全 文 ：湖 北 农 业 科 学 2012 年
第 51卷第 16 期
2012年 8 月
湖北农业科学
Hubei Agricultural Sciences
Vol． 51 No.16
Aug．，2012
收稿日期：2011－11－23
基金项目：广西壮族自治区自然科学基金项目（2011GXNSFA018192）；广西壮族自治区科学研究与技术开发攻关项目（桂科攻 0718002－3－4）
作者简介：钟霞军（1964－），女，浙江上虞人，助理研究员，从事中医药科研管理工作，（电话）15989080037（电子信箱）luoye09g＠126．com；
通讯作者，黄荣韶（1964－），男，广西平南人，教授，博士，硕士研究生导师，主要从事药用植物资源利用与开发、植物功能成分研究
与利用、植物新品种选育的科研和教学工作，（电话）0771－3235612（电子信箱）hrshao802＠163．com。
庐山石韦 ［Pyrrosia sheareri （Bak．）Ching］和柔
软石韦 ［P． porosa （C． Presl）Hovenk］ 为水龙骨科
（Polypodiaceae）石韦属（Pyrrosia Mirbel）多年生草本
植物，主要分布于我国广西、广东、贵州、云南、四
川、浙江、江西、湖北、福建及台湾等省（自治区），多
生于山野的岩石上或树上；外形上常按叶型大小不
同，分为大叶石韦类和小叶石韦类两个类群。 庐山
石韦为大叶石韦，已被《中华人民共和国药典》收藏
为正品石韦；而柔软石韦为小叶石韦，为非中国药
典药品。 这两类石韦在临床应用上也各有侧重点，
小叶石韦主要对肾炎、尿道炎有一定的疗效 ［1－4］，而
大叶石韦则对气管炎疗效较好［5］。 石韦属植物含皂
苷、延胡索酸、咖啡酸、香草酸、蒽醌苷、黄酮类、鞣
质、β－谷甾醇和绿原酸等多种药用成分［6－12］。 目前在
庐山石韦和柔软石韦营养叶片组织化学定位研究
钟霞军 1，李雁群 2，黄荣韶 3
（1．广西中医学院中医药会展中心，南宁 530001；2．华南农业大学生命科学学院，广州 510642；
3．广西大学农学院， 南宁 530005）
摘要：利用冰冻切片法对庐山石韦和柔软石韦营养叶片中的皂苷类化合物、蒽醌类化合物及多糖物质进
行了组织化学定位研究。 结果表明，皂苷类化合物主要积累在营养叶片主脉的薄壁组织和叶片的栅栏组
织中，海绵组织、厚角组织、表皮中也有少量皂苷类化合物分布；蒽醌类化合物主要分布在营养叶片主脉
的薄壁组织以及叶肉同化组织中，在表皮和韧皮部含有少量的蒽醌类化合物，木质部无明显显色反应；
而多糖物质普遍存在于叶肉同化组织中。 从显色程度上看，庐山石韦皂苷类化合物和多糖物质含量高于
柔软石韦，而柔软石韦的蒽醌类化合物含量则高于庐山石韦。 这为石韦资源的合理利用提供了参考依据。
关键词：庐山石韦；柔软石韦；营养叶片；皂苷类化合物；蒽醌类化合物；多糖物质；组织化学定位
中图分类号：Q949．36＋7．2；Q944．56；Q946 文献标识码：A 文章编号：0439－8114（2012）16－3540-05
Histochemical Localization of Foliage Leaves of Pyrrosia sheareri and P. porosa
ZHONG Xia－jun1，LI Yan－qun2，HUANG Rong－shao3
（1． Traditional Chinese Medicine Exhibition Center， Guangxi Traditional Chinese Medical University， Nanning 530001，China；
2． College of Life Science， South China Agricultural University，Guangzhou 510642， China；
3． College of Agriculture，Guangxi University， Nanning 530005，China）
Abstract： Frozen section methods was applied to locate saponins， anthraquinones and polysaccharides in the foliage leaves of
Pyrrosia sheareri （Bak．） Ching and P． porosa （C． Presl） Hovenk． The histochemical localization showed that saponins mainly
distributed in parenchyma cells of major vein transection and palisade tissue， some existed in spongy tissue， epidermis and
phloem． Anthraquinones were mainly detected in parenchyma cells of major vein transection and mesophyll assimilation organi-
zation， some were tested in epidermis and phloem； no coloration was observed in xylem． Polysaccharides generally distributed
in mesophyll assimilation organization of P． sheareri and P． porosa． The content of saponins and polysaccharides in P． sheareri
was higher than that in P． porosa； but the content of anthraquinones was less than that of P． porosa according to color reac-
tion． The results provided data for rational utilization of pyrrosia．
Key words： Pyrrosia sheareri （Bak．） Ching； P． porosa （C． Presl） Hovenk； foliage leaves； saponins； anthraquinones；
polysaccharides； histochemical localization
DOI:10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2012.16.044
第 16 期
化学成分 ［13］、形态结构 ［14，15］、含量测定 ［16－18］和药理 ［19］
等方面报道不少，但有关庐山石韦和柔软石韦药用
成分的组织化学定位以及积累研究鲜见报道。 为了
比较不同石韦类群化学成分在组织器官中的含量
差异及其分布，试验通过对庐山石韦和柔软石韦主
要药用部位营养叶片中皂苷类化合物、蒽醌类化合
物及多糖物质进行了组织化学定位研究，以期为研
究石韦中药材中的皂苷类化合物、蒽醌类化合物以
及多糖物质的合成、转运和贮存的途径提供试验依
据，同时为药用石韦资源的合理利用提供参考。
1 材料与方法
1．1 试验材料
柔软石韦于 2007 年 7 月采自广西壮族自治区
靖西县安德镇； 庐山石韦于 2007 年 7 月采自环江
毛南族自治县爱峒乡，均取生长正常的成熟营养叶
片为研究材料。 在广西大学农学院中心实验室进行
测定工作，所用试剂有 5％香草醛、冰醋酸、高氯酸、
醋酸铅饱和溶液、38％甲醛、70％酒精、5％NaOH 溶
液、高碘酸酒精、席夫试剂（Schiff＇s reagent，品红亚
硫酸试剂）等。 仪器主要是广西大学农学院中心实
验室已具备的 Leica－DMLB 显微镜、 植物切片机
等。
1．2 试验方法
1．2．1 皂苷类化合物检测 （香草醛－冰醋酸和高氯
酸等量混合的显色剂测定） 将新鲜营养叶片采用
冰冻切片法横切制成 25 μm 的薄片，在醋酸铅饱和
溶液中浸泡 24 h后，滴加等量的 5％的香草醛－冰醋
酸和等量高氯酸混合的显色剂，显色 5 min 后，观察
叶片组织有无产生从淡红色→红色→紫红色的颜
色变化。 对照材料用 38％甲醛 5 mL＋冰醋酸 5 mL＋
70％酒精 90 mL 配制的 FAA 固定液浸泡 20 d，以除
去皂苷类化合物，再用上述混合剂显色，制成装片，
用 Leica－DMLB 显微镜进行观察并照相。
1．2．2 蒽醌类化合物检测 （氢氧化钠溶液显色法）
①将新鲜营养叶片采用冰冻切片法横切制成 25 μm
的薄片，放在载玻片上，滴上去离子水后盖上盖玻
片，置显微镜下直接观察并拍照。 ②在前述①的装
片上滴 5％NaOH 溶液显色， 加盖玻片后在 Leica－
DMLB显微镜下观察显色部位，并照相。
1．2．3 多糖物质检测 采用高碘酸席夫染色法（Pe-
riodic acid－schiff stain，PAS），将新鲜营养叶片采用
冰冻切片法横切制成 25 μm 的薄片，在高碘酸酒精
溶液中处理 3 min， 在 70％酒精中漂洗后滴加席夫
试剂处理 1 min，流水冲洗 5 min 后，封片，最后在
Leica－DMLB 显微镜下观察并照相。
2 结果与分析
2．1 皂苷类化合物检测
试验采用的皂苷类化合物显色剂是香草醛－冰
醋酸和高氯酸混合剂，该显色剂能与植物中的皂苷
类化合物发生化学反应，生成大分子复合物，并且
出现特定的显色反应，因此是对植物所含皂苷类化
合物定性的一种识别试剂。 以 5％香草醛－冰醋酸和
高氯酸混合剂作为显色剂滴加后，含有皂苷类化合
物的细胞会呈现出淡红→红→紫红的颜色变化，颜
色的深浅与皂苷类化合物的含量呈正相关关系［20－23］。
从镜检结果（图 1）来看，石韦植物不同种及同种的
营养叶片中不同组织部位，其皂苷类化合物的分布
和积累情况是不同的。 在柔软石韦和庐山石韦营养
叶片主脉横切面薄壁组织和维管束韧皮部均显示
出红色物质（图 1－1、图 1－4），说明有皂苷类化合物
的存在；厚角组织则显示极浅的红色（图 1－1、图 1－
4），说明此处含少量的皂苷类化合物，而木质部显
色不明显。 在营养叶片的整个横切面中均有皂苷类
化合物分布，其中栅栏组织积累最多，显色最明显，
并且呈紫红色（图 1－2、图 1－5），表明栅栏组织有较
多的皂苷类化合物存在；叶表皮和海绵组织呈浅红
色，反映出含皂苷类化合物相对较少（图 1－2、图 1－
3、图 1－5），并且表皮毛显色不明显。研究发现，庐山
石韦栅栏组织显色比柔软石韦栅栏组织明显，呈紫
红色，表明庐山石韦营养叶片皂苷类化合物含量比
柔软石韦含量高。 而经 70 ％的酒精配制的 FAA 固
定液处理的对照材料与显色剂没有明显的显色反
应．说明皂苷类化合物已被 FAA液抽提。
2．2 蒽醌类化合物检测
试验采用的蒽醌类化合物显色剂是 5％ NaOH
溶液，该显色剂能与植物中的蒽醌类化合物发生化
学反应，生成大分子复合物，并且出现特定的显色
反应，因此是对植物所含蒽醌类化合物定性的一种
识别试剂。 在石韦植物营养叶片横切面切片上滴加
5％ NaOH 溶液后，会立即产生特定的显色反应，出
现颜色从淡黄色至橘红色或深红色不等的变化。 从
镜检结果（图 2）来看，石韦植物不同种及同种的营
养叶片的不同组织部位中，蒽醌类化合物的分布和
积累情况也是不同的。 在柔软石韦和庐山石韦营养
叶片主脉横切面上， 显色部位主要集中在薄壁组
织，上有较多细胞染成红色（图 2－1、图 2－2、图 2－
4），表明该组织含较多的蒽醌类化合物；而表皮部
位显浅红色（图 2－1、图 2－2、图 2－5），说明蒽醌类化
合物含量少；维管束的韧皮部显色而木质部的导管
不显色，厚角组织也无明显的显色反应（图 2－1、图
钟霞军等：庐山石韦和柔软石韦营养叶片组织化学定位研究 3541
湖 北 农 业 科 学 2012 年
1~3．柔软石韦；4、5．庐山石韦；1、2、4．主脉横切面（×50）；3、5．叶片横切面（×100）；Co．厚角组织；V．维管束；Pt．栅栏组织；St．海绵组织
图 2 石韦植物营养叶片横切面经 5％ NaOH 溶液显色后蒽醌类化合物显示
1~3．柔软石韦；4、5．庐山石韦；1、4．主脉横切面（×50）；2、3、5．叶片横切面（×100）；Co．厚角组织；V．维管束；Pt．栅栏组织；St．海绵组织；Eh．表皮毛
图 1 石韦植物营养叶片横切面经 5％香草醛－冰醋酸和高氯酸混合剂显色后皂苷类化合物显示
2－2、图 2－4），说明它们不含蒽醌类化合物或蒽醌类
化合物的含量极低。 在营养叶片的栅栏组织和海绵
组织中均可看到明显的显色反应，而且有许多细胞
染成了深红色（图 2－3、图 2－5），特别是在柔软石韦
海绵组织中有较多的细胞呈深红色（图 2－3），表明
在柔软石韦海绵组织中分布有较多的蒽醌类化合
物。 据显色的深浅判断，柔软石韦营养叶片中的蒽
醌类化合物含量要比庐山石韦的高。
在未加 5％ NaOH 溶液的石韦植物营养叶片横
切面上，同化薄壁组织含有叶绿素，因而呈绿色（图
3-1、图 3－2、图 3－4）；表皮不具叶绿体，为白色（图
3－2、图 3－4）；主脉厚角组织和维管束中含有黄色物
质，呈黄色（图 3－1、图 3－3）。
2．3 多糖物质
冰冻切片经过 PAS 染色后，会立即产生特定的
显色反应，变色范围从淡红色至深红色或紫红。 镜
检结果表明， 营养叶片除了厚角组织被染成红色
外，主脉薄壁细胞、维管束和栅栏组织、海绵组织以
及表皮毛等部位显色较均匀，也呈红色（图 4－1、图
4－2、图 4－3、图 4－4），说明柔软石韦和庐山石韦营
1 2 3 4 5
1 2 3 4 5
1、2．柔软石韦；3、4．庐山石韦；1、3．主脉横切面（×50）；2、4．叶片横切面（×100）；Co．厚角组织；V．维管束；Pt．栅栏组织；St．海绵组织；Eh．表皮毛
图 3 未经染色的石韦植物营养叶片横切面
1、2．柔软石韦；3、4．庐山石韦；1、3．主脉横切面（×50）；2、4．叶片横切面（×100）；Co．厚角组织；V．维管束；Pt．栅栏组织；St．海绵组织；Eh．表皮毛
图 4 石韦植物营养叶片横切面经 PAS 染色法显色后多糖物质显示
Co
Co
Pt Pt
St
Eh
Eh
Co
Co
V
St
Pt
V
Pt
Co
V
Co
St
Pt
Co
Eh
St
V
Pt
V
Co
Co
V Pt
St
Co
Co
V Pt
St
Eh
Co
V
Pt
3542
第 16 期
养叶片中都含有较多的多糖物质。
在未经 PAS 染色直接用显微镜观察的庐山石
韦和柔软石韦营养叶片切片中，同化薄壁组织含有
叶绿素，呈绿色（图 3-1、图 3－2、图 3－4）；表皮不具
叶绿体，为白色（图 3－2、图 3－4）；柔软石韦主脉厚
角组织呈无色，而庐山石韦主脉厚角组织和维管束
中含有淡黄色物质，呈淡黄色（图 3－1、图 3－3）。
3 小结与讨论
1）应用组织化学定位技术来确定药用成分在
中药材中的分布和积累是一种有效的研究手段。 皂
苷类化合物、蒽醌类化合物、多糖物质是石韦属植
物中的主要药用成分。 皂苷类化合物是一类具有较
强生理活性的次生代谢产物，其在不同药材、不同
植物组织器官及不同发育时期存在很大的差异［24－26］。
林如等 ［27］ 对绞股蓝 ［Gynostemma pentaphyllum
（Thunb．）Mak．］的叶片皂苷类化合物进行了定位，结
果表明叶肉组织和叶脉韧皮部显紫红和红色，表皮
和厚角组织显浅红色。 本试验结果也表明，庐山石
韦和柔软石韦营养叶片的主脉薄壁组织、维管束韧
皮部、厚角组织、表皮、栅栏组织和海绵组织中均有
不同含量的皂苷类化合物分布，而表皮毛和维管束
木质部显色不明显。 彭华胜等 ［28］研究发现，栽培太
子参 ［Pseudostellaria heterophylla （Miq）Pax ex Pax
et Hoffm．］ 块根在次生韧皮部与形成层中的皂苷类
化合物含量明显高于次生木质部。 Nobuyuki等［29］认
为，蒽醌类化合物存在于叶片表皮下方的同化薄壁
组织中。 而 Bruni 等［30］认为中央贮水组织也是积累
蒽醌类化合物的场所，Beaumont 等［31］认为蒽醌类化
合物可能贮存于维管束中。 从本研究的结果来看，
比较支持 Nobuyuki 的观点，检测显示，蒽醌类化合
物主要分布在石韦属植物营养叶片主脉的薄壁组
织及叶肉同化组织中，维管束的韧皮部显色，而木
质部不显色，据此我们推测蒽醌类化合物的运输可
能是通过韧皮部进行的，当然还有待进一步研究确
认。 叶片是植物进行光合作用合成糖类物质的重要
器官，吕洪飞等 ［32］在石斛属（Dendrobium Sw.）植物
叶片多糖物质的组织化学定位研究中，发现叶片里
染色较深的部位在叶肉细胞、表皮细胞的细胞质及
韧皮部细胞的细胞壁上。 章英才等［33］在研究了大黄
（Rheum tanguticum Maxim et Balf var. liupanshanense
Cheng et Kao）茎和叶中多糖贮藏分布特征后认为，
叶肉栅栏组织和海绵组织细胞内分布有大量的叶
绿体，糖类物质在叶肉细胞中合成，进行短暂的贮
存后通过一定的途径经由叶柄和茎维管束运输至
根茎或根中贮藏积累。 本研究也发现庐山石韦和柔
软石韦营养叶片中含有较多的多糖物质，但是否运
输至石韦叶柄和根状茎中贮藏积累及其运输途径
还有待进一步确认。
2）张艺轩等 ［13］利用高效液相色谱技术研究大
叶石韦和小叶石韦的指纹图谱，发现大叶石韦（庐
山石韦） 与小叶石韦 ［有柄石韦，Pyrrosia petiolosa
（Christ）Ching］的指纹图谱有较大的差异。 我们的研
究表明，庐山石韦和柔软石韦营养叶片中存在着大
量的皂苷类化合物、 蒽醌类化合物和多糖物质，它
们在石韦植物营养叶片中的分布是多位点的，不同
组织中有一定的贮藏与分布；根据不同组织中细胞
的显色程度不同，庐山石韦和柔软石韦营养叶片中
皂苷类化合物、蒽醌类化合物和多糖物质的含量差
异也较大，庐山石韦营养叶片的皂苷类化合物和多
糖物质含量比柔软石韦营养叶片的高，而柔软石韦
营养叶片的蒽醌类化合物含量则高于庐山石韦的。
《中华人民共和国药典》 中只收录了石韦［Pyrrosia
lingua（Thunb．）Farw．］、庐山石韦、有柄石韦这 3 种石
韦植物作为传统中药石韦的原植物 ［34］，但据本研究
发现，柔软石韦营养叶片具有较高的蒽醌类化合物
含量，而蒽醌类化合物是一类具有重要药用价值的
中药有效成分，具有抗菌消炎、健胃、强壮、通经、利
尿、祛瘀血、抗肿瘤等作用［35－43］。 加上随着医疗事业
的发展，石韦药材的用药量在不断增加，这造成野
生资源的急剧减少。 不过据调查，柔软石韦的野生
资源在广西壮族自治区各地还比较丰富 ［44］，有较好
的利用价值。 本研究也可为合理开发利用石韦资源
提供参考依据。
3）试验对庐山石韦和柔软石韦营养叶片采用氢
氧化钠溶液显色法进行了蒽醌类化合物的组织定
位、 采用 PSA 染色法对多糖物质进行了组织定位、
采用香草醛－冰醋酸和高氯酸等量混合剂显色法对
皂苷类化合物进行了组织定位，3 种方法都成功地
产生了从淡色－深色的复合显色变化， 显示出庐山
石韦和柔软石韦营养叶片中有皂苷类化合物、蒽醌
类化合物以及多糖物质的存在，且不同组织中颜色
深浅不同，其色度变化与石韦活性成分含量呈正比
关系，显色反应灵敏，完全可以作为快速定性识别、
定位检测石韦属植物营养叶片中的皂苷类化合物、
蒽醌类化合物以及多糖物质的方法应用。
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（责任编辑 王 珞）
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