全 文 ：HPLC测定不同产地了哥王药材中西瑞香素含量
熊友香 1 , 　王显武 2 , 　尤志勉2 , 　姚振生 1
(1.浙江中医药大学 ,浙江 杭州 310053;2.温州市中医院 ,浙江 温州 325000)
收稿日期:2008-10-27
基金项目:浙江省教育厅课题(20050821)
作者简介:熊友香(1973-),女 ,讲师 ,研究方向:中药学(中药新剂型)。 Tel:(0571)87702669
关键词:了哥王;西瑞香素;HPLC
中图分类号:R283　　　　　文献标识码:B　　　　　文章编号:1001-1528(2009)08-附 18-03
　　了哥王为瑞香科荛花属南岭荛花 Wikstromiaindica(L.)
C.A.Mey.的干燥根皮 , 性味苦寒 、微辛 , 有毒 , 主治跌打损
伤 , 散瘀止痛;分布于江西 、广东 、广西等地 [ 1] , 为民间常用中
草药。现代药理及临床研究表明 , 了哥王具有消炎 、解毒 、镇
痛等功效 , 用于治疗支气管炎 、肺炎 、扁桃体炎 、乳腺炎 、蜂窝
组织炎等症 [ 2-6]。了哥王中含有黄酮类和香豆素类等多种化
合物 [ 7, 8] , 如芫花素 、伞形花内酯 、西瑞香素 、大黄素甲醚 、西
瑞香素-7-O-β-D葡萄糖苷等成分。其中西瑞香素属于香豆
素类化合物 , 是了哥王的有效成分之一 , 西瑞香素不仅具有
明显改善小鼠心肌营养血流量的作用 [ 9] , 也可显著降低大鼠
肾上腺内维生素 C的含量 , 可促进单核巨噬细胞的吞噬作
用 , 有利于炎症的恢复 [ 10] 。同时又具有较好的抗炎抗肿瘤
作用 [ 10-14] 。为评价不同产地药材质量 , 也为临床采购药材
提供依据 , 因此选取了哥王中的西瑞香素含量作评价其质量
指标之一。
1　仪器 、材料与试剂
1.1　实验仪器与试剂
Agilent1200高效液相仪器 (安捷伦科技有限公司);
XS105电子天平(梅特勒 -托利多仪器(上海)有限公司);
DKS-12型不锈钢新型电热恒温水浴锅(宁波江南仪器厂);
KQ-100型超声波清洗仪(昆山市超声仪器有限公司)。 甲醇
(天津四友精细化学品有限公司 , 色谱纯);磷酸(国药集团
化学试剂有限公司);乙醇(浙江杭州双林化工试剂厂);西
瑞香素对照品(甙尔塔天然有机化合物信息中心);其它试
剂均为分析纯。
1.2　实验药材
了哥王药材分别购自江西 、湖南 、广西(共 4批药材)等
三省 , 经浙江中医药大学药学院中药资源与鉴定教研室姚振
生教授鉴定系为瑞香科荛花属了哥王(南岭荛花)Wikstromia
indica(L.)C.A.Mey.的根皮。
2　实验方法与结果
2.1　对照品溶液制备
精密称取 105 ℃干燥至恒重的西瑞香素对照品 7.52
mg,甲醇溶解 , 定容于 50 mL量瓶中 , 摇匀 , 即得对照品溶液
(0.150 4 mg/mL)。
2.2　供试品溶液制备
精密称取了哥王药材细粉 0.5 g,置 150mL的圆底烧瓶
中 , 70%甲醇溶液 40 mL, 85℃水浴回流提取 1.5 h, 过滤 ,放
冷 ,移至 100 mL量瓶中 , 并用 70%甲醇定容 ,过膜(0.45 μm
滤膜), 取续滤液 ,即得。
2.3　色谱条件与系统适应性实验
色谱柱:AgilentEclipseXDB-C18柱子 (4.6 mm×150
mm, 5μm);检测器:紫外检测器;流动相:甲醇-0.2%磷酸溶
液(44∶56);检测波长:346 nm;柱温:25 ℃;进样量:10 μL;
流速:1.0 mL/min。
以 346nm为检测波长 [ 15] , 分别取对照品和供试品溶液
各 10 μL注入高效液相色谱仪。结果表明 , 供试品和对照品
溶液均在保留时间 13.6 min左右出现吸收峰 , 理论塔板数
不低于 3 000。高效液相色谱见图 1、2。
图 1　西瑞香素对照品 HPLC图谱
图 2　了哥王药材中西瑞香素 HPLC图谱
18附
2009年 8月
第 31卷　第 8期
中 成 药
ChineseTraditionalPatentMedicine
August2009
Vol.31　No.8
2.4　线性关系考察
精密吸取对照品溶液 1.0、2.0、 3.0、4.0、 5.0、6.0、7.0、
10.0 mL分别至 10 mL的量瓶中 , 甲醇定容 , 摇匀 , 滤过
(0.45 μm微孔滤膜), 收集续滤液 , 即得。分别吸取 10 μL
注入高效液相色谱仪 , 按 2.2项下的色谱条件测定对照品的
峰面积 , 记录色谱图 , 以浓度 X为横坐标 , 峰面积 Y为纵坐
标 , 绘制标准曲线 , 经计算得回归方程:Y=34 330X+
14.692, r=0.999 9。结果表明西瑞香素在 1.504 ～ 15.04 μg
范围内线性关系良好 。
2.5　方法学考察
2.5.1　精密度实验　取对照品溶液 ,重复进样 5次 ,测定西
瑞香素峰面积 , 计算 RSD=0.76%。表明本方法精密度良
好。
2.5.2　稳定性实验　取供试品溶液 , 分别于 0、 1.5、3、4.5、
6.0h进样 ,测定峰面积 ,计算 RSD=0.20%, 西瑞香素在 6.0
h内稳定。
2.5.3　重复性实验　精密称取同一产地了哥王药材粉末 5
份 , 各 0.5g, 按 2.2项下方法平行制备供试品溶液 5份 , 测
定西瑞香素含量 , 计算 RSD=2.71%, 结果表明本方法重复
性良好。
2.5.4　加样回收实验　精密称取 5份已知含量了哥王药
材 , 每份 0.1 g, 每份加入西瑞香素对照品 0.451 2 mg, 按 2.2
项下方法制备供试品溶液 , 测定其中西瑞香素的含量 ,计算
回收率和 RSD, 结果平均回收率为 99.19%, RSD=2.23%,
本方法准确性较好 , 结果见表 1。
表 1　 加样回收实验结果
供试品中含量
/mg
加入量
/mg
检出量
/mg
回收率
/%
平均回
收率 /%
RSD
/%
0.460 0 0.451 2 0.909 0 99.73
0.458 8 0.451 2 0.911 2 100.27
0.456 6 0.451 2 0.905 1 99.40 99.19 2.23
0.438 7 0.451 2 0.869 2 95.41
0.436 7 0.451 2 0.893 0 101.13
　　注:样品中平均百分含量为 0.450 2%。
3　实验条件选择
3.1　提取溶剂的选择
分别选取乙醇和甲醇为提取溶剂 , 固定以超声提取 30
min,料液比为 60倍量 , 分别加入乙醇和甲醇提取 ,制备供试
品溶液 , 测得西瑞香素百分含量为 0.198 3%、 0.457 5%, 结
果表明甲醇的提取率高 ,故选择以甲醇为提取溶剂。再设定
不同浓度的甲醇溶液作为提取溶剂 , 即 90%、 80%、 70%、
60%、50%、40%、30%,由上述条件制备供试品溶液 ,测得西
瑞香素百分含量依次为 0.436 0%、 0.483 2%、 0.527 0%、
0.512 6%、0.406 8%、0.305 9%、0.235 9%。结果表明 70%
甲醇为提取溶液测得的西瑞香素含量最高 , 故确定 70%的
甲醇为提取溶剂。
3.2　提取方法的选择
精密称取 0.5 g了哥王药材细粉 6份 , 分别置具塞锥形
瓶中 , 其中 3份各加入 70%甲醇 30 mL, 称量 , 超声处理 30
min, 称重 ,提取后用 70%甲醇补足失重 , 过滤 , 定容于 100
mL量瓶中。另 3份水浴回流提取 30 min, 过滤 , 定容于 100
mL量瓶中。测得两种提取方法的西瑞香素平均百分含量分
别为 0.114 6%、 0.137 6%, 回流提取方法效果比超声高
20%,故确定提取方法为回流提取。
3.3　料液比的选择
精密称取 0.5g了哥王药材细粉 , 置圆底烧瓶中 , 固定
70%甲醇溶液 ,回流提取 1 h, 过滤 , 定容于 100 mL量瓶中 ,
0.45μm微膜滤过。设计料液比分别为 60倍量 、 80倍量 、
100倍量。 测得西瑞香素百分含量分别为 0.461 0%、
0.476 5%、0.476 6%,通过比较确定料液比为 80倍量。
3.4　提取时间的选择
精密称取 0.5g了哥王药材细粉 , 置圆底烧瓶中 , 固定
加入 80倍量 70%甲醇溶液 , 回流提取 1h,过滤 ,定容于 100
mL量瓶中 , 0.45 μm微膜滤过。设计回流提取时间分别为
0.5、1、1.5、2h。测得西瑞香素百分含量分别为 0.416 6%、
0.418 8%、0.446 6%、0.447 8%。提取时间 1.5 h与 2 h无
明显差别 ,故确定提取时间为 1.5 h。
由实验结果可知 ,西瑞香素的最佳提取条件为:80倍量
70%甲醇 ,水浴回流提取 1.5 h, 即 2.2项下供试液的制备方
法。
4　各产地了哥王中西瑞香素含量测定
根据 3.4项下的最佳提取条件提取了哥王中西瑞香素 ,
并测定其含量 ,结果见表 2和图 3。
表 2　 不同产地了哥王药材中西瑞香素含量
产地 百分含量 /%
平均百分
含量 /%
RSD
/% 产地
百分
含量 /%
平均百分
含量 /%
RSD
/%
江西
隧川
0.701 3 0.177 6
0.652 3 0.655 5 4.65 湖南湘西 0.178 5 0.176 4 1.25
0.612 9 0.173 1
广西
桂平
0.469 0 0.490 4
0.458 8 0.461 5 1.08 广西玉林 0.457 7 0.466 1 3.48
0.456 6 0.450 2
广西
岑溪
0.504 1 0.511 9
0.494 2 0.500 4 0.82 广西平南 0.513 3 0.519 3 1.73
0.502 9 0.532 8
图 3　不同产地了哥王药材中西瑞香素含量
19附
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第 31卷　第 8期
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Vol.31　No.8
5　结论
实验通过比较提取溶剂 、提取方法 、料液比 、提取时间等
提取条件对西瑞香素的提取效果的影响 , 确定 70%甲醇提
取西瑞香素的含量较高;确定供试品的最佳制备方法为:80
倍量 70%甲醇溶液 , 水浴回流提取 1.5h。
由实验得到各产地了哥王药材中西瑞香素含量关系是 ,
江西 >广西 >湖南 , 江西产的了哥王中的西瑞香素百分含量
最高 0.655 5%,分别是广西和湖南产的 1.32、3.67倍。而
广西所产的 4批药材中西瑞香素的含量无明显差异。可见
不同产地了哥王药材中的西瑞香素含量相差较大 ,这也提示
我们应注意提高药材内在性质的稳定性 ,保证临床用药的安
全性和有效性。
在本研究采用的测定含量的色谱条件下 ,西瑞香素与其
他组分能够很好的达到分离的效果(R>1.5),且精密度 、线
性关系 、重复性 、回收率数据均符合要求。这为评价不同产
地了哥王药材质量提供了依据 ,也为了哥王药材及其制剂等
的质量控制提供了参考依据。
参考文献:
[ 1] 　浙江植物志编委.浙江植物志 [ M] .第四卷.杭州:浙江科学
技术出版社 , 1999:255-256.
[ 2] 　柯雪红 ,王丽新 ,黄可儿.了哥王片抗炎消肿及镇痛作用研究
[ J].时珍国医国药 , 2003, 14(10):603-604.
[ 3] 　贾钰华 , 孙学刚.三越了哥王片治疗热痰型老年慢性支气管
炎 52例———附双黄连口服液治疗 46例对照[ J] .浙江中医杂
志 , 2000, 3:135.
[ 4] 　杨振宇 ,杜智敏.了哥王水煎液的抑菌作用研究 [ J] .哈尔滨
医科大学学报 , 2006, 40(5):362-364.
[ 5] 　方　铝 ,朱令元 ,刘维兰 , 等.了哥王片抗炎抑菌作用的试验
研究 [ J] .中国中医药信息杂志, 2000, 7(1):28-29.
[ 6] 　刘　玲 ,张利占.三越了哥王片防治术后肺部感染 100例观察
[ J] .浙江中医杂志 , 2000:35(7):319.
[ 7] 　耿立冬 ,张　村 ,肖永庆.了哥王中的 1个新双香豆素 [ J] .中
国中药杂志 , 2006, 31(1):43-45.
[ 8] 　耿立冬 ,张　村 ,肖永庆.了哥王化学成分研究 [ J] .中国中药
杂志 , 2006, 31(10):817-818.
[ 9] 　谢培山 , 杨景鹏.了哥王化学成分的研究———西瑞香素
(Daphnoretin)的分离 、鉴定[ J] .中草药通讯 , 1978, 3:1-2.
[ 10] 　张筠默, 张海根 ,朱根麟 , 等.了哥王素抗炎症作用的研究
[ J] .中国现代应用药学 , 1987, 4(2):1-2.
[ 11] 　WangLiYan, NorikoU, SusumuK.LignansfromtheRootsof
WikstroemiaindicaandTheirDPPHRadicalScavengingandNi-
tricOxideInhibitoryActivity[ J] .ChemPharmBull, 2005, 53
(10):1348-1351.
[ 12] 　倪　刚 ,王　艳.三越了哥王片治疗急性化脓性扁桃体炎 30
例 [ J] .浙江中医杂志 , 2002:37(7):319.
[ 13] 　TandonS.andRastogiRP.HarunaM, etal.(+)-Arctigenin,
AlignanfromWikstroemiaindica[ J] .Phytochemistry, 1982, 21
(7):1824.
[ 14] 　SuzukiH, LeeKH, HarunaM, etal.(+)-arctigenin, ALing-
nanfromWikstroemiaindica[ J] .Phyochemistry, 1982, 21(7):
1824.
[ 15] 　吕武清 ,余良忠 ,李六平 ,等.HPLC测定了哥王片中西瑞香素
含量 [ J] .中成药 , 2005, 27(7):858-859.
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