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第 28 卷第 1 期　　　　　　　　　 　　 　　　　　　　Vol. 28　No. 1
2012 年 1 月　HUNAN JOURNAL OF TRADITIONAL CHINESE MEDICINE　Jan　 2012
聚酰胺纯化淡竹叶中总黄酮的工艺研究
刘　会
（湖南省中医药研究院附属医院，湖南 长沙，410006）
关键词　淡竹叶 ; 总黄酮 ; 聚酰胺 ; 纯化工艺 ; 实验研究
　 　 中 药 淡 竹 叶 为 禾 本 科 植 物 淡 竹 叶（L o p h a t h e r u m
gracileBrongn）的干燥茎叶。资源十分丰富，全国各地都有
栽培，主产于江苏、浙江、江西、广西、湖南，福建等地，具
有清热除烦、利尿之功，多用于热病烦渴、口舌生疮、小便
赤色淋痛等症［1］。现代研究证明，淡竹叶主要含有黄酮类
成分，而淡竹叶黄酮能明显收缩腹主动脉，具有降脂、抗血
栓、抗氧化、降糖等多种生理活性［2~4］。因而有效地开发和
利用淡竹叶中黄酮类化学成分具有重要意义。对淡竹叶中
总黄酮提取和大孔吸附树脂精制纯化工艺已有报道［5~7］。
聚酰胺层析是黄酮类化合物的分离最有效的方法，通过黄
酮分子中的酚羟基与聚酰胺分子中的酰胺基因双方质子
共享而形成氢键产生吸附，从而将植物粗提物中的黄酮与
非黄酮体、黄酮体甙元与甙分开，达到提纯的终极目的。笔
者首次采用聚酰胺对淡竹叶中总黄酮进行分离纯化研究，
现介绍如下。
1　实验材料
　 　 淡 竹 叶 购 于 九 芝 堂 药 材 公 司 , 经 湖 南 省 中 医 药
研究院生药室鉴定为禾本科植物淡竹叶（Lophatherum
gracileBrongn）的干燥茎叶。芦丁标准品由中国药品生物制
品检定所提供 ；柱层析用聚酰胺（60~80 目），购自上海市第
一化学试剂有限公司 ；无水乙醇、氢氧化钠、亚硝酸钠、硝酸
铝均为分析纯。电子分析天平为 METTLER 科学仪器有限
公司生产。
2　方法与结果
2.1　总黄酮含量测定　（1）参考文献方法。主要采用亚硝
酸钠 - 硝酸铝法测定总黄酮的含量。精密称取在 120℃减
压干燥至恒重的芦丁对照品 198.8mg，置 100ml 量瓶中，加
甲醇 80ml，置水浴上微热使溶解，放冷，加甲醇稀释至刻度，
摇匀。精密吸取 10ml，置 100ml 量瓶中，加水稀释至刻度，摇
匀，即得芦丁标准溶液（0.1988mg/ml）。精密吸取芦丁标准溶
液 0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 和 6.0ml，分别置 25ml 量瓶中，各
加水至 6ml，加 5% 亚硝酸钠溶液 1ml，使之混匀，放置 6min，
加 10% 硝酸铝溶液 1ml，摇匀，放置 6min，加 5% 氢氧化钠试
液 10ml，再加水至刻度，摇匀，放置 15min，以第 1 管作为空
白对照，在 510nm 处测吸收度，以吸收度为纵坐标，浓度为
横坐标，绘制标准曲线。求得回归方程 ：A=9.1034 C-0.0206，
r=0.9992，对照品在 0.008~0.048mg/ml 呈良好线性关系。（2）
取供试品滤液水浴蒸干，甲醇溶解，过滤，用甲醇定容，作为
供试液。精密量取适量于 25ml 量瓶中，加纯化水至 6ml，加
5% 亚硝酸钠溶解 1ml，摇匀，静置 6min，再加 10% 硝酸铝溶
液 1ml，摇匀，静置 6min，加 5% 氢氧化钠溶液 10ml，加水至
刻度，摇匀，静置 15min，于 510nm 处测吸收度，按回归方程
计算各样品的总黄酮含量。
2.2　淡竹叶样品液制备［6］及总黄酮含量测定　取淡竹
叶 1000g，用 18 倍量 75% 乙醇提取 1.0h，滤过，合并滤
液，回收乙醇至无醇味，加入适量蒸馏水稀释，静置过夜，
3000rpm 离心，上清液置 250ml 量瓶中，加蒸馏水至刻度，
作为供试液备用。
2.3　上样浓度的确定　将处理好的聚酰胺，准确称取 5 份，
每份约 10.0g，装入层析柱，再精密称取 5 份上样液，样品生
药浓度分别为 0.5g/ml、1.0g/ml、1.5g/ml、2.0g/ml，上柱，以 1ml/
min 流速过柱，用 Mg 粉 -HCl 反应检查流出液，待反应呈阳
性时，停止上样，过柱液重吸附 1 次，收集流出液，并同时记
录上柱样品量，计算总黄酮比吸附量 ：比吸附量 =［（上柱液
总黄酮量 - 过柱液总黄酮量）/ 干树脂质量］×100%。其结
果见表 1。
表 1　上样浓度对比吸附量影响结果
编号 上样浓度（g/ml） 比吸附量（mg/g）
1 0.5 6.5
2 1.0 6.8
3 1.5 7.7
4 2.0 7.4
　　由表 1 可知，上样液的浓度并不是越大越好，上样液浓
度过大，可能其中的黄酮来不及被吸附，造成吸附效果不好，
当上样液浓度生药为 1.5g/ml 时，聚酰胺对总黄酮的比吸附
量最大，为 7.7mg/g，故选择该浓度为上样浓度。
2.4　吸附流速的确定　流速是柱层析分离的一个重要指
标，过高的流速将缩短分离时间，同时也使洗脱剂耗费更多 ；
过低的流速虽然可以提高分离效果，但同时也延长了分离时
间。将浓度为 1.5g/ml 的样品浓液，分别以 1ml/min、2ml/min、
3ml/min 的流速通过聚酰胺柱，用 Mg 粉 -HCl 反应检查流出
液，待反应呈阳性时，停止上样，并同时记录上柱样品量，结
果显示吸附流速越大，总黄酮流出的越早，以 3ml/min 的流
速通过聚酰胺柱，只能上样 7ml，而以 1ml/min 的流速通过聚
酰胺柱，可以上样 10ml，因此确定吸附流速 1ml/min。
2.5　洗脱剂浓度的确定　称取处理好的聚酰胺 4 份，每份
10g，湿法装柱（直径 2cm），分别精密吸取样品液 10.0ml（含
生药 1.5g/ml）上柱，用蒸馏水 50ml 洗脱后，再分别用 30% 乙
醇、50% 乙醇、70% 乙醇、95% 乙醇各 100ml（10BV）洗脱，测
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定洗脱液中总黄酮量，其结果见表 2。
表 2　不同浓度乙醇对总黄酮的洗脱效果
编号 洗脱剂浓度（%） 总黄酮量（mg）
1 30 33.2
2 50 47.8
3 70 69.5
4 95 72.1
　　由表 2 可知，乙醇浓度越高，洗脱能力越强，95% ＞ 70%
＞ 50% ＞ 30%，但 70% 乙醇与 95% 乙醇相差不大，故确定
洗脱条件为先用蒸馏水洗去水溶性杂质，再用 70% 乙醇
100ml（10BV）洗脱总黄酮。
2.6　重复验证实验　根据以上所确定淡竹叶总黄酮吸附、
纯化的工艺条件，平行做 3 次放大试验，水浴挥干，真空干
燥，得总固物，精密称取总固物质量，同时测定总固物中总黄
酮含量，结果见表 3。
表 3　聚酰胺树脂纯化淡竹叶总黄酮的测定结果
编号 总固物（g） 总黄酮量（g） 总黄酮含量（%）
1 4.314 1.5214 35.25
2 4.1421 1.5887 38.35
3 4.4643 1.5029 33.66
均值 4.3076 1.5377 35.75
　　由表 3 可知，通过对聚酰胺富集、纯化后，总固物中总黄
酮含量可达 36%。说明采用本方法可以大幅度提高提取物
中总黄酮的含量。
2.7　聚酰胺树脂重复使用次数的考察　以比吸附量为评
价指标，在上述确定的吸附、洗脱条件下，考察树脂使用次
数对黄酮类化合物吸附的影响，结果第 1 次使用后的比吸
附量为 7.8mg/g，第 2 次使用后的比吸附量为 7.5mg/g，第 3
次使用后的比吸附量为 6.8mg/g，第 4 次使用后的比吸附量
为 5.6mg/g。从其结果可以看出随着吸附次数增多，聚酰胺
树脂对黄酮类化合物的吸附量呈下降趋势。提取物中含有
70% 乙醇无法洗脱的难洗脱物，它们被吸附在聚酰胺树脂
表面，随着吸附次数的增加，难洗脱物在树脂上累积，降低
了树脂的有效吸附容量。因此，重复使用 3 次后应对树脂
进行再生。
3　结　　论
　　聚酰胺对淡竹叶中黄酮类成分具有良好的吸附性能，
其富集总黄酮的工艺为 ：上样浓度为含生药 1.5g/ml，流速为
1ml/min，聚酰胺对总黄酮的比吸附量为 7.7mg/g，先用 5BV
水洗脱杂质，再用 10BV70% 乙醇洗脱，洗脱流速为 1ml/min，
收集 70% 乙醇洗脱液，回收溶剂后，得淡竹叶总黄酮，含量
可达 36%。说明采用本方法可以用于淡竹叶中总黄酮的分
离和纯化。
参考文献
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版社，2003 ：133.
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食品研究与开发，2008，11（11）：42-45.
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[J]. 中国民族民间医药，2006，11（3）：19-21.
（收稿日期 ：2011-10-27）
川芎嗪对实验性急性胰腺炎大鼠血浆凝血和纤溶功能的影响
易治中，黄伟雄，谢志东，赵芳，凌天佑
（湖南省长沙县人民医院，湖南 长沙，410100）
关键词　急性胰腺炎 ；川芎嗪 ；组织因子 ；大鼠 ；实验研究
　　急性出血坏死性胰腺炎是一种发病机理复杂和治
疗棘手的危重急症。现已证实，胰腺凝血系统和纤溶系
统功能改变参与了急性出血坏死性胰腺炎的病理生理过
程［1］。但对启动凝血的关键因子 - 组织因子 (tissue factor ,
TF) 和组织因子途径抑制物 (tissue factor pathway inhibitor,
TFPI) 以及调节纤溶功能的组织型纤溶酶原活化物 (tissue-
type plasminogen activator, t-PA) 和纤溶酶原活化抑制
物 -1(plasminogen activator inhibitor, PAI-1) 在急性出血
坏死性胰腺炎发生中的作用研究不多。因此，本文观察
了川芎嗪 tetramethylpraizine, TMP) 对实验性急性胰腺炎
（experimental acute pancreatitis，EAP) 大鼠血浆凝血和纤溶
功能的影响，现介绍如下。
通讯作者 ：凌天佑，湖南省长沙县人民医院，邮编 ：410100，电话 ：0731-84069395