全 文 ：华西药学杂志WCJ· PS　2008, 23(3):310 ～ 311 　　
基金项目:肇庆市科技创新基金项目(2006G21);肇庆学院科研基金资助项目(0643)
作者简介:刘艳清(1973-),女 ,江西萍乡 ,博士 ,讲师,从事天然产物化学色谱的分析工作。 E-mail:yqlin@2qu.edu.cn
正交试验法优选庐山石韦中绿原酸的提取工艺
刘艳清 ,汪洪武
(肇庆学院轻工化学系 , 广东 肇庆 526061)
摘要:目的　优选庐山石韦中绿原酸的提取工艺。方法　采用正交设计方法 , 以乙醇为提取溶剂 、绿原酸含量为考察指标
优化提取工艺。结果　回流法最佳提取条件为液固比为 11：1的 50%乙醇于 80℃水浴提取 80min,绿原酸含量达 1.10%;超
声法最佳提取条件为:A1B3C3D3 , 即液固比为 11：1的 50%乙醇预浸渍 20 min, 超声提取 40 min, 绿原酸的含量达到 1.19%。
结论　从庐山石韦中提取绿原酸的较佳方法为超声法。
关键词:庐山石韦;绿原酸;正交实验;分光光度法;提取工艺
中图分类号:R284　 文献标识码:A　 　文章编号:1006-0103(2008)03-0310-02
OptimumextractingtechnologyofchlorogenicacidfromPyrrosiasheareribyorthogonaldesign
LIUYan-qing, WANGHong-wu
(DepartmentofLightIndustry＆Chemistry, ZhaoqingUniversity, Zhaoqing526061, China)
Abstract: OBJECTIVE　ToobtainoptimumextractingtechnologyofchlorogenicacidfromPyrosiasheareri(Bak.)Ching.
METHODS　optimalconditionsforextractingchlorogenicacidfromP.sheareriwithrefluxingandultrasonictreatmentwerestudied
byusingorthogonaldesign.RESULTS　Theoptimalconditionforextractingwithwaterbathwas80℃, 11：1 of50% ethanolsolution
toP.sheareri(w/w)for80 min.Thecontentofchlorogenicacidwas1.10%.Theoptimalconditionwithultrasonictreatmentwas
11：1 of50% ethanolsolutiontoP.sheareri(w/w)extractingfor20 min.Thecontentofchlorogenicacidwas1.19%.CONCLUSION
　ThemethodofultrasonictreatmentwasbeterthanrefluxingfortheextractionofchlorogenicacidinPyrosiasheareri(Bak.)Ching.
Verificationexperimentprovedtheoptimumprocessingmethodwasfeasible.
Keywords:Pyrrosiasheareri(Bak.)Ching;Chlorogenicacid;Orthogonaldesign;Spectrophotometry;Extractingtechnology
CLCnumber:R284　　　 Documentcode:A　 　ArticleID:1006-0103(2008)03-0310-02
　　庐山石韦 Pyrosiasheareri(Bak.)Ching是水龙
骨科石韦属植物 ,其有效成分绿原酸具有抗菌解毒 、
消炎利胆 、抗脂质过氧化和增强胃肠蠕动和促进胃
液分泌的药理作用[ 1 ～ 4] ;是选择性羟基自由基和过
氧自由基的清除剂。为此 ,特采用正交实验 ,分别考
察了从石韦中提取绿原酸的两种方法(乙醇水浴提
取和超声波辅助提取)。
1　实验部分
1.1　仪器与材料
UV/VIS916型分光光度计(澳大利亚 GBC);
FZ102型微型植物试样粉碎机(河北省黄骅市振兴
机电仪器厂);SX8200H型台式超声波清洗器(上海
科导超声仪器有限公司);HH-S2系列恒温水浴锅
(江苏省金坛市环宇科学仪器厂)。绿原酸对照品
(中国药品生物制定检定所);庐山石韦(市售)50℃
下烘干 3 h,粉碎后备用;其他试剂为分析纯。
1.2　方法与结果
1.2.1　正交实验设计　参照文献[ 5, 6] ,通过预实验 ,
分别考察乙醇浓度(A)、液固比(B)、提取温度(C)
和提取时间(D)等 4个因素对回流法的影响及乙醇
浓度(A)、液固比(B)、浸渍时间(C)和提取时间(D)
等 4个因素对超声法的影响。按正交表 L9(34)安排
4因素 3水平的正交实验(表 1、表 2)。
表 1　回流法的正交试验表
Table1　Orthogonalexperimentaldesignforrefluxing
LevelsA(ethanol)/% B(liquid：solid)
C(temperature)/
℃
D(time)/
min
1 50 5：1 40 40
2 70 8：1 60 80
3 90 11：1 80 120
表 2　超声法的因素水平表
Table2　Orthogonalexperimentaldesignforultrasonictreatment
LevelsA(ethanol)/%B(liquid：solid)C(immersiontime)/min
D(ultrasonic
treatmenttime)/min
1 50 5：1 0 20
2 70 8：1 10 30
3 90 11：1 20 40
1.2.2　溶液的制备　准确称取 5.2 g绿原酸对照
品 ,置 250 ml量瓶中 ,用 70%乙醇溶解 ,定容 ,即得
DOI :10.13375/j.cnki.wcjps.2008.03.017
对照品溶液 。精确称取约 2.0 g庐山石韦粉末 ,置
100ml圆底烧瓶中 ,按 “ 1.2.1”项进行正交实验 ,提
取液抽滤 ,滤液定量转移至 100 ml量瓶中 , 70%乙
醇定容 ,即得供试液。
1.2.3　测定波长的选择　取 1 ml对照品溶液 ,置
10 ml量瓶中 ,用 70%乙醇定容。以 70%乙醇为参
比液 ,于 200 ～ 400 nm进行紫外扫描 ,在 329.6 nm
处有最大吸收峰 ,故选择此测定波长 。
1.2.4　标准曲线的绘制　精密吸取 0、0.1、0.2、
0.3、0.4、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0 ml对照品溶液 ,置
10只 10ml量瓶中 , 70%乙醇定容。于 329.6nm测
定其吸光度(A),以 A为纵坐标 、绿原酸浓度 C为横
坐标 ,绘制标准曲线 ,得回归方程为:A=0.051 C-
0.006(r=0.9998),绿原酸 0.416 ～ 4.576 μg·ml-1
与吸光度的线性关系良好 。
1.2.5　精密度实验　精确称取约 2.0 g庐山石韦
粉末 ,加入 15 ml70%乙醇 , 60℃水浴提取 80 min,
准确吸取 1ml提取液 ,置 10ml量瓶中 , 70%乙醇定
容 ,测定其吸光度 。连续测定 6次 , 其 RSD=
1.37%。表明仪器精密度较好。
1.2.6　稳定性实验　准确吸取 1 ml供试液 ,置 10
ml量瓶中 ,以 70%乙醇定容 ,分别于 0、10、20、30、
40、50 min测定其吸光度 ,连续测定 6次 ,其 RSD=
1.07%。表明提取液在 1 h内较稳定。
1.2.7　重复性实验　精密称取约 2.0 g庐山石韦
粉末 ,按 “ 1.2.2”项下方法平行制备 3份供试液 。
按 “1.2.5”项下方法实验 ,其 RSD=0.95%。说明
方法重复性较好 。
1.2.8　加样回收实验　向已知含量的庐山石韦中
加入不同量的绿原酸对照品 ,用紫外分光光度计测
定其吸光度 ,得绿原酸的含量 。其平均回收率为
99.08 %, RSD=1.15 %,表明方法回收率较好 。
1.2.9　样品的测定　按 “1.2.1” “1.2.2”项下方法
进行正交实验 、制备供试液。精密吸取 1 ml供试液
于 10ml量瓶中 ,按 “1.2.4”项下方法测定其吸光
度 ,计算绿原酸的含量(表 3、4)。
2　讨论
从表 3可见 ,在回流法中 ,液固比对庐山石韦中
绿原酸的提取效果影响显著 ,提取时间的影响次之 ,
乙醇浓度的影响较小 ,而提取温度的影响最小 。回
流法的最佳提取条件为 A1B3C3D2 ,即液固比为 11：
1的 50%乙醇于 80℃水浴提取 80 min。在此工艺
条件下 ,绿原酸含量为 1.10%。从表 4可见 ,在超
声法中 ,乙醇浓度对庐山石韦中绿原酸的提取效果
表 3　回流法的正交试验结果
Table3　Orthogonalexperimentresultsofrefluxing
No. A B C D Contentofchlorogenicacid/%
1 1 1 1 1 0.69
2 1 2 2 2 0.87
3 1 3 3 3 1.11
4 2 1 2 3 0.77
5 2 2 3 1 0.43
6 2 3 1 2 0.80
7 3 1 3 2 1.01
8 3 2 1 3 0.54
9 3 3 2 1 0.75
K1 2.67 2.47 2.03 1.87
K2 2.00 1.84 2.39 2.68
K3 2.30 2.66 2.55 2.42
R 0.67 0.82 0.52 0.81
表 4　超声法正交试验结果
Table4　Orthogonalexperimentresultsofultrasonictreatment
No. A B C D Contentofchlorogenicacid/%
1 1 1 1 1 0.83
2 1 2 2 2 0.97
3 1 3 3 3 1.19
4 2 1 2 3 0.87
5 2 2 3 1 1.10
6 2 3 1 2 0.94
7 3 1 3 2 0.70
8 3 2 1 3 0.80
9 3 3 2 1 0.75
K1 2.99 2.40 2.57 2.68
K2 2.91 2.87 2.59 2.61
K3 2.25 2.88 2.99 2.86
R 0.74 0.48 0.42 0.26
影响显著 ,液固比的影响次之 ,浸渍时间的影响较
小 ,而超声时间的影响最小。超声的最佳提取条件
为 A1B3C3D3 ,即液固比为 11：1的 50%乙醇预浸渍
20 min,超声提取 40 min。在此工艺条件下 ,绿原酸
含量达 1.19%。由此可知 ,超声法较回流法消耗乙
醇少 、提取时间短 、所得绿原酸含量更高 。
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收稿日期:2007-06
311第 3期 刘艳清 , 等。正交试验法优选庐山石韦中绿原酸的提取工艺