全 文 ：络攀.卷第 4期
z g a s年 2 2月
西北农业大学学报 -
人 e t a u 牡 i v . s o p t e n t r i o o a l i Q e e i do n t . A g r i。 ,
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用梯度凝胶电泳分离雀麦花叶病毒核酸组分
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张满良 、
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雀麦花叶病劫 梯度凝胶电泳 , 核酸分离
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雀麦花叶病毒 ( B r o m e m o s “ i “ v i r .us BM v ) 易于获得性质稳定一和越度毯太的痛毒 制
剂 , 从而为研究多组分病毒 R N A 的复制和侵染等方面提供了一个理想的 材 料 。 但 在 分 离
R N A不同组分时 , 前人均采用 2 . 4%的聚丙烯酞胺凝胶 电 泳 。 为了提高 B M V 一 R N A 四种 组
分的分离效果 , 采用了梯度聚丙烯酞胺凝胶电泳 口 一 ’ ` “ - 一 了 , 立
试验用 B M v 一 G株系 , 在大麦上繁殖 1 4天启剪下病吓、 , 一 二 。。亡冰箱徐存备威若威v 的
提纯和 B M V 一 R N A 的分离参考L a en [ ’ 1和 魏 宁生〔 , ’ 的方法 。 为了获得精提纯 的病毒制 剂 ,
除用 P E G ( 6 0 0 0 ) 沉降外 , 进一步采用差速离心 ( Z 0 0 0 o r p m 6 m i n 和4 0 0 0 0 r p m 9 0 m i n ) 。 核
酸的提取是用重蒸的水饱 和酚 (内含。 . 5%皂土 和 1 % S D S ) 降解提取二次 , 然后用乙醚 除
去残留的酚 , 再用冰 乙醇沉淀R N A ( 一 20 ℃ 2 ~ 4 h) , 沉淀溶于蒸馏水中 , 一 60 ℃保存备
用 。
为了制备儿种梯度凝胶 , 先配制 2 . 1% , 3 . 7% , 4 . 7% , 了. 4% 和 2 . 4%的胶液 。 2 . 1% ~
3
.
7%梯度凝胶的配制 , 是先把 2 . 1%胶 液 20 m l装入 ` r B 一 50 梯 度混合器 1 杯中 , 7 . 4%胶液 2 0
m l装入 2 杯 中 (两杯容量各为 50 m l) , 然后在各杯 中按规定量加入过硫酸按和 lr E M E D , 立
即进行磁力搅拌 , 同时通过直径 0 . cI m 的乳胶管开始缓慢灌胶 。 后置室温 (2 。℃ ) 下聚合 ,
则制成 2 . 1一 3 . 7%的梯度凝胶 。 如上法制备 2 . 1~ 4 . 7% , 2 . 1~ 7 . 4% , 4 , 8一 7 . 4 %梯度凝胶 ,
2
.
4%凝胶制备同常规 。
B M V的 R N A : , R N A Z , R N A : 和 R N A 、 的分离 ,是把加少 量蔗糖和臭呀蓝的R N A制备物
分别在 2 . 1~ 3 . 7% , 2 . 1~ 4 . 7 % , 2 . 1一 7 . 4 , 4 . 8 ~ 7 . 4%和 2 . 4% (对照 ) 凝胶板上垂 直 电 泳
2 ~ 2
.
41
。 每块板 10 个样 , 每个样 10 时 。 电泳结束后经固定 、 染色 以及漂洗再观察色带 , 比
较不同处理的现带情况 , 各处理重复二次 。
本文 于 198 7年 12月 26 日收到 。
西北农业大学学报 1吐卷
在不同报脱板上 , B巡 y 。 R N入加种组 分 的迁移距离及现带请况觅附表 。
附 , BM V四种袂赚组分在不同扭胶中的迁移康离
迁移距 离 ( cm 》趁胶 类型 《男 ) 一 认脸次械 一 色带获目 一一 -一资一` , 一 , 一一竹甲一` 尸卜 , 二 , 一一一 , 一~ 一一一总 R N A RN A x RHA : RN如 RN从
.4 压一 1 . 4 2 1 乞.0 ;.1 9
2
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!一 7 . 4 2 1 .4 4 , 4 . 2
2
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1一4 . 下 2 3 2 . 5 , 2 . 7 3 . 0 , 3 . 1 4 . 6 . 4 . 8
2
.
1一3 . 7 2 4 2 . 1. 2 . 5 ’ 2 . 3 . 2 . 7 2 . 9 . 3 . 3 4 . 9 . 5 . 5
2
.
4时照 2 4 3 . 2 , 3 . 5 3 . 8 , 4 . 2 5 , 8 , 6 . 2 7 . 1 , 7 . 4
试验结果表明 , 4 . 8 ~ 7 . 4%和2 . 1~ .7 4%两种梯度凝胶各出现一条色带 , 四种核酸组分
未分离 。 2 . 1、 4 . 7%梯度凝胶出现三条带 , 其中R N A : 和 R N A ` 重合在一起 。 2 . 1~ 3 . 7%和
2
.
4%两种凝胶各出现四条带 , 依次为 RN八 , , R N A : , R N A 。 , R N A ` , 四种核酸组分 全分
离 。 在点样数量 、 电泳等条件相同的情况下 , 2 . 1~ 3 . 7%的梯度凝胶色带颜色深 , 带窄 , 清
晰 , 因而易于观察和切带 , 分离效果明显比2 . 4%凝胶好 。 在R N A含量较低时分离`效果还会
好些 。 这是 由于聚丙烯酸胺梯度凝胶多级分子筛作用的结果 。 :
此项二作在魏宁生教授指夺下 进行 , 并审 定文稿 , 谨此致谢 .
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1 L a o e L C
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K a e s b o r g P
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N a t “ r e N e 毋 B i o l o 夕夕 i , 71 ( z犯 ) 侣 40一 43
2 魏宁生等 . 植物病礴手很 , 1984 ; 14 ( 2 ) : 7主一邓