全 文 ：檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶
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［责任编辑 刘德文］
［收稿日期］ 20131122(018)
［基金项目］ 新疆维吾尔自治区高校科研计划青年教师科研启动基金项目(XJEDU2009S48)
［通讯作者］ * 陈妍，硕士，主管中药师，从事中维药的开发利用及维药物质基础研究，Tel:13201380316，E-mail:chenyan5711@ sina． com
新疆维药欧芹根总黄酮的乙醇提取工艺优选
及其大孔树脂筛选
陈妍1* ，乌莉娅·沙依提2，马亮英1
( 1. 新疆医科大学第二附属医院药剂科，乌鲁木齐 830063;
2. 新疆医科大学附属中医医院药学部，乌鲁木齐 830000)
［摘要］ 目的:优选欧芹根总黄酮的提取工艺并筛选适合其富集纯化的大孔树脂型号。方法:采用 UV测定总黄酮含量，
检测波长 510 nm。以总黄酮提取率和浸膏得率的综合评分为指标，通过正交试验考察提取时间、提取次数、乙醇体积分数及
乙醇用量对欧芹根总黄酮提取工艺的影响;采用静态吸附-洗脱试验优选适合富集欧芹根总黄酮的大孔树脂型号。结果:最佳
提取工艺条件为加 6 倍量 70%乙醇提取 2 次，每次 1 h;总黄酮提取率和浸膏得率分别约 0. 75%，14%。欧芹根总黄酮精制工
艺中分离纯化效果最好的大孔吸附树脂为 D101 型。结论:优选的提取工艺稳定可行，筛选的大孔树脂分离纯化效果良好，为
欧芹根的药物开发提供参考。
［关键词］ 欧芹根;总黄酮;大孔树脂;芦丁;浸膏得率;静态吸附-洗脱试验
［中图分类号］ Ｒ283. 6 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2014)15-0019-03
［doi］ 10． 13422 / j． cnki． syfjx． 2014150019
［网络出版地址］ http:/ /www． cnki． net /kcms /detail /11． 3495． Ｒ． 20140609． 1538． 009． html
［网络出版时间］ 2014-06-09 15:38
Optimization of Ethanol Extraction Technology for Total Flavonoids in Ｒoots
of Petroselinum crispum and Screening of Its Type of Macroporous Ｒesin
CHEN Yan1* ，Wuliya·Shayiti2，MA Liang-ying1
(1. Department of Pharmacy，the Second Affiliated Hospital of Xinjiang Medical University，
Urumqi 830063，China;2. Department of Pharmacy，Affiliated Hospital of
Traditional Chinese Medicine，Xinjiang Medical University，Urumqi 830000，China)
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第 20 卷第 15 期
2014 年 8 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 20，No． 15
Aug．，2014
［Abstract］ Objective:To optimize extraction technology of total flavonoids in roots of Petroselinum
crispum and screen type of macroporous resin which appropriated to its enrichment and purification． Method:UV
was adopted to determine the content of total flavonoids with detection wavelength at 510 nm． With composite score
of yields of total flavonoids and extract as index，orthogonal test was used to optimize extraction process by taking
ethanol concentration，ratio of solid to liquid，extracting time and times as factors;the best type of macroporous
resin was selected by static adsorption-elution test． Ｒesult:Optimum extraction process was as following:
extracted twice with six times the amount of 70% ethanol for one hour per time;yields of total flavonoids and
extract were 0. 75% and 14%， respectively． D101 macroporous resin was the best one for purifying total
flavonoids in roots of P． crispum． Conclusion:This optimized technology was stable and feasible，this screened
resin had good separation and purification effect，this study could provide a reference for drug developmeng of roots
of P． crispum．
［Key words］ roots of Petroselinum crispum;total flavonoids;macroporous resin;rutin;extract yield;
static adsorption-elution test
新疆维药欧芹根被临床广泛用于治疗肝脏疾
病，具有独特的资源及品种优势，但并未得到合理地
开发应用，其临床用药亦缺乏实验依据，除本课题组
外，尚未见关于该药物的研究报道。前期试验发现
该药的有效成分为总黄酮，故本实验以总黄酮提取
率和浸膏得率的综合评分为指标，采用正交试验优
选新疆维药欧芹根的提取工艺，并通过静态吸附-洗
脱试验筛选适合富集欧芹根总黄酮的大孔树脂型
号，为该药味的资源开发与临床推广提供参考。
1 材料
JD200-3 型电子天平(沈阳龙腾电子有限公
司)，TU-1901 型紫外-可见分光光度计(北京普析通
用公司)。欧芹根购自新疆乌市二道桥市场洛克曼
维吾尔医药行，经新疆维吾尔自治区药物研究所张
彦福教授鉴定为伞形科植物欧芹 Petroselinum
crispum (Mill)Hill 的干燥根;AB-8，D4020，D140，
X-5型大孔树脂(天津南开大学化工厂)，D101 型大
孔树脂(天津光复研究所)，100，450，700 型大孔树
脂(河北沧州宝恩集团)。芦丁对照品(批号
20100402，中国食品药品检定研究院)，试剂均为分
析纯。
2 方法与结果
2. 1 总黄酮的含量测定
2. 1. 1 对照品溶液的制备 精密称取干燥至恒重
的芦丁对照品 11. 4 mg，置于 50 mL量瓶中，加适量
无水乙醇溶解，加 85%乙醇定容至刻度，即得。
2. 1. 2 标准曲线绘制 精密移取芦丁对照品溶液
0，0. 2，0. 5，1. 0，2. 0，3. 0，4. 0 mL，分别置于 10 mL
量瓶中，各加入 5%亚硝酸钠和 1%硝酸铝溶液各
0. 3 mL，放置 6 min，加入 4% NaOH溶液 4. 0 mL，用
30%乙醇定容至刻度，混匀，放置 16 min，以相应试
剂为空白，于 510 nm 处测定吸光度(A)，以 A 为纵
坐标，质量浓度(C)为横坐标，得回归方程 A =
0. 009 9C + 0. 0425(r = 0. 995)，线性范围 4. 56 ～
91. 2 mg·L －1。
2. 1. 3 供试品溶液的制备与测定 取提取液过滤，
弃去初滤液，取续滤液作为供试品溶液。精密吸取
3 mL 置于 25 mL 量瓶中，按 2. 1. 2 项下方法于
510 nm处测定 A，计算总黄酮含量。
2. 2 浸膏得率测定 精密吸取样品液 50 mL，置于
干燥至恒重并称重的蒸发皿中，水浴蒸干，105 ℃烘
箱干燥 3 h至恒重，取出，迅速置干燥器中冷却，称
重，重复 3 次，计算醇浸出物量。
2. 3 提取工艺优选 在预试验基础上，选择乙醇体
积分数、乙醇用量、提取时间、提取次数为考察因素，
以总黄酮提取率及浸膏得率的综合评分为指标，综
合评分 =(0. 7 /总黄酮提取率最大值)×总黄酮提
取率 +(0. 3 /浸膏得率最大值)×浸膏得率［1-2］，通
过 L9(3
4)正交试验优选提取工艺，因素水平见表 1，
试验安排及结果见表 2，方差分析见表 3。
表 1 欧芹根总黄酮提取工艺正交试验因素水平
水平
A
乙醇体积
分数 /%
B
乙醇用量
/倍
C
提取时间
/h
D
提取数
/次
1 50 5 1. 0 1
2 70 6 1. 5 2
3 90 7 2. 0 3
由直观分析可知，各因素对提取工艺的影响顺
序为 A ＞ B ＞ D ＞ C。方差分析表明因素 A 对提取工
艺具有显著性影响，其他因素则无显著性影响，结合
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第 20 卷第 15 期
2014 年 8 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 20，No． 15
Aug．，2014
表 2 欧芹根总黄酮提取工艺正交试验安排及直观分析
No． A B C D
总黄酮
提取率
/%
浸膏
得率
/%
综合
评分
1 1 1 1 1 0. 460 14. 36 0. 697
2 1 2 2 2 0. 625 13. 98 0. 844
3 1 3 3 3 0. 600 13. 87 0. 819
4 2 1 2 3 0. 719 16. 07 0. 971
5 2 2 3 1 0. 750 14. 08 0. 963
6 2 3 1 2 0. 680 14. 19 0. 900
7 3 1 3 2 0. 525 11. 09 0. 697
8 3 2 1 3 0. 651 12. 37 0. 840
9 3 3 2 1 0. 545 11. 06 0. 715
K1 0. 787 0. 788 0. 812 0. 792
K2 0. 945 0. 882 0. 843 0. 814
K3 0. 751 0. 811 0. 826 0. 877
Ｒ 0. 194 0. 094 0. 031 0. 085
表 3 综合评分方差分析
变异来源 SS f MS F P
A 0. 064 2 0. 032 64. 00 ＜ 0. 05
B 0. 014 2 0. 007 14. 00 ＞ 0. 05
C 0. 004 2 0. 002 4. 00 ＞ 0. 05
D 0. 012 2 0. 006 12. 00 ＞ 0. 05
E(误差) 0. 001 9 0. 000 1
注:F0. 05(2，2)= 19. 0。
生产成本考虑，确定最佳提取工艺为 A2B2C1D2，按
优选的工艺进行 3 次验证试验，结果总黄酮提取率
与浸膏得率与正交试验试验相接近，故确定欧芹根
总黄酮最佳提取工艺条件为加 6 倍量 70%乙醇提
取 2 次，每次 1 h。
2. 4 大孔吸附树脂型号的筛选 取 8 种(D4020，
X-5，D101，AB-8，100，450，700，D140 型)预处理好
的大孔树脂各 1 g，分别加入欧芹根提取液 30 mL，
置全温振荡培养箱中振摇 18 h，转速 130 r·min －1，
分别精密吸取 3 mL置于 25 mL量瓶中，按 2. 1. 2 项
下方法于 510 nm处测定 A，计算各树脂对欧芹根总
黄酮的吸附量分别为 0. 445，0. 270，0. 496，0. 337，
0. 475，0. 380，0. 480，0. 410 mg·g －1。将静态吸附的
各大孔树脂过滤抽干，加一定量水洗涤以清洗吸附
在瓶壁上极性小的苷元，加入 70%乙醇 50 mL 洗
脱，洗脱时间不可过长，约 2 h，将树脂从摇床中取
出，按 2. 1. 2 项下方法于 510 nm 处测定 A，计算各
树脂对欧芹根总黄酮的洗脱量［3-4］依次为 0. 250，
0. 245，0. 430，0. 155，0. 182，0. 180，0. 220，0. 176
mg·g －1，结果发现 D101 型大孔树脂的吸附量和洗
脱量均为最大，故选择 D101 型树脂。
3 讨论
欧芹根作为新疆维药已在维医临床应用已久，
但缺乏实验依据，致使其在临床推广使用时受到极
大限制，课题组前期已初步确定其有效成分为黄酮
类成分，故选择芦丁为指标成分。通过正交试验优
选欧芹根的提取工艺，为减少提取物中杂志的含量，
选择总黄酮吸附量和洗脱量为指标，通过单因素试
验筛选分离纯化效果最好的大孔吸附树脂，采用的
试剂均无毒且成本较低，适用于工业化大生产，可为
欧芹根总黄酮的新药研发提供参考。
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［责任编辑 刘德文］
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陈妍，等:新疆维药欧芹根总黄酮的乙醇提取工艺优选及其大孔树脂筛选