
０．９２０＋０．９５０，２．８１３＝０．８９４＋０．９６１＋０．９５８。Ｉ１／ｋ中，
０．９１５＝２．７４５／３，０．９２１＝２．７６４／３，０．９３８＝２．８１３／３。
表３ 正交实验结果
Ｔａｂｌｅ ３ Ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ
因素
料液比／ｇ·ｍＬ－１ 乙醇浓度／％ 提取时间／ｍｉｎ 总黄酮含量／％
１ １∶８ ７５ ９０ ０．８９４
２ １∶８ ８５ １２０ ０．９１５
３ １∶８ ９５ １５０ ０．９３６
４ １∶１０ ７５ １２０ ０．９２０
５ １∶１０ ８５ １５０ ０．９３９
６ １∶１０ ９５ ９０ ０．９６１
７ １∶１２ ７５ １５０ ０．９５０
８ １∶１２ ８５ ９０ ０．９５８
９ １∶１２ ９５ １２０ ０．９７６
Ｉ１ ２．７４５ ２．７６４ ２．８１３
Ｉ２ ２．８２０ ２．８１２ ２．８１１ ｙ＝８．４４９
Ｉ３ ２．８８４ ２．８７３ ２．８２５ ｙ／ｎ＝０．９３９
Ｋ ３ ３ ３
Ｉ１／ｋ ０．９１５ ０．９２１ ０．９３８
Ｉ２／ｋ ０．９４０ ０．９３７ ０．９３７
Ｉ３／ｋ ０．９６１ ０．９５８ ０．９４２
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·贮藏保鲜加工· 北方园艺２０１３（０５）：１４４～１４６
由表４可知，０．０４６＞０．０３７＞０．００５，即影响绿萝花
中总黄酮提取的因素大小是：料液比＞乙醇浓度＞提取
时间，最优的提取工艺是料液比为１∶１２，提取时间
１２０ｍｉｎ，乙醇浓度９５％。
表４ 正交实验极差分析
Ｔａｂｌｅ ４ Ｒｅｓｕｌｔｓ ｂｙ ａｎａｌｙｔｉｃａｌ ａｐｐｒｏａｃｈ（ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ａｎｇｅ）ｏｆ
ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｔｈｅｏｒｙ
序号
因素
料液比 乙醇浓度 提取时间
１ －０．０２４ －０．０１８ －０．００１
２ ０．００１ －０．００２ －０．００２
３ ０．０２２ ０．０１９ ０．００３
Ｔ ０．０４６ ０．０３７ ０．００５
２．４ 方法稳定性试验
准确吸取２．０ｍＬ绿萝花总黄酮提取液，置于２５ｍＬ
的容量瓶中，按１．２．４方法显色，并每隔１．０ｍｉｎ测１次
吸光度，设定时间为１００ｍｉｎ。结果表明，显色反应结束
１０ｍｉｎ后，在室温不大于２５℃的环境中，提取溶液的吸
光度值保持稳定，故该试验的稳定性能够满足正常的试
验研究。
２．５ 方法精密度试验
准确吸取５．０ｍＬ芦丁标准溶液和绿萝花总黄酮提
取液各６份，分别置于２５ｍＬ的容量瓶中，按１．２．４方法
显色，以试剂空白作参比溶液，在波长５１０ｎｍ处测定吸
光度。精密度试验结果显示，芦丁标准溶液，ＲＳＤ＝
０．９％；绿萝花总黄酮提取液，ＲＳＤ＝１．１％。结果表明，
该试验方法有较好的重复性，能满足正常测定精度的
要求。
２．６ 回收率试验
准确吸取２．０ｍＬ已知总黄酮含量的绿萝花总黄酮
提取液各５份，置于２５ｍＬ的容量瓶中，作为底液，再分
别准确加入１．０、２．０、３．０、４．０、５．０ｍＬ芦丁标准溶液，按
１．２．４方法显色，然后以试剂空白作参比溶液，在波长
５１０ｎｍ处测定吸光度，计算回收率。结果表明，平均回
收率为１０１．２４％。
２．７ 剔除干扰物质的方法
在用乙醇作提取剂，回流提取前先用石油醚回流提
取可以有效的剔除绿萝花中脂溶性色素及其它组分对
比色测定的干扰。
３ 结论与讨论
该试验结果表明，影响绿萝花中总黄酮提取的因素
大小是：料液比＞提取时间＞乙醇浓度，最优的提取工
艺是料液比为１∶１２，提取时间９０ｍｉｎ，乙醇浓度７５％。
绿萝花中总黄酮含量达０．９７６％。以乙醇为提取剂回流
提取绿萝花中的总黄酮并用分光光度法测定吸光度值
来测定总黄酮含量，其准确性、重复性、线性关系和回收
率均能满足科研和生产的要求，而且操作快速简便，可
用于对实际样品中黄酮类化合物的分析。
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Ｓｔｕｄｙ ｏｎ Ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ Ｐｒｏｃｅｓｓ ｏｆ Ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｆｒｏｍ
Ｓｃｉｎｄａｐｓｕｓ ａｕｒｅｕｓ（Ｌｉｎｄｅｎ ｅｘ Ａｎｄｒｅ）Ｅｎｇｌ
ＬＩ Ｗｅｎ－ｍａｏ，ＳＨＩ Ｙｕ－ｐｉｎｇ，ＬＩＵ Ｃｈｕｎ－ｙｉｎｇ，ＨＡＮ Ｓｈｉ－ｆｅｎ，ＷＡＮＧ Ｙｏｎｇ－ｎｉｎｇ
（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｑｉｎｇｈａｉ Ｎｏｒｍａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｘｉｎｉｎｇ，Ｑｉｎｇｈａｉ ８１００００）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔａｋｉｎｇ Ｓｃｉｎｄａｐｓｕｓ ａｕｒｅｕｓ （Ｌｉｎｄｅｎ ｅｘ Ａｎｄｒｅ）Ｅｎｇｌ ａｓ ｍａｔｅｒｉａｌ ａｎｄ ｅｔｈａｎｏｌ ａｓ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ａｇｅｎｔ，ｔｈｅ ｂｅｓｔ
ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ ｐｒｏｃｅｓｓ ｏｆ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｆｒｏｍＳｃｉｎｄａｐｓｕｓ ａｕｒｅｕｓ（Ｌｉｎｄｅｎ ｅｘ Ａｎｄｒｅ）Ｅｎｇｌ ｗｅｒｅ ｓｔｕｄｉｅｄ ｂｙ ｅｔｈａｎｏｌ ｒｅｆｌｕｘｉｎｇ
ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｐｏｗｅｒ ｏｆ ｔｈｅ ｔｈｒｅｅ ｆａｃｔｏｒｓ ｉｎｆｌｕｅｎｃｉｎｇ ｔｈｅ
ｆｌａｖｏｎｏｉｄ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｆｒｏｍＳｃｉｎｄｅｐｕｓ ａｕｒｅｕｓ ｗｅｒｅ ｌｉｑｕｉｄ－ｓｏｌｉｄ ｒａｔｉｏ，ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｉｍｅ，ｅｔｈａｎｏｌ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ．Ｉｎ ｔｈｅ ｏｐｔｉｍａｌ
ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｐｒｏｃｅｓｓ，ｔｈｅ ｌｉｑｕｉｄ－ｓｏｌｉｄ ｒａｔｉｏ ｗａｓ １∶１２，ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｉｍｅ ｗａｓ ９０ｍｉｎ ａｎｄ ｅｔｈａｎｏｌ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｗａｓ ７５％．Ｕｎｄｅｒ
ｔｈｅｓｅ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ，ｔｈｅ ｆｌａｖｏｎｏｉｄ ｃｏｎｔｅｎｔ ｉｎ Ｓｃｉｎｄｅｐｕｓ ａｕｒｅｕｓ ｃｏｕｌｄ ｒｅａｃｈ ０．９７６％．
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｓｃｉｎｄａｐｓｕｓ ａｕｒｅｕｓ（Ｌｉｎｄｅｎ ｅｘ Ａｎｄｒｅ）Ｅｎｇｌ；ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｃｏｎｔｅｎｔ；ｏｐｔｉｍａｌ ｐｒｏｃｅｓｓ
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