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收稿日期:2003-05-20
基金项目:湖南省教育厅科研基金资助项目(02C459)
作者简介:王瑞兰(1968-),女 ,湖南冷水江人 ,湖南科技大学生命科学系讲师 ,学士 ,主要从事生物化学的研究.
第 18卷第 4期
2 00 3年 11月
长 沙 电 力 学 院 学 报 ( 自 然 科 学 版 )
JOURNAL OF CHANGSHA UNIVERSITY OF ELECTRIC POWER(NATURAL SCIENCE)
Vol.18 No.4
Nov. 2 0 0 3
庐山石韦中黄酮的提取工艺研究
王瑞兰 , 易　俗 , 陈康贵 , 谭新中 , 刘丽娟
(湖南科技大学 生命科学系 ,湖南 湘潭　411201)
摘　要:以芦丁为对照品 , 通过正交试验设计 ,确定了以乙醇为溶剂的庐山石韦中黄酮提取的最佳条件为料液比
为 1:20 的 55%乙醇溶液在 80℃条件下浸提 5 h.在此条件下 ,总黄酮的得率为 5.91%.
关　键　词:庐山石韦;总黄酮;乙醇;正交试验;浸提
中图分类号:O 69　　　文献标识码:B　　　文章编号:1006-7140(2003)04-0084-03
Study on the Extraction Condition of Flavonoids in Pyrrosia Sheareri
WANG Rui-lan , YI Su , CHEN Kang-gui , TAN Xin-zhong , LIU Li-juan
(Department of Life S cience , Hunan Univ.of Science and Technology , Xiangtan 411201 , China)
Abstract:Contrast to Lutin , the best condition of extraction technique for flavonoids from Pyrrosia Sheareri
(Bak)Ching are optimized with orthogonal experiment.They are 55% alcohol which is 20 times of the
medicine amount extracting 5 hours in 80 ℃.The yield of GF is 5.91%.
Key words:Pyrrosia Sheareri;general flavonoids;alcohol;orthogonal experiment;leaching
　　庐山石韦(Pyrrosia sheareri(Bak .)Ching),又名
大石韦 、光板石韦 ,是水龙骨科石韦属植物.分布于
长江以南各省区.全草药用 ,具有治痨热邪气 、利小
便 、通膀胱 、补五痨 、去恶风 、补精气等功能[ 2] .石韦
属植物含有黄酮类化合物[ 3] .研究表明 ,黄酮类化合
物具有抗过敏 、降血压 、抗炎 、抗菌 、抗突变 、抗溃疡 、
抗病毒 、保肝和降血脂等活性[ 4] .鉴于黄酮类化合物
具有多种生理活性 ,对石韦黄酮的研究具有重要的
意义.
黄酮类化合物中芒果甙和异芒果甙系石韦属植
物的特征性成分 ,且为石韦属植物抗气管炎作用的
活性成分 ,庐山石韦中含芒果甙和异芒果甙较多 ,在
0.3%以上[ 3] .乙醇是最常用的黄酮类化合物提取溶
剂 ,为探索其最佳提取条件 ,本试验采用四因素三水
平正交试验设计 ,对庐山石韦总黄酮提取工艺进行
研究 ,以其为制剂开发提供依据.
1　材料与方法
1.1　材料与仪器
1)　材料.
庐山石韦(购自湘潭市砂子岭药材市场 ,经湖南
科技大学生命科学系刘炳荣教授鉴定),对照品芦丁
(生化试剂 ,上海试剂二厂),无水乙醇 、95%乙醇 、亚
硝酸钠 、三氯化铝 、氢氧化钠 、石油醚等均为AR.
2)　仪器.
DWF-100 电动植物粉碎机 , 河北省黄骅市科
研器机厂;SHZ -D 循环水式真空泵 ,河南巩义市英
峪豫华仪器厂;HH -S 恒温水浴锅 ,金坛市恒丰仪
器厂;ZFQ-85A 旋转蒸发器 ,上海医械专厂;ZK-
82A电热真空干燥箱 ,上海实验仪器厂有限公司;
724-1微机型可见分光光度计 ,上海医械厂.
1.2　方法与步骤
1)　庐山石韦中黄酮的初步提取.
将庐山石韦洗净 ,低温烘干 ,用电动植物粉碎机
粉碎.称取 100 g 于烧杯中 ,加入石油醚浸泡过夜脱
脂去色 ,然后经布氏漏斗抽滤 ,滤渣风干后加入乙
醇 ,放置于恒温水浴锅中浸提后 ,抽滤得滤液.将滤
液减压浓缩并回收乙醇 ,得浸膏.将浸膏在60 ℃下
真空干燥 ,研碎后得庐山石韦总黄酮粗提物.
2)　正交试验设计.
为了系统考察乙醇提取法的条件参数 ,确定乙
醇提取庐山石韦中黄酮的最佳工艺条件 ,我们选择
以总黄酮得率为考察指标 ,将各考察因素取 3个水
平进行了 L9(34)正交试验 ,以考察乙醇浓度 、乙醇用
量 、提取温度 、提取时间对总黄酮得率的影响.因素
水平表见表 1.
表 1　因素水平表
水平
因　　素
A 乙醇浓度
(%)
B乙醇用量
(倍数)
C提取温度
(℃)
D提取时间
(h)
1 55 10 40 3
2 75 15 60 4
3 95 20 80 5
　　3)　标准溶液的制备[ 5] .
准确称取经 120 ℃干燥至恒重的芦丁对照品
0.038 0 g ,用 30%乙醇溶解并定容至250 ml ,摇匀得
浓度为0.152 g/L 标准应用液.
4)　标准曲线的制备[ 5 ,6] .
分别取上述芦丁标准溶液 1.0 ml , 2.0 ml ,
4.0 ml ,6.0 ml , 8.0 ml于 5 只 25 ml 容量瓶中 ,用
30%乙醇补充至 12.5 ml ,加入0.7 ml 5%亚硝酸钠 ,
摇匀 、放置 5 min 后加入 0.7 ml 10%三氯化铝 ,摇
匀.6 min 后加入 5 ml 1 mol/L 氢氧化钠 , 摇匀.用
30%乙醇稀释至刻度 , 10 min后于 510 nm处比色测
定 ,试剂为空白参比.结果见表 2.以浓度 C对吸光
度A 作标准曲线 ,用最小二乘法经线性回归 ,得回归
方程:A=0.008 7+0.029 5C , r=0.999 0.
表 2　浓度与吸光度
浓度 C(×0.006 08 g/ L) 0 1.0 2.0 4.0 6.0 8.0
吸光度 A 0 0.029 0.060 0.122 0.184 0.233
　　5)　供试品溶液的制备及测定
取9组试验中提取制得的干膏一定量 ,共 9份 ,
精密称定 ,分别置于 25 ml容量瓶中 ,加 30%乙醇使
溶解并稀释至刻度 ,摇匀.精密量取 4 ml置于25 ml
容量瓶中 ,按 1.2中 4)所用方法比色测吸光度 ,由
回归方程计算总黄酮含量.
2　结果与分析
以乙醇为溶剂的正交试验结果数据见表3.
85第 18卷第 4期 王瑞兰等:庐山石韦中黄酮的提取工艺研究
表 3　L9(34)正交试验设计及结果分析
实验号 A B C D 初提物(g) 总黄酮得率(%)
1 1 1 1 1 12.314 8 3.74
2 1 2 2 2 13.918 0 5.21
3 1 3 3 3 15.497 4 5.91
4 2 1 2 3 8.403 1 1.77
5 2 2 3 1 9.921 8 1.75
6 2 3 1 2 9.086 8 1.63
7 3 1 3 2 5.009 7 0.67
8 3 2 1 3 5.116 9 0.78
9 3 3 2 1 5.881 2 0.71
k1 14.851 1 6.170 0 6.147 0 6.197 6
k2 5.151 5 7.737 0 7.692 4 7.507 2
k3 2.157 5 8.253 1 8.320 7 7.455 3
k1 的平均 4.950 4 2.056 7 2.049 0 2.065 9
k2 的平均 1.717 2 2.579 0 2.564 1 2.502 4
k3 的平均 0.719 2 2.751 0 2.773 6 2.818 4
极差 R 4.231 2 0.694 4 0.724 6 0.752 6
k1
2 220.555 2 38.068 9 37.785 6 38.410 3 G=k 1+k2+k3=22.160 1(试验总值)
k2
2 26.538 0 59.861 2 59.234 1 56.358 1 G2=491.07
k3
2 4.654 8 68.113 7 69.234 1 71.492 1 CT=G2/ n=54.563 3
Q 83.916 0 55.347 9 55.397 6 55.420 1 Q=1/ 3＊(k12+k22+k32)
　　从表 3 极差分析可以看出 ,最佳工艺条件为
A1B3C3D3 ,而对提取率影响最大者为 A项 ,即乙醇浓
度因素影响最大;对提取率影响最小者为 B 项 ,即
乙醇用量因素影响最小.把 B项作为空列 ,作为误
差相处理 ,进行方差分析.结果见表 4.
表 4　庐山石韦总黄酮提取结果方差分析表
误差来源 差方和(1) 自由度 均方 F值 显著性
A 29.352 6 2 14.676 3 37.412 2 P<0.05
C 0.834 2 2 0.417 1 1.063 3 P>0.25
D 0.856 8 2 0.428 4 1.092 1 P>0.25
误差 0.784 6 2 0.392 3
总和 31.828 1 8
　　注:差方和 S=Q-CT
从表 4方差分析结果可知 ,对提取工艺影响因
素的大小顺序为 A>D>C>B.除乙醇浓度外 ,其他
因素对提取率的影响都不显著 ,均为次要因素.
3　讨论
用55%,75%,95%三种不同浓度的乙醇提取庐
山石韦总黄酮的得率进行比较表明:55%乙醇提取
效果最好.可能与庐山石韦中所含黄酮类化合物的
成分有关.庐山石韦中黄酮类化合物主要为芒果甙
和异芒果甙[ 3 ,11] .55%乙醇提取且具有得率及黄酮
含量较高 ,后续的过滤 、回收溶剂 、干燥的操作较容
易等优点 ,是理想的提取方法.
参考文献:
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北京:科学出版社 , 1983.
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