全 文 ： 中国现代应用药学 2016 年 1 月第 33 卷第 1 期 Chin J Mod Appl Pharm, 2016 January, Vol.33 No.1 ·35·
学研究亦表明，刺山柑总生物碱乳膏可使SSc小鼠
真皮鳞状上皮变薄，胶原纤维明显减少，皮脂腺
增多，炎性细胞浸润明显减少[4]，提示刺山柑总生
物碱乳膏对SSc组织纤维化有一定改善作用。
硬皮病的发病机制复杂，主要病理过程之一
是成纤维细胞合成胶原增多、分解减少，大量胶
原纤维在皮肤、肺、消化道等组织器官沉积，组
织器官硬化，出现功能障碍[5]。SSc胶原纤维主要
合成Ⅰ、Ⅲ型前胶原，且Ⅰ型前胶原比例较正常
胶原纤维增高，表明本病以Ⅰ型前胶原增多为主[6]。
Col-Ⅰ、Col-Ⅲ过量表达与胶原纤维的持续活化，
分泌过量的胶原蛋白相关，将硬皮病胶原纤维培
养至第15代，其胶原合成量仍高于正常人，并显
示出高胶原合成的特性，因此Col-Ⅰ客观反映了硬
皮病的病理状态[7]。Hyp是胶原蛋白中一种重要且
含量稳定的氨基酸，在其他组织中含量甚微，因
此，测定Hyp的含量是检测胶原含量的可靠方法[6]。
本研究发现，刺山柑总生物碱乳膏中、高剂量可
降低小鼠皮肤及肺组织Hyp、Col-Ⅰ含量，提示刺
山柑总生物碱乳膏可减少Col-Ⅰ在组织器官的过
度沉积，减轻纤维化程度。
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收稿日期：2015-07-27



藏药刺柏提取物对 CCl4 致大鼠肝纤维化的保护作用

武燕 1，何华 1，刘健 2(1.甘肃中医药大学，兰州 730030；2.兰州大学第一附属医院，兰州 730000)

摘要：目的 研究藏药刺柏提取物(Juniperus extract，JE)对大鼠肝纤维化的保护作用和相关机制。方法 利用 CCl4 建立大
鼠肝纤维化模型，JE(25，50 mg·kg1)连续灌胃给药 6 周。给药结束后检测血清谷丙转氨酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)
以及肝组织超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量；HE 染色观察肝组织的变化；应用免疫组化法检测 MMP-2 的表
达。结果 与模型组比较，JE 组大鼠血清中 ALT、AST 水平降低(P<0.05)，同时肝组织中 SOD 含量增加(P<0.05 或 P<0.01)，
50 mg·kg1 JE 组 MDA 含量降低(P<0.05)；病理学研究表明，JE 组大鼠肝纤维化程度明显改善，50 mg·kg1 JE 组能明显抑
制肝组织中 MMP-2 的表达(P<0.05)。结论 JE 可能通过降低 MMP-2 的表达减少氧化应激，从而改善 CCl4 引起的肝纤维
化损伤。
关键词：刺柏提取物；肝纤维化；氧化应激；MMP-2
中图分类号：R285.5 文献标志码：A 文章编号：1007-7693(2016)01-0035-04
DOI: 10.13748/j.cnki.issn1007-7693.2016.01.009

Protective Effect of Juniperus Extract on CCl4-induced Liver Fibrosis of Rats

WU Yan1, HE Hua1, LIU Jian2(1.Gansu University of Traditional Chinese Medicine, Lanzhou 730030, China; 2.The First
Hospital of Lanzhou University, Lanzhou 730000, China)

基金项目：甘肃省科技计划项目(1506RJYA039)；甘肃中医学院中青年科研基金项目(ZQ2014-6)
作者简介：武燕，女，讲师 Tel: (0931)8641182 E-mail: wuyan8188@163.com
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ABSTRACT: OBJECTIVE To explore the effects and possible mechanism of Juniperus extract(JE) on liver fibrosis.
METHODS The liver fibrosis model was induced by CCl4, and JE were administered by gastric perfusion at 25, 50 mg·kg1 qd
for 6 weeks, at the end of the experiment, the contents of alanine transaminase(ALT), aspartate aminotransferase(AST),
superoxide dismutase(SOD), maleic dialdehyde(MDA) and the contents of PINP were measured in liver tissue, the expression of
MMP-2 was observed by immunohistochemisty. The pathological changes of liver tissue were examined by HE. RESULTS
JE(25, 50 mg·kg1) improved the liver function significantly through reducing the level of ALT, AST (P<0.05), and increasing
the content of SOD (P<0.05 or 0.01), 50 mg·kg1 JE significantly reduced the centent of MDA and the expression of
MMP-2(P<0.05). CONCLUSION JE may inhibit the liver fibrosis induced by CCl4 by decreasing the oxidative stress, the
mechanism possibly involves the inhibition of the expression of MMP-2.
KEY WORDS: Juniperus extract; liver fibrosis; oxidative stress; MMP-2

刺柏为柏科植物杜松(Juniperus rigida Si eb.
Et Zucc.)的干燥嫩枝叶，为蒙医临床常用药，具清
热、利尿、补肾等功效，主要用于治疗尿血、尿
道疼痛、炭疽、风湿、肾“达日干”、“协日乌
素”等病症，主要成分为槲皮苷等[1]。
慢性肝脏疾病可引起肝纤维化，肝纤维化可
能发展为肝硬化甚至肝癌，严重影响人们的健康。
早期肝纤维化尚存在可逆性，所以早期干预、阻
止肝纤维化的进展是治疗肝病的关键[2]。研究表
明，中药在抗肝纤维化的治疗中具有明显的优势。
黄酮类化合物具有较强的抗氧化性和抗肝纤维化
活性[3-4]，刺柏中含有一定的黄酮类化合物，有关
其药理活性的研究很少。本研究采用 HPLC 对刺
柏提取物(Juniperus extract，JE)中的黄酮进行定
量，并研究其对 CCl4 所致大鼠肝纤维化的保护作
用和相关机制。
1 材料
1.1 动物和药材试剂
SD 大鼠，♀♂各半，体质量 250~300 g，由兰
州大学实验动物中心提供，实验动物合格证号：
SCXK(甘)2009-0004。刺柏样品采于内蒙古自治区
锡林浩特，经甘肃中医药大学药学院刘东玲副教
授鉴定(槲皮苷的含量为 0.25%)为 Juniperus rigida.
Et Zucc.；兔抗大鼠 MMP-2 多克隆抗体及免疫组
化二抗试剂(RayBiotech，Inc)；RIPA 裂解缓冲液(北
京迪诺奥生物科技有限公司)；谷丙转氨酶(alanine
transaminase，ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(aspartate
aminotransferase，AST)、超氯化物歧化酶(supero-
xide dismutase，SOD)、丙二醛(maleic dialdehyde，
MDA)试剂盒均购于南京建成生物制品研究所(批
号分别为 20140412，20140415)。
1.2 刺柏提取物的制备
取干燥刺柏粉末以 10 倍量 70%乙醇回流提
取，每次 1.5 h，连续提取 3 次后合并提取液，浓
缩得粗黄酮提取物，其中提取物得率为 3%。其主
要成分槲皮苷的含量测定依据文献[3]报道的方法
测得槲皮苷含量为 0.25%。
1.3 仪器
Z-36HK 台式离心机(德国 Hermel)；UV-1800
紫外可见分光光度计(日本岛津)；DK-98-1 型数显
恒温水浴锅(金坛大地仪器)；BS-224-S 型电子分析
天平(塞多利斯科学仪器有限公司)；Electrophoresis
Power Supply-EPS301 电泳仪(GE Health)；CR 22G
Ⅱ型高速冷冻离心机(日立)；Image Quant 300 凝胶
成像系统(GE Health)。
2 方法
2.1 建模与给药
大鼠随机分为空白对照组、模型组和 JE 25，
50 mg·kg1 组(n=6)。大鼠给予灌胃 50% CCl4 花生
油溶液 1 mL·kg1，每周 2 次，JE 组同时每日 1 次
灌胃给予 JE 25，50 mg·kg1，空白对照组给予等
量生理盐水[5]。连续 6 周后禁食禁水，断尾取血后
剖腹取出肝脏用于生化指标检测，并将一部分用
福尔马林保存用于病理学研究，一部分在80 ℃
保存。
2.2 血清及肝脏生化测定
血清的 ALT 和 AST 及肝脏的 SOD 和 MDA
指标测定依据试剂盒说明。
2.3 肝脏病理学研究
福尔马林溶液固定肝组织 24 h 后，脱水透明
石蜡包埋，肝脏石蜡切片作 HE 染色，按前期研究
方法进行[6]。
2.4 免疫组化检测 MMP-2 蛋白的表达
取 80~100 mg 冷冻肝脏，加入 RIPA 裂解缓冲
液，按照文献[7]描述的方法在 450 nm 处测定吸光
度，按照试剂盒计算 MMP-2 值；另外，将防脱切
片常规脱蜡、脱水，柠檬酸盐缓冲液高温修复
2 min，冷却后 PBS 冲洗，再用 H2O2 阻断，滴加
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MMP-2 多克隆抗体，PBS 冲洗后滴加二抗。脱水
透明、封固后光镜下观察[5]。
2.5 统计学处理
数据用 SPSS 18.0 统计软件进行处理，实验结
果均采用组间差异比较 t 检验，实验结果以 sx 
表示，P<0.05 为差异有统计学意义。
3 结果
3.1 JE 对大鼠模型血清和肝脏生化指标的影响
模型组与空白对照组比较，血清中 ALT、AST
和肝脏中 MDA、SOD 活力具有显著性差异
(P<0.01)，说明 CCl4 造肝纤维化模型成功；
50 mg·kg1 JE 治疗组与模型组比较，血清中 ALT、
AST 和肝脏中 MDA、SOD 活力具有显著性差异
(P<0.05 或 0.01)。结果见表 1。
3.2 JE 对肝脏组织的病理学改变
空白对照组肝脏的肝小叶结构完整清晰，呈
条索状向四周放射状排列，无纤维组织增生；模
型组可见灶状坏死，伴炎性细胞浸润，并有纤维
化症状；JE 治疗组可见肝小叶结构破坏逐渐减轻，
未见纤维组织增生及纤维化，其中 50 mg·kg1 剂
量组抑制纤维化效果更明显。结果见图 1。

图 1 大鼠肝脏在 HE 染色后的病理学变化(40×)
A空白对照组；B模型组；CJE 25 mg·kg1；DJE 50 mg·kg1。
Fig. 1 Histological examination of liver tissue sections
stained with HE(40×)
Anormal group; Bmodel group; CJE 25 mg·kg1; DJE 50 mg·kg1.
3.3 JE 对肝脏组织 MMP-2 的影响
空白对照组 MMP-2 表达很弱，仅散在分布在
肝细胞周围，显色较浅；模型组 MMP-2 表达增强，
肝小叶周围着色较深，与空白对照组比较有显著
性差异(P<0.01)；JE 50 mg·kg1 组 MMP-2 表达量
明显减弱(P<0.05)，仅呈现微弱着色，肝细胞也仅
见少量着色。结果见图 2 和表 1。

图 2 JE 对大鼠 MMP-2 表达的影响(40×)
A空白对照组；B模型组；CJE 25 mg·kg1；DJE 50 mg·kg1。
Fig. 2 Immunohistochemical expression of MMP-2 protein
in rats(40×)
Anormal group; Bmodel group; CJE 25 mg·kg1; DJE 50 mg·kg1.
表 1 JE 对大鼠模型血清、肝脏组织中相关生化指标及 MMP-2 表达的影响
Tab. 1 Effects of JE on the levels of of serum and liver tissue and the expression of MMP-2 protein
组别 ALT/U·L1 AST/U·L1 MDA/µmol·L1 SOD/NU·mL1 MMP-2
空白对照组 36.5±10.3 58.4±14.8 5.4±0.8 72.3±8.5 2.46±0.79
模型组 108.4±22.71) 113.3±20.51) 14.2±1.31) 36.2±7.31) 9.15±2.201)
JE(25 mg·kg1) 78.9±18.52) 80.2±17.62) 10.4±1.0 52.9±7.72) 6.12±1.16
JE(50 mg·kg1) 62.9±12.02) 71.2±15.92) 7.5±1.42) 74.6±6.83) 5.18±0.852)
注：与空白对照组比较，1)P<0.01；与模型组比较，2)P<0.05，3)P<0.01。
Note: compared with blank control group, 1)P<0.01; compared with model group, 2)P<0.05, 3)P<0.01.
4 讨论
肝纤维化是多种原因引起的慢性肝损害所致
的病理改变，表现为细胞外基质在肝内过度的沉
积，并影响肝功能。多数慢性肝病患者都有不同
程度的肝纤维化，早期肝纤维化尚存在可逆性，
所以早期干预、阻止肝纤维化的进展是预防肝硬
化发生、发展的关键[6,8]。
本研究发现，与模型组相比，JE 治疗组能够
降低血清中 ALT、AST 的表达，明显增加肝脏中
的酶类活性氧清除剂 SOD，以及抑制 MDA 增多。
说明 JE 能明显改善 CCl4 所致的肝脏纤维化程度。
在肝纤维化的形成过程中，MMP-2 与肝纤维化密
切相关，肝脏纤维化早期，活化的 MMP-2 可以降
解基底膜中的Ⅳ型胶原蛋白支架，破坏正常基底
膜结构，进而影响肝星状细胞(hepatic stellate cells，
HSCs)微环境，促进 HSCs 激活，从而参与肝脏纤
维化启动[8]。综上所述，本研究表明 JE 能抑制
MMP-2 的表达，且与剂量呈量效关系，提示 JE
可通过抑制 MMP-2 的表达来调控脂质过氧化反
应，达到抗纤维化作用。
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收稿日期：2015-07-04



红景天主要成分对小鼠免疫细胞的促增殖转化作用

陈伟，马小琴，范文玺，周凡*(新疆华世丹药物研究有限责任公司，乌鲁木齐 830011)

摘要：目的 观察红景天中主要成分红景天苷、苷元酪醇、络塞维对小鼠免疫系统的保护作用。方法 以 Giemsa 染色法、
MTT 法及 NO 检测法等为研究手段，分析不同浓度红景天苷、酪醇、络塞维对小鼠外周血 T、B 淋巴细胞、小鼠外周血
白细胞及小鼠腹腔巨噬细胞等具有代表意义的免疫细胞活性及功能的影响。结果 红景天苷能够促进 T/B 淋巴细胞的转
化及增殖，对外周血白细胞及腹腔巨噬细胞的吞噬能力有显著的提升作用。苷元酪醇(62.5~250 μg·mL1)能够特异性的刺
激 B 淋巴细胞的增殖和转化(P<0.05)，且作用效果高于阳性药物组。络塞维则对静止型 T 细胞向母细胞转化具有显著的
促进作用(P<0.05)。结论 不同红景天主要成分在体外会对不同的免疫靶细胞起作用，具有细胞免疫和体液免疫功能，同
时能提高单核细胞的吞噬能力，免疫活性广泛。
关键词：红景天苷；苷元酪醇；络塞维；T/B 细胞；白细胞；细胞转化
中图分类号：R285.5 文献标志码：A 文章编号：1007-7693(2016)01-0038-05
DOI: 10.13748/j.cnki.issn1007-7693.2016.01.010

Major Efficacy Component of Rhodiola Stimulate Proliferation and Transformation on Mouse Immune Cells

CHEN Wei, MA Xiaoqin, FAN Wenxi, ZHOU Fan(Xinjiang Hua Shidan Pharmaceutical Reaearch Co., Ltd., Urumqi
830011, China)

ABSTRACT: OBJECTIVE To observe the immunopotentiation of salidroside, tyrosol and rosavin of major ingredient of
Rhodiola on mouse immune system. METHODS LPS-induced and ConA-induced mouse peripheral blood lymphocyte
proliferation and transformation, and phagocytosis of Rhodiola on peripheral blood leukocyte and peritoneal macrophage were
analysed by MTT assay, Giemsa staining and NO detection kit. RESULTS Compared with solvent control group, the
salidroside group could increase proliferation and transformation of T/B cells significantly, and also improved phagocytosis of
peripheral blood leukocyte and peritoneal macrophage(P<0.05). Moreover, there was significant difference between the tyrosol
group (62.5250 μg·mL1) and levamisole hydrochloride (positive drug) group on LPS-induced B cells. And rosavin could
obviously increase the transformation of mouse T cells compared with solvent control group. CONCLUSION Three main
active substance of Rhodiola can enhance mouse non-specific and specific immune response, and activity of T/B cells and
macrophage.
KEY WORDS: salidroside; tyrosol; rosavin; T/B cells; white blood cells; transformation of cell


基金项目：新疆生产建设兵团中小企业科技创新基金(2015AE009)
作者简介：陈伟，男，硕士，工程师 Tel: 18999864306 E-mail: 285239579@qq.com *通信作者：周凡，女，硕士，工程师 Tel:
1899864306 E-mail: zhoufan0220@sina.com
免疫细胞作为免疫系统中承上启下的组织结
构基础，在机体中具有不可替代的作用[1]。红景天
系景天科(Crassulaceae)红景天属(Rhodiola)植物，
多年生草本或亚灌木，其根及根茎入药。研究表
明红景天具有抗氧化、抗疲劳、抗肿瘤、抗病毒
等功效[2-4]。红景天药物活性成分为红景天苷、苷
元酪醇及络塞维(肉桂醇苷)3 种，研究表明红景天
主要成分对机体体液免疫和细胞免疫均具有显著