全 文 ：!#$
黄媛媛，张朝辉，李八方，赵! 雪
（中国海洋大学食品科学与工程学院，山东青岛 !##$）
摘% 要：研究了大叶藻中黄酮的乙醇提取工艺，以大叶藻中黄酮提取率为考察指标，通过单因素和正交实验，考察提取
温度、乙醇浓度、固液比、提取时间对黄酮提取率的影响，结果确定最佳提取工艺条件为：提取温度 &&’，提取固液比
()$#，提取溶剂乙醇浓度 *&+，提取时间 $,。在最佳提取条件下，提取率可高达 (-*#+。
关键词：大叶藻，黄酮，乙醇，正交实验
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中图分类号：E7!#(-(% % % % 文献标识码：F% % % % 文 章 编 号：(##!.#$#（!#(#）((.#!G(.#$
收稿日期：!##G.((.(
作者简介：黄媛媛（(G*.），女，硕士，研究方向：海洋生物活性物质。
基金项目：国家自然科学基金（$#HH(HI）；教育部重点项目（(#G#GG）。
% % 海草是一类生活在温带海域沿岸浅水中的单子
叶草本植物。海草有发育良好的根状茎（水平方向
的茎），叶片柔软、呈带状。目前中国记录有 (I 种海
草，如喜盐草、大叶藻等。大叶藻（ !#$%&’ (’&)*’
+-），隶属于眼子菜科大叶藻属（!#$%&’ +-），分布于
我国河北和山东等沿海地区，朝鲜、日本、俄罗斯等
地也有分布。大叶藻的叶子细长呈带状，长 $# J
(K，宽#-HJ(-&8K，呈鲜艳绿色，春夏两季生长繁
茂。黄酮类化合物是泛指具有两个酚羟基的苯环（L
.与 F.环）通过中央三碳原子相互联结而成的一系
列化合物［(］。黄酮类化合物具有广泛的生物活性，包
括抗氧化、抗突变、抗衰老、抗肿瘤、抗菌等，是茶及
众多中草药如黄芩、银杏、沙棘等的活性成分。黄酮
可以改善血液循环，降低胆固醇，向天果中的黄酮还
含有一种 ML5抗凝因子，这些作用大大降低了心脑
血管疾病的发病率，改善心脑血管疾病的症状。黄
酮类化合物具有抗氧化活性，主要表现在减少自由
基的产生和清除自由基两个方面［!］，是延缓衰老的重
要活性物质。目前国内尚未有从海草———大叶藻中
提取黄酮类物质的研究报道，本研究的目的是从大
叶藻中提取黄酮化合物，为进一步的研究打下基础。
9! 材料与方法
9:9! 材料与仪器
大叶藻% 采于青岛栈桥附近，低温烘干后用捣
碎机粉碎制成粉末；芦丁标准品 % 购于南京替斯艾
么中药研究所；乙醇、氢氧化钠、亚硝酸钠、硝酸铝%
均为分析纯。
5N(## 捣碎机 % 天津市泰斯特仪器有限公司；
OO. I 数显恒温水浴锅 % 国华电器有限公司；
POQ.G#$#L电热恒温鼓风干燥箱% 上海精宏实验设
备有限公司；L(!#I 电子天平% 梅特勒.托利多仪器
（上海）有限公司；?R.!(#!M/ 紫外可见分光光度
计% 龙尼柯（上海）仪器有限公司；量筒，容量瓶，剪
刀等。
9:;! 标准曲线的绘制［<］
准确称取 (#K3标准芦丁对照品，以 G&+乙醇溶
液定容至 &#KS，摇匀即得浓度为 #-!K3 T KS 标样储
备液，准确移取 #-#、!-#、!-&、$-#、$-&、I-#KS 芦丁标样
储备液于 个 !&KS容量瓶中，分别加入 #-$KS浓度
为 &+的 U;U>! 溶液，摇匀后静置 K9:，加入 #-$KS
浓度为 (#+的 L1（U>$）$ 溶液，摇匀后静置 K9:，再
加入 !KS浓度为 I+的 U;>O 溶液，摇匀，用 G&+乙
醇定容至刻度，摇匀后静置 (&K9:。以 G&+乙醇为空
白，用 (8K 比色皿，在 I##J##:K 波长范围内，测得
最大吸收波长，然后在最大吸收波长处分别测定不
同浓度的芦丁标准品的吸光度。以吸光度 V 对浓度
W进行回归。计算回归方程和相关系数。
9:DOI:10.13386/j.issn1002-0306.2010.11.013
!!#
!#!$ 乙醇浓度对黄酮提取率的影响$ 在提取温度
为室温 %&’的条件下，选取料液比为 !(%&，提取 %)，
做提取溶剂乙醇浓度的单因素实验。选取乙醇浓度
为 *+,、++,、-+,、.+,、/+,、0+,。
!#%$ 提取时间对黄酮提取率的影响$ 在乙醇浓度
为 ++,的条件下，选取料液比为 !(%&，温度为 %&’，
做提取时间的单因素实验，选择时间为 !、%、#、*、
+、-)。
!##$ 料液比对黄酮提取率的影响 $ 在提取温度
%&’、乙醇浓度 ++,、提取时间 %)，做料液比的单因
素实验，料液比为 !(!+、!(%&、!(%+、!(#&、!(#+、!(*&。
!#*$ 温度对黄酮提取率的影响$ 在提取时间 %)、
乙醇浓度 ++,、料液比为 ! (%& 的条件下，做提取温
度的单因素实验。选择温度为 %+、#+、*+、++、
-+、.+’。
!#+$ 黄酮提取率计算
$ 黄酮提取率（,）
1黄酮浓度 2溶液体积
原料质量
2 !&&,
式中：黄酮浓度，34 5 36；溶液体积，36；原料质
量，34。
!#$ 大叶藻中黄酮提取的正交实验
在以上的单因素实验的基础上，以乙醇浓度、提
取温度、提取时间、料液比为因素设计正交实验，以
确定大叶藻中黄酮的最佳提取工艺条件，因素水平
表见表 !。
表 !$ 因素水平表
水平
因素
7溶剂浓度
（,）
8提取时间
（)）
9料液比
（4 5 36）
:提取温度
（’）
! ++ % !(#& *+
% -+ # !(#+ ++
# .+ * !(*& -+
* /+ + !(*+ .+
%$ 结果与分析
%!$ 标准曲线
在 *&&;-&&<3内测得芦丁标准品的最大吸收波
长为 +&&<3，在此波长下得到芦丁标准曲线，见图 !。
图 !$ 芦丁标准曲线
%%$ 单因素实验
%%!$ 乙醇浓度对黄酮提取率的影响$ 从图 % 可以
看出，随着乙醇浓度的升高，黄酮提取率上升，乙醇
浓度达到 .+,左右时，黄酮提取率达到最大值，而后
随着乙醇浓度的增加黄酮提取率下降，这说明 .+,
乙醇浓度是提取黄酮的最佳乙醇浓度。造成这种现
象的主要原因是乙醇浓度不同，极性也不相同，.+,
乙醇的极性与大叶藻中黄酮的极性相似［*］，随着乙醇
浓度的升高，一些脂溶性物质的溶出增加，影响了黄
酮的浸出。
图 %$ 乙醇浓度对黄酮提取率的影响
%%%$ 提取时间对黄酮提取率的影响$ 从图 # 可以
看出，随着提取时间的延长，黄酮的提取率先上升后
下降，在 #) 时达到最大值。原因是时间过短，黄酮
物质还未充分溶出，时间在 #) 时，黄酮溶出已达平
衡，再延长提取时间，一些热敏性组分被破坏或提取
时间过长乙醇挥发导致浓度下降而使提取率下降。
图 #$ 提取时间对黄酮提取率的影响
%%#$ 料液比对黄酮提取率的影响$ 从图 * 可以看
出，随着料液比的增加，黄酮提取率在不断上升，但
是随着料液比的增加，后续分离提纯的难度也越来
越大，因此，在所做单因素实验中，料液比的最大值
选择 !(*&。
图 *$ 提取料液比对黄酮提取率的影响
%%*$ 提取温度对黄酮提取率的影响$ 从图 + 可以
看出，随着温度的升高，黄酮提取率在不断上升，在
所选取的温度范围内，最高温度 .+’，总黄酮的提取
率达到最大。由于黄酮对温度的不稳定性，较高温
度会对黄酮造成一定量的分解或是影响其活性，所
以选取温度 .+’为本实验黄酮的提取温度［+］。
%&$ 正交实验
从表 % 的正交实验结果可知，大叶藻中黄酮的
最佳提取工艺条件为：提取溶剂乙醇浓度为 /+,，提
取时间 #)，提取料液比为 !(#&，提取温度 ++’，在此
条件下，提取率最高。各种因素对提取效果影响的
主次顺序为：提取时间 =提取料液比 =提取温度 =
$ $ $ $ （下转第 #+0 页）
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［A］管敦仪 8啤酒工业手册（修订版）［K］8北京：中国轻工业
出版社，
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（上接第 ?表 LM 方差分析
方差来源 偏差平方和（N） 自由度 ( 均方和 O值 临界值 显著性
9
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总和 H
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图 BM 提取温度对黄酮提取率的影响
提取溶剂乙醇的浓度；通过方差分析可知，料液比对
提取率影响显著。
表 ?M C;>（@
B）正交实验设计及结果
实验号 9 : F P R
黄酮
提取率
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因素主%次 :FP9
最优组合条件 :?F;P?9@
! 结论
本文考察了影响大叶藻黄酮乙醇提取的各因素
条件，通过单因素和正交实验确定了大叶藻黄酮的
乙醇提取最佳工艺条件为：提取温度 BBU，提取时间
L2，乙醇浓度 ABS，料液比 ; VLJ。在最佳提取条件
下，提取率可达 ;8AJS。将粗提取物经过二次结晶，
会得到纯度极高的大叶藻黄酮制品。
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R\/+-..&’$ (+’) C-#G-. ’( !#$%&’ (’&)*’ +8［ 7］89+*2&G-. ’(
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