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中国民族民间医药
Chinese Journal of Ethnomedicine and Ethnopharmacy
论 著
Treatise
大孔吸附树脂精制纯化淡竹叶总黄酮的研究
刘　明　吴启南　邵 莹
南京中医药大学，江苏　南京　210046
【摘　要】：目的：研究大孔吸附树脂精制纯化淡竹叶总黄酮的工艺。方法：比较7种大孔吸附树脂对淡竹叶总黄酮的吸附和解吸性
质，筛选出合适的的树脂对其进行富集纯化。结果：D101型大孔树脂吸附率为81.58%，解吸率为78.08%。富集淡竹叶总黄酮的最优条件
为：上柱保持60min，2ml/min速度洗脱，5倍量水、5倍量15%乙醇溶液洗脱杂质、6倍量50%乙醇溶液洗脱总黄酮。总黄酮的纯度由原来的
135.38mg/g上升至315.42mg/g。结论：D101型大孔树脂比较适合于淡竹叶总黄酮的精制纯化。
【关键词】：淡竹叶；总黄酮；大孔吸附树脂；精制纯化
【中图分类号】R285　　　　【文献标识码】A　　　　【文章编号】1007-8517 (2010) 04-019-3
淡竹叶(Herba Lophatheri)为禾本科(Gramineae)植物
淡竹叶(Lophatherum gracile Brongn.)的干燥茎叶。本品
性寒，味甘、淡，归心、胃、小肠经，有清热除烦，利尿的
功效，用于热病烦渴，小便赤涩淋痛，口舌生疮等症[1]。淡
竹叶中含有大量的黄酮、多糖、内酯、叶绿素、氨基酸、
维生素和微量元素等成分，其中黄酮类化合物具有较高的
生物活性。大孔吸附树脂是近十年来发展起来的一类有机
高分子聚合物吸附剂，其稳定性高、吸附选择性独特、不
受无机物存在的影响、再生简便、解吸条件温和、使用周
期长、成本较低。近年来被广泛用于中药成分的精制纯
化。本实验以淡竹叶乙醇提取液为对象，通过大孔树脂的
筛选实验，探索淡竹叶总黄酮纯化精制的最佳工艺。
1　仪器、试剂与材料
1.1　仪器
HH-S型水浴锅；SHZ-D(Ⅲ)循环水式真空泵；DHG-
9140A型电热恒温鼓风干燥箱；AY220型电子分析天平；旋
转蒸发仪；日本岛津UV-2401型紫外分光光度计。
1.2　材料
芦丁对照品（中国药品生物制品检定所，批号100080-
200707。淡竹叶购自浙江省磐安县新渥陈仙芬中药材购销
站，产地浙江，批号：20090308；医用酒精；其余试剂均
为分析纯。
2　方法与结果
2.1　标准曲线的绘制[2]
采用硝酸铝一亚硝酸钠比色法，以芦丁为标准品，在
507nm处测定。得芦丁浓度C(mg／mL)与吸光度A的回归方程
式：A=11.905C+0.0044，R2=0.9994。线性范围：8～48ug/ml。
2.2　供试品溶液的制备及测定
取淡竹叶约100g，石油醚脱脂，18倍量75％乙醇回流
提取1.0h[3]，减压浓缩至无醇味，加入适量蒸馏水稀释，
静置过夜，3000rpm离心，上清液置250ml量瓶中，加蒸馏
水至刻度，作为供试液备用。移取供试液0.25ml置25ml量
瓶中，按标准曲线制备项下的方法，自“各加60%乙醇溶液
使成6.0ml”起，依法测定吸光度，测得供试液中总黄酮含
量为3.6689mg/ml。移取10ml供试液置蒸发皿中水浴挥干，
恒重，测得供试液中总黄酮含量为135.3841mg/g。
2.3　树脂性能考察
2.3.1　大孔吸附树脂的预处理
以乙醇湿法上柱。用95%乙醇溶液在柱上流动清洗，
不时检出流出液至乙醇液与水混合（1:5）不呈白色混浊为
止，然后以大量蒸馏水洗去乙醇至无醇味。
2.3.2　大孔树脂静态吸附考察
取预处理的7种不同型号的树脂20ml分别置100ml量瓶
中，精密移取5ml提取液，加水稀释至50ml，时时振摇，
放置18h。滤过，滤液测定吸光度。滤渣中加入85%乙醇
50ml，时时振摇，放置18h。滤过，滤液测定吸光度。移取
50ml滤液置蒸发皿中水浴挥干，恒重。平行测定2份。按式
（1）（2）（3）计算得表1。
吸附率% =（吸附前黄酮量—吸附后黄酮量）/吸附前
黄酮量 * 100% 式（1）
解吸率% = 解析液中黄酮量/（吸附前黄酮量—吸附后
黄酮量）* 100% 式（2）
基金项目：江苏省高校高新技术产业发展项目（JHB04-039）。
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黄酮含量（%）= 黄酮量/取样量 * 100% 式（3）
表1 静态吸附时不同树脂对总黄酮的影响
型号 吸附率（%） 解吸率（%） 黄酮含量（%）
HPD-600 85.16 65.07 17.08
ADS-17 68.22 71.19 12.53
ADS-8 82.82 70.25 21.28
DM-130 82.13 71.11 21.34
AB-8 85.28 65.98 22.56
HP-20 85.11 80.79 23.00
D-101 86.88 71.82 22.87
2.3.3　大孔树脂动态吸附考察
取预处理的树脂20ml装柱（15mm*300mm），精密移取
5ml提取液上样，静置1h。用蒸馏水洗至无色，洗液测定其
吸光度。加入85%乙醇溶液洗脱至无色，洗脱液测定吸光
度。移取25ml洗脱液置蒸发皿中水浴挥干，恒重。平行测
定2份。按式（1）（2）（3）计算得表2。
表2 动态吸附时不同树脂对总黄酮的影响
型号 吸附率（%） 解吸率（%） 黄酮含量（%）
HPD-600 86.14 88.88 23.33
ADS-17 74.72 87.91 19.92
ADS-8 86.29 89.15 25.51
DM-130 85.17 74.39 18.26
AB-8 87.46 86.65 27.97
HP-20 87.49 89.40 25.67
D-101 86.14 87.47 28.16
从表2和表3可以看出HP-20和D-101型大孔吸附树脂吸
附率和解吸率均较高，从节约成本角度，故选择D-101大孔
吸附树脂进行进一步试验。
2.4　D-101型大孔树脂精制纯化淡竹叶总黄酮工艺参数考察
2.4.1　乙醇溶液洗脱杂质的体积分数梯度考察
取预处理树脂20ml装柱，精密移取2ml提取液上样，静
置1h。依次用水、10%、15%、20%、30%的乙醇溶液以2ml/
min速度洗脱。洗脱液测定吸光度，移取15ml置蒸发皿中水
浴挥干，恒重。平行测定2份。按式（3）计算得图1。
图1 低浓度乙醇梯度洗脱总黄酮含量变化
由图1可知，20%乙醇溶液洗脱液中总黄酮含量增加明
显，因此，选用15%乙醇溶液作为杂质的洗脱溶液。
2.4.2　洗脱液体积分数考察
取预处理树脂20ml装柱，精密移取2ml提取液上样，
静置1h。用蒸馏水和15%乙醇溶液洗脱杂质。分别用40%、
50%、60%、75%、95%的乙醇溶液以2ml/min速度洗脱。洗
脱液测定吸光度，精密移取40ml置蒸发皿中水浴挥干，恒
重。平行测定2份。按式（3）计算得图2。由图2可知，50%
乙醇溶液洗脱黄酮的含量最高，因此，选用50%乙醇溶液为
洗脱剂。
图2 不同浓度乙醇洗脱总黄酮含量变化
2.4.3　上柱静态吸附时间考察
取预处理树脂20ml装柱，精密移取2ml提取液上样，分
别静置15min、30min、60min、90min。用蒸馏水和15%乙醇
溶液洗脱杂质。用50%乙醇溶液洗脱，洗脱液测定吸光度。
洗脱速度均为2ml/min。精密移取25ml置蒸发皿中水浴挥
干，恒重。平行测定2份。按式（1）（2）（3）计算得表3。
由表3可知，60min处的吸附率和解吸率均较高，且其黄酮
含量也较高，综合考虑选择60min为上柱静态吸附时间。
表3 上柱静态吸附时间对总黄酮含量的影响
吸附时间
（min）
吸附率
（%）
解吸率
（%）
黄酮含量
（%）
15 85.52% 74.83% 28.91%
30 86.81% 72.39% 28.32%
60 86.66% 76.64% 30.24%
90 86.66% 74.83% 30.59%
2.4.4　洗脱液体积考察
取预处理树脂10ml装柱，精密移取4ml提取液上样，静
置60min。用蒸馏水和15%乙醇溶液洗脱杂质，50%乙醇溶液
洗脱。洗脱速度均为2ml/min。每1～2个树脂体积收集一份
洗脱液，精密移取测定吸光度。实验结果：5倍量蒸馏水，
5倍量15%乙醇溶液，6倍量50%乙醇溶液洗液中总黄酮含量
均分别接近于零。因此，可确定上述条件为最佳洗脱体积。
2.4.5　树脂重复上样次数考察
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Treatise
紫杉醇的研究进展
李桂香
云南省曲靖医学高等专科学校，云南　曲靖　655000
【摘　要】：紫杉醇具有显著的抗癌活性和独特的作用机制，它的问世被誉为20世纪90年代国际上的抗癌药三大成就之一。历经40多年
的研究与发展，在许多方面一度成为科学家研究的热点，并取得了许多可喜的成绩。本文综述了近年来对红豆杉的资源概括、抗癌机制、化
学成分、制备方法、制剂新技术等方面的新研究进展，对当前工作中存在的问题进行了探讨，并对有关研究的发展前景进行了展望。
【关键词】：紫杉醇；研究进展
【中图分类号】R285.1　　　　【文献标识码】A　　　　【文章编号】1007-8517 (2010) 04-021-3
全世界60亿人口中，每年约新增800万癌症患者，600
多万人死于癌症，几乎每6秒钟就有一名癌症患者死亡。
癌症严重地威胁着人类的生命和健康，因此寻找有效的抗
癌药物成为研究的热点。早在1958年美国癌症协会就发起
一项历时20余年、筛选35000多种植物物种提取物的计划。
在计划实施过程中，1963年美国化学家瓦尼和沃尔首次从
生长在美国西部大森林中称太平洋杉中分离到了紫杉醇的
粗提物。并发现紫杉醇粗提物对离体培养的鼠肿瘤细胞有
很高活性。由于该活性成份含量极低，直到1971年，他们
才同杜克（Duke）大学的化学教授姆克法尔合作，通过x-
射线分析确定了该活性成份的化学结构——一种四环二萜
化合物，并把它命名为紫杉醇。1992年12月紫杉醇被FDA批
准上市，目前紫杉醇已成为世界公认的强活性广谱抗癌药
物。然而由于这种天然化合物资源极其有限，严重的限制
了其研究和应用的进度。同时尖锐的供需矛盾也在医学、
化学和植物组织培养领域中引起了一场非同寻常的广泛研
究，以增加这种化合物的来源和寻找高效、低毒、来源丰
富的紫杉醇类似物。
1　植物来源及药物资源
紫杉醇是红豆杉属植物中的一种复杂的次生代谢产物，
红豆杉又称紫杉、赤柏松，是第四纪冰川时期孑遗植物，
世界珍稀濒危物种，在全世界共有11种，分布于北半球的
温带至热带地区，目前我国共有四个种和一个变种，即云
南红豆杉、西藏红豆杉、东北红豆杉、中国红豆杉和南方
红豆杉（变种）。曼地亚红豆杉是我国20世纪90年代中期
从加拿大引种而来。现在四川、广西、山东等地有栽培。
红豆杉生物学特性对生态环境要求高，生长周期长，
且红豆杉的果实有坚硬的外壳，人工育苗难以成活，提取
取预处理树脂10ml装柱，精密移取3ml提取液上样，静
置60min。用蒸馏水和15%乙醇溶液洗脱杂质，50%乙醇溶液
洗脱。洗脱速度均为2ml/min。洗脱液测定吸光度，精密移
取一定体积水浴蒸干，恒重。平行测定2份。用95%乙醇溶
液洗涤至与水1:5混合不浑浊，用蒸馏水洗至无醇味。重复
上样操作4次。4次实验结果显示：吸附率和解吸率均无明
显变化，而总黄酮含量不降反升，其中原因有待进一步实
验。说明该型号树脂重复使用率较高。
2.4.6　验证试验
取预处理树脂10ml装柱，精密移取3ml提取液上样，
静置60min。用蒸馏水和15%乙醇溶液洗脱杂质，50%乙醇溶
液洗脱。洗脱速度均为2ml/min。洗脱液吸光度，精密移取
10ml置蒸发皿中水浴挥干，恒重。平行测定2份。测得吸附
率为81.58%，解吸率为78.08%，总黄酮含量为315.42mg/g。
JKJKJKJKJKJKJKJKJKJKJKJKJKJKJKJKJKJKJKJKJKJKJKJKJKJKJKJKJKJKJKJKJKJKJKJKJKJKJKJK
3　讨论
通过大孔树脂的动态和静态吸附考察，确定D-101型大
孔吸附树脂比较适合于淡竹叶总黄酮的精制纯化。工艺条
件为：上柱保持60min，2ml/min速度洗脱，5倍量水、5倍
量15%乙醇溶液洗脱杂质、6倍量50%乙醇溶液洗脱。总黄酮
的纯度由原来的135.38mg/g上升至315.42mg/g。其结果经
验证试验确认该条件可行，可以作为工业生产的参考工艺
条件。
参考文献
[1] 江苏新医学院.中药大辞典(下册)[M].上海：上海科学技术出版社，
1977：2253-2254.
[2] 国家药典委员会.中国药典（一部）[S].北京：化学工业出版社，
2005：附录28.
[3] 宋秋烨，陈梅，吴启南.淡竹叶总黄酮提取工艺研究[A].中国中医药信
息杂志，2007，14(3)：14.