全 文 ：湖 北 农 业 科 学 2015 年
第 54 卷第 1期
2015年 1月
湖北农业科学
Hubei Agricultural Sciences
Vol． 54 No.1
Jan.，2015
雪里见为天南星科植物雪里见（Arisaema rhi-
zom C．E．C．Fisch）的根茎，别名大半夏、麻脚狼毒、半
截烂、躲雷草、避蛇参等。 贵州、云南、四川等地的土
家族和苗族将其作为治疗风湿麻木、跌打伤痛的要
药。 虽然雪里见在治疗某些顽固疾病和常见病方面
具有独特疗效，但它对皮肤和黏膜具有强烈的刺激
性 ［1］。 2010 年版《中国药典》收载的天南星科药材
中， 凡具有毒性或刺激性的药材都含有草酸钙针
晶，而且国内也有学者对天南星科植物半夏［Pinelli-
a ternata（Thunb．）Breit］、虎掌南星（Pinellia pedati-
secta Schott）、天南星 ［Arisaema eruberscens（Wall．）
Schott］及白附子（Typhonium giganteum Engl．）进行
了研究，认为刺激性成分可能是其具有特殊晶型的
“毒针晶”，其“毒针晶”成分除了含有草酸钙外，还
含有蛋白质和微量糖类成分［2－4］。
目前对雪里见的研究多集中在药材鉴定、化学成
分、药理活性等方面［5－8］，对其毒性成分研究较少，郭
坤坤等 ［1］在前期的研究工作中，推断雪里见对皮肤
和黏膜的刺激性来自草酸钙针晶。为此，拟从观察雪
里见中草酸钙针晶的形态和测定雪里见中草酸钙
针晶的含量着手，通过与同科药材中草酸钙针晶形
态的比较，并建立一个简便、准确测定草酸钙针晶含
量的方法，以期为后续开展炮制对雪里见中草酸钙针
晶形态结构、含量的影响及炮制机理研究奠定基础。
雪里见中草酸钙针晶形态结构与含量
刘育辰，刘 刚，张 勇，黄仕清，徐文芬，王进喜，杜 江
（贵阳中医学院药学院，贵阳 550002）
摘要 ：利用显微镜和电镜观察雪里见 （Arisaema rhizom C．E．C．Fisch）中草酸钙针晶的形态 ，并采用
RP－HPLC法测定草酸钙的含量。 结果表明，草酸钙针晶细长，具有尖锐的针尖；草酸在 0．099 64～1．992 80
g ／ L 范围内线性关系良好（r＝0．999 3）；平均回收率为 100．23％，RSD 为 1．52％。草酸钙针晶显微结构与同
科植物的基本相同，建立的含量测定方法操作简便，结果可靠，重复性好，可作为雪里见药材质量控制的
方法。
关键词：雪里见（Arisaema rhizom C．E．C．Fisch）；草酸钙针晶；显微结构；反相高效液相色谱法
中图分类号：R282 文献标识码：A 文章编号：0439－8114（2015）01－0094－03
DOI：10．14088 ／ j．cnki．issn0439－8114．2015．01．024
Microstructure and Content of Calcium Oxalate Crystal
in Arisaema rhizom
LIU Yu－chen，LIU Gang，ZHANG Yong，HUANG Shi－qing，XU Wen－fen，WANG Jin－xi，DU Jiang
（School of Pharmacy，Guiyang College of Traditional Chinese Medicine， Guiyang 550002， China）
Abstract： The microstructure of calcium oxalate crystal in Arisaema rhizom was observed under the microscope and scanning
electron microscope. HPLC method was used to determine its content． Results showed that the calcium oxalates crystal with a
sharp tip was slender. The linear range of oxalate was within 0．0996 4～1．992 8 g ／ L， r＝0．999 3. The average recovery was
100．23％ and RSD was 1．52％． The microstructure of calcium oxalate between A． rhizom and other plants of Araceae was ba-
sically same． The method of determining of its content has good reproducibility and can be used for quality control in the
production of A． rhizom．
Key words： Arisaema rhizom； calcium oxalate crystal； microstructure； RP－HPLC
收稿日期：2014－05－15
基金项目：国家科技支撑计划项目“基于壮、傣、土家等民族特色病种药物的有效性评价及关键技术研究”（2012BA127B06）
作者简介：刘育辰（1982－），女，吉林长春人，副教授，博士，从事中药、民族药化学成分及品质评价研究，（电话）13118508556
（电子信箱）lyc8564732＠163．com；通信作者，杜 江，教授，从事民族药研究，（电子信箱）dujang．gz＠163．com。
第 1 期
1 材料与方法
1．1 材料
药材：雪里见药材经贵阳中医学院杜江教授鉴
定为天南星科植物雪里见的根茎。
试剂：草酸对照品（贵州迪大生物科技有限公
司，纯度≥98％）；磷酸二氢钾、磷酸、盐酸、冰醋酸、
甘油为分析纯；水为娃哈哈纯净水。
仪器：Agilent 1100 高效液相色谱仪 （四元梯
度泵、自动进样器 、柱温箱 、DAD 检测器 ）；XS205
型十万分之一分析天平（瑞士 METTLER TOLEDO）；
HS10260D 型超声波清洗器（天津恒奥）；HI98107 型
pH计（意大利 HANNA）；爱国者数码显微镜EV5610；
HUS－5GB 型高真空镀膜机（日本 HITACHI 公司）、
JFC－1600 型离子溅射仪（日本 JEOL 公司）、JSM－
6490LV型扫描电子显微镜（日本 JEOL公司）。
1．2 方法
1．2．1 草酸钙针晶形态观察
1）显微观察样品制备。将样品粉碎，用冰醋酸－甘
油－水（V ／V，1∶1∶1）封片，于光学显微镜下观察并拍照。
2）扫描电镜样品制备。 将样品粉末用胶带粘置
观测台上， 于 HUS－5GB 型高真空镀膜机中进行高
真空镀碳膜， 再于 JFC－1600 型离子溅射仪中镀铂
金膜，在电流 100 HA、加速电压 20 kV 的条件下扫
描、观察并进行显微拍照。
1．2．2 草酸钙含量测定
1）色谱条件及系统适应性试验。 色谱柱 Dia-
monsil C18 （4．6 mm×250 mm，5 μm）， 流动相：0．5％
KH2PO4－H3PO4 水溶液 （pH 2．3），流速 0．8 mL ／ min，
检测波长 210 nm，柱温 22 ℃，进样量 10 μL。
2）草酸对照品溶液的配制。 称取草酸对照品适
量，精密称定，加去离子水配制成 1．992 80 g ／ mL 的
草酸溶液，作为对照品储备液。
3）供试品溶液的制备。 取雪里见粉末 0．4 g 置
于离心管中，加入去离子水 3 mL，混匀，超声处理
10 min，置 70 ℃水浴锅中加热，并搅拌 10 min，4 000
r ／ min 离心 5 min，取上清液，残渣以热去离子水洗
涤 3 次，每次 2 mL，混匀，离心，合并上清液，然后加
盐酸（体积比 1∶1）溶液 0．4 mL，去离子水 3 mL，混
匀，方法同上，分离沉淀与上清液，沉淀用 0．1 mol ／ L
的 HCl同上法处理 2次，每次 2 mL，离心，合并上清
液定容至 10 mL量瓶中，备用［9］。
1．2．3 标准曲线的绘制 精密吸取草酸对照品溶
液适量，依次用去离子水稀释成 0．099 64、0．199 28、
0．498 20、0．797 20、0．996 40、1．992 80 g ／ L 的对照品
溶液，用 0．45 μm 微孔滤膜滤过，取续滤液 10 μL 注
入液相色谱仪。 以对照品进样浓度（g ／ L）为横坐
标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程：
y赞 ＝7 038．8 x＋242．95，r＝0．999 3。 结果表明草酸在
0．099 64～1．992 80 g ／ L 范围内线性关系良好。
2 结果与分析
2．1 草酸钙针晶形态观察结果
从图 1 和图 2 可以看出，雪里见的草酸钙针晶
细长，具有尖锐的针尖，多是单个散在，很少成束，
长短不一，晶体有的表面光滑，有的具有小的突起，
有的表面还具有凹槽。
2．2 草酸钙含量测定结果
2．2．1 对照及样品色谱图 对照及样品色谱图见图3。
2．2．2 精密度试验 精密吸取草酸对照品溶液（浓
度 0．498 20 g ／ L）10 μL，重复进样 6 次，测定草酸峰
面积，计算并折算成样品中草酸钙含量，其 RSD 为
0．76％，表明仪器精密度良好。
2．2．3 重复性试验 取同一批号样品，平行制备供
试品溶液 6 份，分别进样 10 μL，测定草酸峰面积，
计算并折算成样品中草酸钙含量，其 RSD 为1．18％，
表明试验的重复性良好。
2．2．4 稳定性试验 精密吸取同一份供试品溶液
10 μL，分别于 0、2、4、6、8、12 h 进样，测定草酸峰面
积， 计算并折算成样品中草酸钙含量， 其 RSD 为
0．15％，表明供试品溶液在 12 h内稳定性良好。
2．2．5 准确度 采用加样回收法。 精密称取已测定
含量的雪里见样品粉末 6 份各约 0．2 g，分别加入
草酸对照品适量，按“1．2．2”的制备方法及色谱条
件测定，计算并折算成样品中草酸钙含量，计算加
样回收率和 RSD 值，结果见表 1。 结果表明试验准
确度良好。
图 1 雪里见草酸钙针晶显微照片（×400）
图 2 雪里见草酸钙针晶电镜扫描图（×7 000）
刘育辰等：雪里见中草酸钙针晶形态结构与含量 95
湖 北 农 业 科 学 2015 年
2．2．6 样品含量测定 取样品制备供试品溶液 ，
RP-HPLC测定， 计算并折算成样品中草酸钙含量，
具体见表 2。
3 小结与讨论
3．1 雪里见中草酸钙的显微形态
从雪里见草酸钙针晶的电镜扫描图可以看出，
与同科的半夏、虎掌南星、天南星及禹白附药材的
针晶形态相似［4］，针晶都是极为细长，具有尖锐的针
尖，但其表面有的比较光滑，有的具有小的突起，有
的还具有凹槽，其具体原因有待进一步研究。 有文
献报道，粉碎粒度对草酸钙针晶的形态、数量和存
在的方式有所改变 ［10］，因此建议考察粉碎粒度对雪
里见中草酸钙形态的影响。 由于雪里见有毒，一般
需要炮制后使用，建议考察不同炮制方法对其草酸
钙形态的影响。
3．2 雪里见中草酸钙的含量测定
草酸钙针晶不溶于水及有机溶剂，因此对样品
进行简单处理，先将可溶性的草酸盐去除，然后再
通过酸处理使草酸钙转化为草酸，再采用 RP－HPLC
法测定草酸的含量并换算成药材中所含有的不溶
性草酸钙针晶的含量［2，3，5］。
分别对流动相组成、流动相 pH、流速、柱温、检
测波长进行了考察， 结果表明， 以 0．5％ KH2PO4－
H3PO4 水溶液作为流动相且 pH 为 2．3 时，流速0．8
mL ／ min，柱温 22 ℃，检测波长 210 nm 时色谱峰信
号强，且分离度良好，基线平稳。
虽然天南星科药材中都含有草酸钙针晶，但含量
差别很大，半夏、水半夏、白附子、天南星中草酸钙的含
量分别为 1．222 8％、1．147 2％、0．668 5％、0．688 6％［11］，
而雪里见中草酸钙针晶的含量都在 2％以上，天南
星科药材中草酸钙针晶的含量与其毒性是否存在
相关性还有待进一步研究。 试验采用 RP-HPLC 法
测定雪里见中草酸钙针晶含量，该方法简便、易行、
快速，结果准确可靠，可作为雪里见药材质量控制
的方法。 同时该方法为后期比较雪里见药材炮制前
后草酸钙针晶含量影响及机理研究打下了基础。
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表 1 草酸加样回收率试验
重复
1
2
3
4
5
6
样品中草酸含量
mg
2.197 8
2.196 7
2.200 0
2.200 0
2.203 3
2.200 0
草酸加入量
mg
2.000
2.000
2.000
2.000
2.000
2.000
实测量
mg
4.238 6
4.149 1
4.224 7
4.196 6
4.217 1
4.199 1
加样回收率
%
102.04
97.62
101.23
99.83
100.69
99.95
平均值
%
100.23
RSD
%
1.52
表 2 雪里见中草酸钙含量（n＝3）
批号
2013093001
2013093002
2013093003
购买地点
贵州省贵阳市万东桥药材市场
贵州省贵阳市万东桥药材市场
湖南省麻阳苗族自治县
草酸钙含量//%
2.948
2.144
2.100
（责任编辑 王晓芳）
A.草酸对照；B.雪里见；1．草酸
图 3 对照品和样品的 HPLC 色谱图
1
响
应
值
//m
AU
0 2 4 6 8 10 12 14
保留时间//min
700
600
500
400
300
200
100
0
响
应
值
//m
AU
1
0 2 4 6 8 10 12 14
保留时间//min
700
600
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400
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100
0
A
B
96