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内蒙古中东部草原羽茅内生真菌的分类



全 文 :Mycosystema
菌 物 学 报 15 November 2008, 27(6): 841-851

jwxt@im.ac.cn
ISSN1672-6472 CN11-5180Q
©2008 Institute of Microbiology, CAS, all rights reserved.






内蒙古中东部草原羽茅内生真菌的分类
王银华 任安芝 魏宇昆 张欣 谢凤行 林枫 高玉葆*
南开大学生命科学学院 天津 300071


摘 要:从内蒙古中东部草原 7 个不同地理种群的羽茅 Achnatherum sibiricum 中分离、培养得到 484 株
内生真菌,根据其形态学特征进行了分类学鉴定。结果表明,其中大部分菌株属于 Neotyphodium 内生真
菌,并发现有少量 Neotyphodium 有性型 Epichloё菌株存在。通过与已发表模式菌株的比较,鉴定其中两
个种为 N. chisosum 和 N. huerfanum。N. chisosum 为羽茅内生真菌的优势种,而 N. huerfanum 是首次在羽
茅中被发现。对其余暂未能确定种的菌株的菌落和显微形态特征进行了详细描述。不同地理种群羽茅内
生真菌的分离率有自东向西增加的趋势,而内生真菌的形态多样性有自东向西减少的趋势。
关键词:Neotyphodium,Epichloё,形态多样性,菌种鉴定

Endophytic fungi from Achnatherum sibiricum (L.) Keng
in mid-eastern Inner Mongolia steppe
WANG Yin-Hua REN An-Zhi WEI Yu-Kun ZHANG Xin XIE Feng-Xing
LIN Feng GAO Yu-Bao*
College of Life Sciences, Nankai University, Tianjin 300071, China
Abstract: A total of 484 endophytic fungal isolates were obtained and purified from 7 different geographic
populations of Achnatherum sibiricum. Two species of endophytic Neotyphodium were identified. They were N.
chisosum and N. huerfanum. The former exists in all of the geographic populations of Achnatherum sibiricum
and become a dominant endophytic fungal species, and the latter has not been reported previously in A. sibiricum.
Morphological characteristics of the unidentified isolates were described in detail. The isolation rate of

基金项目:国家重点基础研究发展规划项目(No. 2007CB106802);国家自然科学基金项目(No. 30770348);天津市自然科学
基金项目(No. 06YFJMJC11600)
*Corresponding author. E-mail: ybgao@nankai.edu.cn
收稿日期:2008-03-26,接受日期:2008-04-01
DOI:10.13346/j.mycosystema.2008.06.008
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endophytic fungi in A. sibiricum showed an ascending trend from the east to the west, while the morphological
diversity of the fungi showed a trend of ascendant from the west to the east.
Key words: Neotyphodium, Epichloё, morphological diversity, identification


内生真菌(endophytic fungi)是指那些在其生活史中的某一时期生活在植物组织内对
植物没有引起明显病害症状的真菌(Petrini 1991)。植物-内生真菌共生体在自然界中是普
遍存在的。根据 Petrini(1991)的估算,每种植物平均有 4-5 种专性内生真菌,全世界内
生真菌种类在 100 万种以上。目前,人们已经发现近 80 属 290 多种禾本科植物中含有内
生真菌(纪燕玲 2002;南志标和李春杰 2004),其中以早熟禾亚科植物中的分布最为普
遍(Chapman & Peat 1992),人们已经在该亚科约 30%的种中发现内生真菌(White et al.
1993)。目前已知的禾本科植物内生真菌共有 8 个属,其中被广泛研究的是 Epichloё 属和
其无性型 Neotyphodium 属(Christensen et al. 2002)。已命名的 Epichloё属 10 种内生真菌
(Schardl & Leuchtmann 1999)和 Neotyphodium 属 16 种内生真菌(南志标和李春杰 2004)
能与禾本科中 23 属植物形成共生体。我国已在 14 属 43 个种(种群)天然草地禾草中发
现内生真菌(南志标和李春杰 2004),但明确其分类地位且命名的却很少。
羽茅 Achnatherum sibiricum (L.) Keng 是禾本科芨芨草属中一种多年生草本植物,生态
幅较宽,多见于我国东北、华北和黄土高原,内蒙古的各类草场中也较为常见(马毓泉
1985)。到目前为止,禾本科芨芨草属中只有分布于我国天然草原的醉马草 Achnatherum
inebrians (Hance) Keng 以及分布于美洲大陆的睡眠草 Achnatherum robustum (Vasey)
Barkworth 被报道感染 Neotyphodium 属内生真菌,与各自共生的此属内生真菌分别被命名
为 N. gansuense C.J. Li et Z.B. Nan(Li & Nan 2004)和 N. chisosum J.F. White & Morgan-Jones
(Jones et al. 2000)。本实验室连续多年的野外调查研究发现,不同地理种群的羽茅均感染
内生真菌,而且感染率普遍很高。与感染内生真菌的醉马草和睡眠草不同的是,感染内生
真菌的羽茅并不具明显的生物毒性,是一种新的禾草-内生真菌共生体,目前对其所含内生
真菌的种类还鲜有报道。
本文对分离自内蒙古中东部草原 7 个不同地理种群羽茅的内生真菌进行了研究,初步
鉴定了分离得到的菌株,同时对不同地理种群羽茅内生真菌的形态多样性进行了比较,以
期探索羽茅内生真菌的基本特性,为更深入了解羽茅-内生真菌这一新的禾草-内生真菌共
生体的共生关系提供实验依据。
1 材料和方法
1.1 实验材料
以内蒙古中东部典型草原和草甸草原为考察区域,自西向东设置 6 个采样点(图 1)、
7 个地理种群[在定位站(中科院草原生态系统定位研究站的简称)样地Ⅱ设围栏内和围栏
外 2 个种群,其余每个采样点 1 个种群]。在每个种群随机选取已成熟的羽茅 30 株,株
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图 1 六个采样地点的地理位置示意图
Fig. 1 The geographic location of the six sample sites of Achnatherum sibiricum in Inner Mongolia.

表 1 种群所在生境的地理位置及自然概况
Table 1 The environmental data for the main populations of Achnatherum sibiricum in Inner Mongolia
种群编号
Population
code
采样地点
Sample site
经度(°E)/纬度
(°N)
Longitude(°E)/
Latitude(°N)
海拔高

Altitude
(m)
年平均降雨

Annual
precipitation
(mm)
年平均温

Annual
mean
temperature
(℃)
日照
时间
Sun-
light
time
(h)
De
Martonne
干燥度﹡
De
Martonne
Drought
index﹡
群落类型
Community
type
HLE 海拉尔 Hailar
119.40/
49.06 629 350 -2.0 2766 43.8
草甸草原
Meadow
steppe
AES 阿尔山 Arxan
119.55/
47.12 1122 460 -3.1 1440 65.7
林缘草甸
Forest edge
steppe
HLGL 霍林郭勒 Huolin Gol
119.45/
45.25 990 340 1.47 2870 29.6
典型草原
Typical
steppe
XWZMQ 西乌珠穆沁 Xi Ujimqin
117.60/
44.58 996 340 1.47 2870 29.6
草甸草原
Meadow
steppe
DWZ
定位站样地 I
The sample site I of
Grassland Ecosystem
Research Station,
CAS
116.42/
43.38 1190 350 1.6 2256 30.2
浑善达克
沙地边缘
Edge of
Otindag
sandy land
YCN &
YCW
定位站样地Ⅱ围栏
内和围栏外
Within and outside
of herbivore
enclosure of the
sample site II of
Grassland Ecosystem
Research Station,
CAS
115.04/
43.58 1250 350 1.6 2496 30.2
典型草原
Typical
steppe
注:*De Martonne 干燥度的计算公式为:P/(T+10),其中 P 表示年平均降雨量,T 表示年平均温度.
Note: *De Martonne drought index = P/ (T+10); P, annual precipitation; T, mean temperature.
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间距离大于 5m。将穗剪下分别放入 30 个纸袋中,晾干,带回实验室 4℃冰箱保存。6 个
地点的地理位置和自然概况分别见图 1 和表 1。
1.2 实验方法
1.2.1 内生真菌的分离与纯化:内生真菌的分离参考 Dapprich 等(1996)的方法,将含有
内生真菌的羽茅种子经表面消毒后,放置于 PDA 培养基 25℃恒温暗培养,待长出白色典
型的菌落 2 周后挑取菌落边缘的少量菌丝转接到新的 PDA 平板上培养,如此重复培养 3
次,得到纯培养物,并记录每个种群内生真菌的分离率。分离率(isolation rate,IR)是指
得到的所有内生真菌菌株的总数除以所有被培育的植物组织片段的总数。它可以度量在一
个特定的植物组织样品中内生真菌丰度(王宇 2004)。每个种群的接种数为 120 粒(6 粒/
皿× 20 皿)。
1.2.2 内生真菌的鉴定:从纯化后单一且形态稳定的菌落边缘挑取尽可能少的菌丝转接到
PDA 平板,25℃暗培养,4 周后观测记录菌落形态,并用十字法测定菌落的线性生长速率。
从纯化后菌落的形态及测得的生长速率看,从每个羽茅植株的 6 粒种子中分离得到的菌株
均相同,鉴于此,本实验对各个植株挑选一个菌株,分别编号为 1、2、3……。以下的实
验只对上述菌株展开,分别是 HLE 1-20,AES 1-19,HLGL 1-20,XWZMQ 1-17,DWZ 1-17,
YCN 1-18,YCW 1-6(在菌株的继代过程中部分菌株感染了杂菌,无法继续使用,因此各
种群所分离的株数有所减少)。
检测以上 117 株菌株的产孢情况,并将不产生分生孢子的菌株采用 MEA(malt extract
agar)(含 2%琼脂和 0.5%麦芽粉)培养基培养(Guo et al. 1998)和扫刷营养体的方法(郭
春秋等 2003)对其进行诱孢处理。然后对所有产孢的菌株进行培养,取直径 7cm 圆形滤
纸,铺于直径 9cm 培养皿内,在滤纸上加约 10mL 无菌 20%甘油溶液,上放 U 形玻璃棒,
在棒上放无菌双凹玻片,然后在载玻片的凹处滴融化后的含 0.5%琼脂的 PDA 培养基,使
成薄片状,挑取菌落边缘少量菌丝转接到滴有培养基的载玻片上,加盖玻片,25℃暗培养。
2 周后镜下观察分生孢子的着生方式和分生孢子梗的形状、大小并利用显微分析软件测量
孢子的大小,每个菌株测量 15 个分生孢子。并通过与已发表模式菌株的比较,确定其分
类地位。
1.2.3 不同地理种群羽茅中内生真菌的分布及形态多样性比较:将暂未鉴定到种的菌株根
据其形态特征将其分为不同的形态群(morphological group)(Bony et al. 2001),将已鉴定
的每个种分别作为一个形态群,计算每个地理种群羽茅内生真菌形态多样性的 Shannon 多
样性指数,比较不同地理种群羽茅内生真菌形态多样性的差异。
2 结果与分析
2.1 不同地理种群羽茅内生真菌的分离率
从采自 7 个不同地理种群的 130 株羽茅共 780(130×6)粒种子中共分离得到 484 株纯
培养菌株(表 2),从数值上看,AES 和 HLE 的分离率较低,而 DWZ 和 YCN 较高,虽然
各个地理种群间种子的分离率无显著差异,但分离率有自东向西增加的趋势。
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表 2 各种群分离菌株数量及分离率
Table 2 Number of isolates and isolation rate from different populations of Achnatherum sibiricum in Inner Mongolia
菌种编号
Population code
HLE AES HLGL XWZMQ DWZ YCN YCW 总计 Total
植物株数 A. sibiricum plant No. 20 20 20 20 20 20 10 130
分离菌数 Number of isolates 66 65 72 80 84 82 35 484
分离率(%) Isolation rate (%) 55a 54.2a 60a 63.3a 70a 68.3a 63.3a ——
注:不相同字母表示差异显著 p<0.05,相同字母表示差异不显著 p>0.05.
Note: Different letters within each row indicate a significant difference P<0.05, while same letters denote non-significant
difference P>0.05.

2.2 羽茅内生真菌的分类鉴定
分离所得的112株内生真菌在PDA培养基上普遍形成白色绒毛状菌落,形成半球形至
卵球形的分生孢子,在培养基上均未发现其有性孢子,生长速度比较缓慢,属无性型
Neotyphodiun属内生真菌(Glenn et al. 1996),占分离总数的95.7%。通过与模式菌株的比
较,将其中的51株鉴定为N. chisosum(图2,表3),16株鉴定为N. huerfanum(图2,表3)。
其他45株由于与已报道的Neotyphodium属任何模式菌株均不吻合,因此我们未能将其鉴定
到种。
其余5株内生真菌的菌落形态特征与已报道的Neotyphodium属的形态特征有很大的差
别,除此之外生长速率比已报道的 Neotyphodium 属内生真菌的生长速率(0.03-1.5mm/d)
(Li & Nan 2004)快很多,且在野外调查中我们在三个种群(XWZMQ,HLGL,AES)
的羽茅旗叶上发现了子座的存在,所以我们初步推断其为 Neotyphodium 属的有性型
Epichloё,但由于没有成功分离培养得到子座的菌落,因此还未能对其进行种的鉴定(各
菌种的形态特征、菌株编号和分离地点见下文)。

表 3 羽茅内生真菌的种群组成
Table 3 Endophytic fungi in Achnatherum sibiricum in Inner Mongolia

Genus

Species
菌株数目
Number of isolates
出现百分数(%)
Frequency (%)
N. chisosum 51 43.6
N. huerfanum 16 13.7 Neotyphodium
Neotyphodium spp. 45 38.4
Epichloё Epichloё spp. 5 4.3


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2.3 羽茅内生真菌的形态多样性
将未能鉴定到种的菌株根据其形态特征分为四个形态群(morphological group):MG1、
MG2、MG3 和 MG4(图 2),将 N. chisosum 和 N. huerfanum 分别作为一个形态群,计算
不同地理种群羽茅内生真菌形态多样性的 Shannon 多样性指数(表 4)。结果表明不同地理
种群羽茅内生真菌的形态多样性有明显差异,如位于最西部种群 YCW 和 YCN 的内生真
菌的 Shannon 多样性指数为 0.34 和 0.37,而位于最东部 HLE 种群的内生真菌形态多样性
为 0.61,表现出自西向东逐渐增加的趋势。

表 4 不同地理种群羽茅内生真菌的 Shannon 多样性指数
Table 4 Shannon’s diversity index of endophytic fungi from different populations of Achnatherum sibiricum in Inner Mongolia
菌种编号
Population code
YCN YCW DWZ XWZMQ HLGL AES HLE
Shannon 多样性指数
Shannon’s diversity index
0.34 0.37 0.4 0.54 0.51 0.52 0.61

Neotyphodium chisosum (J.F. White & Morgan-Jones) A.E. Glenn, C.W. Bacon & Hanlin,
Mycologia 88(3): 377, 1996. 图 2-A,B,C
25℃暗培养条件下,菌落在 PDA 培养基上呈白色或浅灰色,菌丝致密,从培养初期
直到长为稳定的菌落均无气生菌丝出现,且生长速度极为缓慢,生长速率为 0.38-0.55mm/d,
菌落中间有时产生蜜色分泌液滴;分生孢子梗直立或弯曲,梗基部无横隔膜,顶部有缢缩,
长 10-21µm,顶部宽 1.0-1.2µm,基部宽 2.0-3.0µm;分生孢子多为半月形和弯月形,分生
孢子长 3-4.6µm,宽 1.7-2.2µm,单个顶生于孢子梗上。
分离地点及菌株编号:阿尔山(AES3、AES6、AES8、AES9、AES14),定位站样地
Ⅰ(DWZ1、DWZ2、DWZ4、DWZ5、DWZ6、DWZ10、DWZ11、DWZ13、DWZ14、DWZ17),
海拉尔(HLE4、HLE7、HLE8、HLE9、HLE11、HLE15、HLE16、HLE18、HLE20),霍
林郭勒(HLGL1、HLGL 8、HLGL9、HLGL10、HLGL11、HLGL12、HLGL16、HLGL17、
HLGL19),西乌珠穆沁(XWZMQ4、XWZMQ8、XWZMQ11、XWZMQ12、XWZMQ13),
定位站样地Ⅱ围栏内(YCN2、YCN3、YCN4、YCN8、YCN12、YCN13、YCN14、YCN15、
YCN18),定位站样地Ⅱ围栏外(YCW1、YCW3、YCW4、YCW6)。
Neotyphodium huerfanum (J.F. White, G.T. Cole & Morgan-Jones) A.E. Glenn, C.W. Bacon &
Hanlin, Mycologia 88(3): 378, 1996. 图 2-D,E,F
25℃暗培养条件下,菌落在 PDA 培养基上平铺,初期为白色,随着菌株的生长颜色
变为乳黄色,且伴有黄色素晕圈的产生;菌丝致密,生长速度为 1.11-1.71mm/d;分生孢子
梗直立,长 12-21µm,顶部宽 0.5-0.8µm,基部宽 1.4-1.7µm,基部无隔膜不缢缩;分生孢
子多椭圆形和半月形,单个顶生,分生孢子长 2.9-3.7µm,宽 1.6-2µm,偶有厚垣孢子产生。
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图 2 羽茅内生真菌的菌落、分生孢子及分生孢子梗 A,B,C:Neotyphodium chisosum 的菌落,分生孢子(750×)
和分生孢子梗(750×);D,E,F:Neotyphodium huerfanum 的菌落,分生孢子(750×)和分生孢子梗(750×);G,H,I:MG1
的菌落,分生孢子(750×)和分生孢子梗(750×);J,K,L:MG2 的菌落,分生孢子(750×)和分生孢子梗(750×);M,
N:MG3 的菌落;O,P,Q:MG4 的菌落,分生孢子(375×)和分生孢子梗(750×).
Fig. 2 Colony, conidia and condiophores of endophytic fungi from Achnatherum sibiricum in Inner Mongolia. A-C: colony (A),
conidia (B) (750×) and condiophores (C) (750×) of Neotyphodium chisosum; D-F: colony (D), conidia (E) (750×) and
condiophores (F) (750×) of Neotyphodium huerfanum; G-I: colony (G), conidia (H) (750×) and condiophores (I) (750×) of
MG1; J-L: colony (J), conidia (K) (750×) and condiophores (L) (750×) of MG2; M-N: colonies of MG3; O-Q: colony (O),
conidia (P) (750×) and condiophores (Q) (375×) of MG4.
848 Mycosystema
分离地点及菌株编号:定位站样地Ⅰ(DWZ3、DWZ9、DWZ12、DWZ15、DWZ16),
海拉尔(HLE2、HLE14),霍林郭勒(HLGL14、HLGL18),西乌珠穆沁(XWZMQ1、
XWZMQ2、XWZMQ3、XWZMQ6、XWZMQ7、XWZMQ9、XWZMQ17)。
Neotyphodium spp.
(1)形态群 MG1 图 2-G,H,I
25℃暗培养条件下,菌落在 PDA 培养基上呈半球形,白色绵毛状,少数有稀疏的气
生菌丝,生长较慢,生长速率为 0.49-1.78mm/d;孢子梗直立,长 15-20µm,上下宽度均一,
顶部宽 1.3-1.4µm,基部宽 1.4-1.5µm;分生孢子卵圆形或椭圆形,长 3.2-4.7µm,宽 1.7-2µm,
单个孢子横向顶生。
分离地点及菌株编号:阿尔山(AES4、AES7、AES13、AES15),定位站样地Ⅰ(DWZ7、
DWZ8),海拉尔(HLE10、HLE12),西乌珠穆沁(XWZMQ10、XWZMQ14、XWZMQ15、
XWZMQ16),定位站样地Ⅱ围栏内(YCN1、YCN7、YCN9、YCN10、YCN11、YCN17),
定位站样地Ⅱ围栏外 YCW2。
(2)形态群 MG2 图 2-J,K,L
25℃暗培养条件下,菌落在 PDA 培养基上平铺,白色或浅灰色,棉质至毡质,有气
生菌丝,菌落周围偶有窄的白灰色区域,生长较快,生长速率为 1.17-1.88mm/d;孢子梗
直立,长 11-15µm,上下宽度较均一,顶部宽 1.0-1.3µm,基部宽 1.3-1.5µm;孢子半月形、
卵圆形或椭圆形,长 3.7-5µm,宽 1.9-2.4µm,单个孢子顶生。
分离地点及菌株编号:阿尔山(AES1、AES2、AES5、AES10、AES11、AES12、AES16、
AES17、AES19),海拉尔(HLE1、HLE3、HLE5、HLE17、HLE19),霍林郭勒(HLGL2、
HLGL3、HLGL4、HLGL6、HLGL13、HLGL15、HLGL20),西乌珠穆沁(XWZMQ5),
定位站样地Ⅱ围栏内(YCN5、YCN6、YCN16),定位站样地Ⅱ围栏外(YCW5)。
Epichloё spp.
(1)形态群 MG3 图 2-M,N
25℃暗培养条件下,在 PDA 培养基上菌落边缘平铺,中央隆起,颜色灰白,略带毡
质,生长速度较快,达到 5.57-6.32mm/d,不产生分生孢子。
分离地点及菌株编号:阿尔山(AES18),海拉尔(HLE6、HLE13)。
(2)形态群 MG4 图 2-O,P,Q
25℃暗培养条件下,在 PDA 培养基上菌落卷曲,白色略带浅黄色,绵毛状,产生大
量气生菌丝,生长速度极快,达 10.57-10.71mm/d,孢子梗直立略弯曲,分生孢子椭圆形,
长 4.3-5µm,宽 1.7-2µm,双孢子顶生。
分离地点及菌株编号:霍林郭勒(HLGL5、HLGL7)。
3 讨论
所分离的117株羽茅内生真菌中,有112株内生真菌在PDA培养基上普遍形成白色棉质
或绒毛状菌落。通过显微形态观察发现有半球形至卵球形的分生孢子,未发现其有性孢子,
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生长速度比较缓慢,在0.37-1.88mm/d之间,属无性型Neotyphodium属内生真菌(Glenn et al.
1996),占分离总数的95.7%,其中51株鉴定为N. chisosum(White & Morgan-Jones 1987;
Glenn et al. 1996),占分离总菌株的43.6%,在7个羽茅地理种群中均有分布,是分布最为
广泛的一种,表明其具有较强的适应性,为羽茅内生真菌的优势菌种;16株鉴定为N.
huerfanum(White et al. 1987;Glenn et al. 1996),占分离总菌株数的13.7%,此种内生真菌
曾被报道存在于美国亚利桑那州的亚利桑那羊茅Festuca arizonica Vasey中(White et al.
1987),本研究首次发现羽茅感染这一内生真菌,在所调查的4个羽茅地理种群中都有分布。
并且在这4个地理种群的羽茅叶鞘中检测到了与种子中N. huerfanum菌丝形态相同的菌丝,
表明此种内生真菌随着宿主植物羽茅的萌发、生长进入了羽茅的地上部分,当羽茅植株成
熟后菌丝又可通过种子侵染下一代羽茅植株,这在一定程度上说明该菌能稳定地存在于羽
茅植株内。因此,本研究中发现的羽茅-N. huerfanum共生体是一种新的共生体系,这对进
一步研究羽茅及其内生真菌之间的相互作用和关系有着重要的意义。由于其余45株内生真
菌的形态特征与已报道的Neotyphodium属内生真菌的模式菌株无一吻合,可能为新种,对
它们更进一步的鉴定正在进行之中。
本研究发现有少量菌株在PDA培养基上表现出Epichloё属内生真菌的形态特征。野外
调查发现虽然在XWZMQ、HLGL、AES三个羽茅种群的羽茅旗叶上发现了真菌子座的存
在,但数量极少,即使在分蘖比较多的羽茅植株中也只是极少分蘖产生真菌子座。这说明
羽茅中的Epichloё真菌很少在植物体表形成子座进行有性繁殖,而以内生作为主要生存形
式,对宿主的影响小,主要通过种子传播,属于过渡类型TypeⅡ(White et al. 1993)。这
一特点与紫羊茅Festuca rubra L.等羊茅属植物上的Epichloё属内生真菌相类似(Schardl et
al. 2004)。
Schulthess & Faeth(1998)从 5 个亚利桑那羊茅 Festuca arizonica 种群的叶片中分离
得到了 400 多株内生真菌菌株,其中 Neotyphodium starrii J.F. White & Morgan-Jones 和其他
13 个形态型的内生真菌占较大比例,而其他大多数菌株都仅被分离出 1 次,表明天然禾草
中内生真菌具有较高的多样性。本研究中不同地理种群羽茅内生真菌的菌落颜色、质地、
生长速率、分生孢子大小、形状等形态特征间存在较大的差异,亦表现出较高的形态多样
性。这与魏宇昆等(2006)得到羽茅内生真菌具有较高的遗传多样性的研究结果相一致。
这种较高的形态多样性显示出羽茅内生真菌丰富的种质资源。
本研究发现不同地理种群羽茅内生真菌的形态多样性呈现出自西向东逐渐增加的趋
势。Ahlholm 等(2002)指出内生真菌的多样性受宿主植物基因型及所处环境的影响。本
文对羽茅内生真菌的形态多样性与环境因子间的关系进行了分析,结果表明羽茅内生真菌
的形态多样性与各羽茅地理种群所处地点的海拔高度呈显著负相关而与年平均气温、年降
雨量、日照时间及干燥度均无显著相关,这表明其形态多样性可能是受与海拔高度相关的
多种环境因子的综合影响。另外,生长于不同地点的羽茅的基因型也会不同,因此其形态
多样性也可能与羽茅的基因型有关。羽茅内生真菌的形态多样性的影响因子及影响机制还
有待进一步深入研究。
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另外,在本研究中我们注意到只要表面消毒充分,从含有内生真菌的羽茅种子中几乎
没有分离到其他微生物。这说明羽茅内生真菌对其他内生微生物和植物病原菌等可能有一
定的抑制作用。这一点还需后续抑菌实验的进一步证实。

[REFERENCES]
Ahlholm JU, Helander M, Henriksson J, Metzler M, Saikkonen K, 2002. Environmental conditions and host genotype direct
genetic diversity of Venturia ditricha, a fungal endophyte of birch trees. Evolution, 56(8): 1566-1573
Bony S, Pichon N, Ravel C, Durix A, Balfourier F, Guillaumin JJ, 2001. The relationship between mycotoxin synthesis and
isolate morphology in fungal endophytes of Lolium perenne. New Phytologist, 152(1): 125-137
Chapman GP, Peat WE, 1992. An introduction to the grasses (including bamboos and cereals). Wallingford, Oxon, UK. Tucson,
AZ, USA: CAB International
Christensen MJ, Bennett RJ, Schmid J, 2002. Growth of Epichloё/Neotyphodium and p-endophytes in leaves of Lolium and
Festuca grasses. Mycological Research, 106(1): 93-106
Dapprich P, Paul VH, Krohn K, 1996. Incidence of Acremonium endophytes in selected German pastures and the contents of
alkaloids in Lolium perenne. In: Krohn K, Paul VH (eds.) The 2nd international conference on harmful and beneficial
microorganisms in grassland, pastures and turf. International Organization for Biological and Integrated Control of
Noxious Animals and Plants, 19(7): 103-114
Glenn AE, Bacon CW, Price R, 1996. Molecular phologeny of Acremonium and its taxonomic implications. Mycologia, 88(3):
369-383
Guo CQ, Luo YL, Zhang ZY, 2003. Experiment on inducing sporogenesis of several fungi. Journal of Hainan University
(Natural Science Edition), 21(1): 74-77(in Chinese)
Guo LD, Hyde KD, Liew ECY, 1998. A method to promote sporulation in palm endophytic fungi. Fungal Diversity, 1:
105-109
Ji YL, 2002. Basic research of endophytes in Roegneria species (Poaceae). MS Thesis. College of Life Science of Nanjing
Agricultural University (in Chinese)
Jones TA, Ralphs MH, Gardner DR, Chatterton NJ, 2000. Cattle prefer endophyte-free robust needlegrass. Journal of Range
Management, 53: 427-431
Li CJ, Nan ZB, 2004. A new Neotyphodium species symbiotic with drunken horse grass (Achnatherum inebrians) in China.
Mycotaxon, 90(1): 141-147
Ma YQ (ed.), 1985. Flora Inner Mongolia vol.7. Inner Mongolia Peoples Press, Hohhot. 1-282 (in Chinese)
Nan ZB, Li CJ, 2004. Roles of the grass-Neotyphodium association in pastoral agriculture systems. Acta Ecologica Sinica,
24(3): 605-616 (in Chinese)
Petrini O, 1991. Fungal endophytes of tree leaves. In: Andrews JH, Hirano SS (eds.) Microbial ecology of leaves.
Springer-Verlag, New York. 179-197
Schardl CL, Leuchtmann A, 1999. Three new species of Epichloё symbionts with North American grasses. Mycologia, 91(1):
95-107
Vol.27 No.6 851
http://journals.im.ac.cn/jwxtcn
Schardl CL, Leuchtmann A, Spiering MJ, 2004. Symbioses of grasses with seedborne fungal endophytes. Annual Review of
Plant Biology, 55: 315-340
Schulthess FM, Faeth SH, 1998. Distribution, abundances, and associations of the endophytic fungal community of Arizona
fescue (Festuca arizonica). Mycologia, 90(4): 569-578
Wang Y, 2004. Endophytic fungi of pine in China. MS Thesis. Graduate School of Chinese Academy of Sciences, Beijing (in
Chinese)
Wei YK, Gao YB, Li C, Xu H, Ren AZ, 2006. Genetic diversity of Neotyphodium endophytes isolated from Achnatherum
sibiricum populations in mid and eastern Inner Mongolia steppe, China. Journal of Plant Ecology, 30(4): 640-690 (in
Chinese)
White JF, Cole GT, Morgan-Jones G, 1987. Endophyte-host associations in forage grasses. VI. A new species of Acremonium
isolated from Festuca arizonica. Mycologia, 79: 148-152
White JF, Morgan-Jones G, 1987. Endophyte-host associations in forage grasses. IX. Concerning Acremonium chisosum.
Mycotaxon, 29: 489-500
White JF, Morgan-Jones G, Morrow AC, 1993. Taxonomy, life cycle, reproduction and detection of Acremonium endophytes.
Agriculture Ecosystems and Environment, 44: 13-37
[附中文参考文献]
郭春秋,罗永兰,张志元,2003. 几种真菌的诱导产孢试验. 海南大学学报(自然科学版),21(1): 74-77
纪燕玲,2002. 鹅观草植物内生真菌的基础研究. 硕士学位论文. 南京农业大学生命科学学院
马毓泉(主编),1985. 内蒙古植物志(第七卷). 呼和浩特:内蒙古人民出版社. 1-282
南志标,李春杰,2004. 禾草-内生真菌共生体在草地农业系统中的作用. 生态学报,24(3): 605-616
王宇,2004. 油松植物内生真菌研究. 硕士学位论文. 北京:中国科学院研究生院
魏宇昆,高玉葆,李川,许华,任安芝,2006. 内蒙古中东部草原羽茅内生真菌的遗传多样性. 植物生态学报,30(4): 640-649