全 文 ：收稿日期:2014-10-10; 修订日期:2014-12-22
基金项目:国家“十一五”科技支撑计划项目(2007BAI48B08 － 01);
贵州省教育厅科研项目(黔教合字［2012］021 号)
作者简介:张金娟(1978-)，女(彝族)，贵州盘县人，贵阳医学院高级实验
师，在读博士研究生，硕士学位，主要从事中药药理与肝纤维化研究工作．
* 通讯作者简介:李 玮(1964-)，男(汉族)，湖南邵东人，贵阳中医学院
教授，学士学位，主要从事中药炮制研究工作．
了哥王炮制前后的药效比较研究
张金娟1，熊 英1，李 玮2* ，王建科2，林 昶2，吴 宁1，杨 勤1
(1．贵阳医学院，贵州 贵阳 550025; 2．贵阳中医学院，贵州 贵阳 550025)
摘要:目的 对了哥王炮制前生品及两种方法炮制后的炮制品的抗菌及抗炎活性进行比较，探讨两种炮制方法对了哥王
药效的影响。方法 分别以“汗渍法”、人工汗液炮制法炮制了哥王，制备了哥王生品及两种炮制品浸膏;采用体内及体外
抗菌实验观察三种样品的抗菌活性;采用二甲苯致小鼠耳肿胀实验观察其抗炎活性。结果 体外抗菌实验结果显示了哥
王生品及两种炮制品对金黄色葡萄球菌及乙型溶血性链球菌均有抗菌作用;对金黄色葡萄球菌的 MIC 值是两种炮制品
较小，MBC值是生品较小;对乙型溶血性链球菌的 MIC与 MBC值均是人工汗液炮制品最小。体内抗菌实验结果表明:三
种样品均能降低金黄色葡萄球菌感染小鼠的死亡率，且三种样品的作用强弱无明显差异。抗炎实验结果表明三种受试
样品均能抑制二甲苯所致的小鼠耳肿胀，各样品抑制作用强度无明显差异。结论 了哥王生品及两种炮制品均具有抗菌
及抗炎活性，且三种样品的作用强弱无明显差异，表明通过“汗渍法”及人工汗液炮制法对了哥王进行炮制后，未降低其
抗菌及抗炎活性。
关键词:了哥王; 炮制; 抗炎; 抗菌
DOI标识:doi:10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2015． 05． 034
中图分类号:Ｒ285． 5;Ｒ283． 1 文献标识码:A 文章编号:1008-0805(2015)05-1118-03
Comparison of Antibacterial and Anti － inflammatory Effect of Unprocessed and Pro-
cessed Products of Indian Stringbush Ｒoot
ZHANG Jin-juan1，XIONG Ying1，LI Wei2* ，WANG Jian-ke2，LIN Chang2，LIN Chang2，WU Ning1，YANG Qin1
(1． Guiyang Medical University，Guiyang 550004，China;2． Guiyang Traditional Chinese Medical College，
Guiyang 550002，China)
Abstract:Objective To compare the antibacterial and anti － inflammatory activity among extracts from unprocessed indian
stringbush root and it＇s two different processed products，to Investigate the influence of two processing methods on the efficacy of in-
dian stringbush root．Methods Make the extracts of unprocessed Indian stringbush root and processed with“sweat”and“artificial
sweat”respectively． Observe the antibacterial activity of the 3 samples by in vivo and in vitro antibacterial experiments and its anti
－ inflammatory activity by mice ear － swollen induced experiment． Ｒesults Staphylococcus aureus and beta hemolytic streptococ-
cus can be inhibited by the 3 samples;the MIC on staphylococcus aureus of the 2 processed products are same and smaller than
the unprocessed product，but the MBC on staphylococcus aureus are bigger;and the MIC and MBC on beta hemolytic streptococ-
cus of the processed products with“artificial sweat”is the smallest in the 3 samples． The mortality of mice infected with staphylo-
coccus aureus can be reduced by the 3 samples，and there are no obvious differences in the effect intensity of the 3 samples． The
mice ears swelling induced by xylene can be inhibited by the 3 samples，and the inhibition intensity have no significant difference
in the 3 samples． Conclusion The extracts from unprocessed Indian stringbush root and its two different processed products had
the antibacterial and anti － inflammatory activity，and there was no obvious difference in the effect intensity of the 3 samples，it
showed that the sweat and artificial sweat processing method didn＇t reduce the antibacterial and anti － inflammatory activity of Indi-
an stringbush root．
Key words:Indian stringbush root; Processing; Antibacterial; Anti － inflammatory
苗药了哥王来源于瑞香科植物南岭荛花 Wikstroemia indica
(L．)C． A． Mey．的根及根皮，具有抗菌、抗炎镇痛、抗病毒、抗癌
等多种作用。此药有毒，《岭南采药录》记载:“其性味苦寒、微
辛，有毒”;《生草药性本草》云:“能杀人，不能乱服”。通过炮制
降低有毒药材的毒性是一种有效方法。苗族同胞就采用“汗渍
法”(即将药材捆在人的腰部，用汗液浸渍药材)来炮制了哥王
以降低其毒性。根据“汗渍法”的特点，本课题组应用人工汗液
浸泡药材的方法(称人工汗液炮制法)来炮制了哥王，并在前期
研究中发现:通过“汗渍法”及人工汗液炮制法对了哥王进行炮
制可降低其毒性［1］。为进一步考察这两种炮制方法在降低毒性
的同时是否会降低药效，本研究对了哥王生品及经两种炮制方法
炮制后的炮制品进行了体内外抗菌活性及抗炎活性的测定，以探
讨这两种炮制方法对了哥王活性的影响。
1 材料与仪器
1． 1 药材 了哥王，产于广西灵山县。
1． 2 动物 健康昆明种小鼠，清洁级，体重 18 ～ 20 g，雌雄各半，
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时珍国医国药 2015 年第 26 卷第 5 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2015 VOL． 26 NO． 5
购于重庆腾鑫生物技术有限公司，动物合格证号:SCXK(渝)2007
－ 005。
1． 3 菌种 金黄色葡萄球菌(26112 － 5)、大肠埃希菌、肺炎克雷
伯菌、肺炎链球菌、乙型溶血性链球菌，贵阳医学院微生物教研室
保存菌种。
1． 4 主要试剂及仪器 二甲苯，营养琼脂培养基，杭州微生物试
剂厂产品;血琼脂培养基，自制;胃膜素胶囊，重庆格瑞林药业有
限公司产品，批号:090901;醋酸地塞米松片，浙江仙琚制药股份
有限公司产品，批号:090643;双黄连胶囊，广东省惠州市中药厂
有限公司产品，批号:091213;电子天平，梅特勒 －托利多(上海)
有限公司产品。
2 方法
2． 1 药材炮制
2． 1． 1 “汗渍法”炮制了哥王 取净了哥王，捆扎在人的腰部，捆
扎时间 30 d即得。
2． 1． 2 人工汗液法炮制了哥王 取净了哥王片，每天喷入 1 %人
工汗液(附:人工汗液配方:L －组氨酸盐酸盐 0． 5 g·L －1、氯化
钠 5 g·L －1、二水合磷酸二氢钠 2． 2 g·L －1、pH值用 0． 1 N烧碱
调节至 5． 5)，拌匀，闷润，待吸尽后置 36． 5 ～ 37 ℃的烘箱内烘
烤，持续 30 d ，取出放凉。
2． 2 了哥王生品及炮制品浸膏的制备 分别取了哥王原药材及
上述两种方法制备的炮制品，除去杂质，切薄片，干燥，筛去碎屑。
用 95 %的乙醇室温冷浸 3 次，将提取液减压浓缩至干膏。了哥
王生品制得的浸膏(以下称为生品)1 g 浸膏相当于 14． 127 g 生
药。了哥王汗渍法炮制品浸膏(以下称为汗液炮制品)1 g 浸膏
相当于 15． 484 g生药。了哥王人工汗液法炮制品浸膏(以下称
为人工汗液炮制品)1 g浸膏相当于 14． 406g生药。
2． 3 抗菌实验
2． 3． 1 体外抗菌实验
2． 3． 1． 1 抑菌实验 取适量营养琼脂培养基及血琼脂培养基分
别倾注于平板内，分别制成营养琼脂平板和血琼脂平板。将金黄
色葡萄球菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌培养 24h 后分别接种于
营养琼脂平板，肺炎链球菌和乙型溶血性链球菌接种于血琼脂平
板。在平板上打孔，孔径 5mm。将了哥王生品及两种炮制品分
别用灭菌蒸馏水制备成混悬液，浓度为 443mg /ml。将各药液及
作为对照的灭菌蒸馏水分别加满各平板的孔内，营养琼脂平板置
普通温箱内 37℃培养，血琼脂平板置 CO2 培养箱内 37℃培养，培
养 24h观察各孔周围的抑菌圈直径，判断试药对该菌种的抑菌作
用。实验重复 3 次，结果取 3 次实验均值。
2． 3． 1． 2 最低抑菌浓度(MIC)及最低杀菌浓度(MBC)的测定
用灭菌蒸馏水将 3 种受试样品分别进行稀释，将各样品稀释液加
入营养琼脂及血琼脂培养基内，倾注平板(各试药在培养基内的
终浓度见表 2)。并用等体积灭菌蒸馏水加入培养基倾注平板作
对照。将各菌种用无菌生理盐水稀释成 1 亿个 /ml 的菌液，用接
种环取一环菌液接种于含不同浓度试药的各培养基及不含试药
的培养基上。营养琼脂平板置普通温箱内，血琼脂平板置 CO2
培养箱内均于 37℃培养，24 h后观察培养基上细菌的生长情况，
判断试药对该菌种的抑菌作用，以完全无菌生长的试药最低稀释
浓度作为该试药的 MIC。
取 MIC试验中无菌生长的接种细菌处琼脂，接种于不含试
药的普通琼脂培养基或血琼脂培养基上，置于培养箱内 37℃培
养，24 h后观察培养基上细菌的生长情况，判断试药对该菌种的
杀菌作用。以完全无菌生长的试药最低稀释浓度度作为该试药
的 MBC。
2． 3． 2 体内抗菌实验 取体外抗菌有效的菌种———金黄色葡萄
球菌进行预实验，将金黄色葡萄球菌用 5%胃膜素溶液稀释成不
同浓度的细菌悬液，按 0． 5ml /只的剂量给小鼠腹腔注射，以寻找
使 80% ～90%小鼠死亡的细菌量(结果为 4． 5 × 109 /ml)，以便作
为正式实验时感染小鼠的细菌量。
取昆明种小鼠 240 只，体重 18 ～ 22g，♀♂各半，随机分成 12
组，每组 20 只。分别为:对照组(给等容积蒸馏水)，模型组(给
等容积蒸馏水)，双黄连组(给双黄连胶囊 0． 8g /kg)，生品高、中、
低剂量组(分别给了哥王生品 3，1． 5，0． 75g /kg)，汗液炮制品高、
中、低剂量组(分别给了哥王汗液炮制品 3，1． 5，0． 75g /kg)和人
工汗液炮制品高、中、低剂量组(分别给了哥王人工汗液炮制品
3g /kg、1． 5g /kg及 0． 75g /kg)。各组动物按各自药物和剂量灌胃
给药，1 次 /d，连续给药 5d。末次给药后 2 h，除对照组外，各组动
物均腹腔注射浓度为 4． 5 × 109 /ml 的金黄色葡萄球溶液
0． 5ml /只以复制金黄色葡萄球菌感染模型小鼠，观察注射细菌后
两周内各组动物死亡只数，计算死亡率，比较组间差异，判断各样
品对金黄色葡萄球菌感染模型小鼠是否具有保护作用。
2． 4 抗炎实验 取昆明种小鼠 110 只，体重 18 ～ 22g，♀♂各半，
随机分成 11 组，每组 10 只，♀♂各半。分别为:模型组(给等容
积蒸馏水)，地塞米松组(给地塞米松 4． 5mg /kg)，生品高、中、低
剂量组(分别给生品 3，1． 5，0． 75g /kg)，汗液炮制品高、中、低剂
量组(分别给汗液炮制品 3，1． 5，0． 75g /kg)和人工汗液炮制品
高、中、低剂量组(分别给人工汗液炮制品 3，1． 5，0． 75g /kg)。各
组动物按各自药物和剂量灌胃给药，1 次 /d，连续 5 天。末次给
药后 45min，取 0． 02ml二甲苯均匀涂于小鼠左侧耳廓两面。涂二
甲苯后 30 min脱颈椎处死小鼠，剪下双侧耳廓，用直径为 7mm的
打孔器在左右耳廓的同一部位打下耳片，于电子天平上称耳片重
量，计算耳肿胀度(肿胀度 =左耳片重 －右耳片重)。
2． 5 数据统计 实验数据用 SPSS17． 0 软件包进行统计，计量资
料以 珋x ± s表示，组间比较采用 t检验;计数资料组间比较采用 x2
检验。
3 结果
3． 1 抗菌实验结果
3． 1． 1 体外抗菌实验结果
3． 1． 1． 1 抑菌实验结果 3 种样品在接种金黄色葡萄球菌和乙
型溶血性链球菌的平板上均可见不同大小的抑菌圈，而在接种大
肠埃希菌、肺炎克雷伯菌及肺炎链球菌的平板上均未出现抑菌
圈。结果见表 1。
表 1 了哥王生品及两种炮制品对各菌种的抑菌圈直径 mm
样品
金黄色
葡萄球菌
大肠
埃希菌
肺炎克
雷伯菌
肺炎
链球菌
乙型溶血
性链球菌
生品 7． 0 0． 0 0． 0 0． 0 9． 0
汗液炮制品 9． 0 0． 0 0． 0 0． 0 9． 0
人工汗液炮制品 10． 0 0． 0 0． 0 0． 0 9． 0
灭菌蒸馏水 0． 0 0． 0 0． 0 0． 0 0． 0
3． 1． 1． 2 MIC及MBC的测定结果 3 种样品对大肠埃希菌、肺炎
克雷伯菌及肺炎链球菌的 MIC值与 MBC 值完全相同;两种炮制
品对金黄色葡萄球菌的 MIC 值小于生品，但 MBC 值大于生品;
生品与汗液炮制品对乙型溶血性链球菌的 MIC 值及 MBC 值相
同，人工汗液炮制品对乙型溶血性链球菌的 MIC 值与 MBC 值明
显较它们小。结果见表 2。
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LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2015 VOL． 26 NO． 5 时珍国医国药 2015 年第 26 卷第 5 期
表 2 了哥王生品及 2 种炮制品对各菌种的 MIC及 MBC
样品 菌种
不同药物稀释度结果
44． 3
mg·ml － 1
8． 86
mg·ml － 1
4． 43
mg·ml － 1
2． 22
mg·ml － 1
对照
MIC
/mg·ml － 1
MBC
/mg·ml － 1
生品 金黄色葡萄球菌 － + + + + 44． 3 44． 3
大肠埃希菌 － + + + + 44． 3 ＞ 44． 3
肺炎克雷伯菌 － + + + + 44． 3 ＞ 44． 3
肺炎链球菌 + + + + + ＞44． 3 -
乙型溶血性链球菌 － － － + + 4． 43 4． 43
汗液炮制品 金黄色葡萄球菌 － － － － + ≤2． 22 ＞ 44． 3
大肠埃希菌 － + + + + 44． 3 ＞ 44． 3
肺炎克雷伯菌 － + + + + 44． 3 ＞ 44． 3
肺炎链球菌 + + + + + ＞44． 3 -
乙型溶血性链球菌 － － － + + 4． 43 4． 43
人工汗液炮制品 金黄色葡萄球菌 － － － － + ≤2． 22 ＞ 44． 3
大肠埃希菌 － + + + + 44． 3 ＞ 44． 3
肺炎克雷伯菌 － + + + + 44． 3 ＞ 44． 3
肺炎链球菌 + + + + + ＞44． 3 -
乙型溶血性链球菌 － － － － + ≤2． 22 ≤2． 22
“ +”:有菌生长，“ －”:无菌生长
3． 1． 2 体内抗菌实验结果 各给药组动物死亡率均较模型组低，
三种样品的高、中剂量组与模型组比较均有显著性差异
(P ＜ 0． 05，P ＜ 0． 01)，三种样品的低剂量组与模型组比较差异无
显著性(P ＞ 0． 05)。各样品同剂量组别两两比较，亦无显著性差
异。结果见表 3。
表 3 了哥王生品及两种炮制品对感染小鼠死亡率的影响
组别 剂量 /g·kg － 1 n 死亡动物数 死亡率 /%
对照组 － 20 0 0
模型组 － 20 19 95
双黄连组 0． 8 20 14 70
生品高剂量组 3 20 10 50
生品中剂量组 1． 5 20 13 65
生品低剂量组 0． 75 20 15 80
汗液高剂量组 3 20 11 55
汗液中剂量组 1． 5 20 14 70
汗液低剂量组 0． 75 20 16 70
人工汗液高剂量组 3 20 11 55
人工汗液中剂量组 1． 5 20 14 70
人工汗液低剂量组 0． 75 20 18 90
3． 2 抗炎实验结果 各给药组小鼠耳肿胀度均小于模型组，除生
品低剂量组和人工汗液低剂量组外，其余各组与模型组比较差异
显著(P ＜ 0． 05，P ＜ 0． 01)。各给药组之间比较无明显差异
(P ＞ 0． 05)。结果见表 4。
表 4 了哥王生品及两种炮制品对二甲苯所致小鼠耳肿胀度的影响(珋x ± s)
组别 剂量 / g·kg －1 n 肿胀度 /mg
模型组 － 10 4． 41 ± 3． 47
地塞米松组 0． 045 10 1． 07 ± 0． 54＊＊
生品高剂量组 6 10 1． 27 ± 1． 25*
生品中剂量组 3 10 1． 41 ± 0． 79*
生品低剂量组 1． 5 10 4． 00 ± 2． 51
汗液炮制品高剂量组 6 10 1． 28 ± 0． 93*
汗液炮制品中剂量组 3 10 1． 78 ± 1． 33*
汗液炮制品低剂量组 1． 5 10 1． 86 ± 1． 21*
人工汗液炮制品高剂量组 6 10 1． 26 ± 0． 61*
人工汗液炮制品中剂量组 3 10 1． 27 ± 0． 90*
人工汗液炮制品低剂量组 1． 5 10 2． 85 ± 2． 63
与模型组比较，* P ＜0． 05，＊＊ P ＜0． 01;各样品给药量均以生药量计
4 讨论
炮制是依据传统医药理论，按医疗、制剂不同要求及药材自身性
质，对单味药材所采取的加工处理技术，是祖国医学的重要组成部
分。炮制的目的是降低某些中药的毒性，或者提高某些药物的治疗
效果［2］。毒性药才需减毒或去毒才能药用，毒性药材的炮制是中药
炮制学的重要内容，与临床用药安全密切相关。了哥王属有毒药材，
虽药理作用广泛、疗效确切，但应用不慎则引发安全性问题，该药在
临床应用中出现的安全性问题也偶有报道［3，4］。通过对了哥王的合
理炮制是降低其毒性的有效方法，本课题组之前的研究就发现:采用
“汗渍法”及人工汗液炮制法炮制了哥王能降低其毒性。炮制对生药
化学成分有着较大的影响，或是使某些成分的溶解度和浸出量发生
变化，或是导致某些成分消失或转化、生成新的化学成分［5］，所以在
对毒性中药进行炮制减毒的过程中亦可能影响其活性。炮制有毒药
物时一定要注意去毒与存效并重，绝不可偏废，否则，顾此失彼，可能
造成毒去效失，甚至效失毒存的结果，达不到炮制目的［6］。为了考察
“汗渍法”及人工汗液炮制法在具有减毒作用的同时是否降低了药材
的活性，本实验观察了了哥王“汗渍法”及人工汗液炮制法炮制品的
抗菌与抗炎活性，并与生品进行比较，为更全面地评价这两种炮制方
法提供依据。
体外抗菌实验结果显示:3种样品对金黄色葡萄球菌及乙型溶
血性链球菌均有抑制作用;对金黄色葡萄球菌的 MIC值是 2中炮制
品较小，MBC值是生品较小;对乙型溶血性链球菌的 MIC与 MBC值
均是人工汗液炮制品最小。体内抗菌实验结果则表明，3种样品均能
降低金黄色葡萄球菌感染小鼠的死亡率，对感染小鼠具有保护作用，
且 3种样品的保护作用强弱无明显差异。综合分析体内外抗菌实验
结果可认为了哥王生品及两种炮制品的抗菌作用无明显差异。抗炎
实验结果表明:高、中剂量的 3种样品及低剂量的汗液炮制品均能抑
制二甲苯所致的小鼠耳肿胀，但各样品抑制作用强度无明显差异，说
明哥王生品及两种炮制的抗炎作用强度无显著差异。
综上所述，了哥王生品、汗液炮制品及人工汗液炮制品均具
有抗炎及抗菌活性，且 3 种样品的作用强弱无明显差异，表明通
过“汗渍法”及人工汗液炮制法对了哥王进行炮制后，未降低其
抗菌及抗炎活性。
参考文献:
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时珍国医国药 2015 年第 26 卷第 5 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2015 VOL． 26 NO． 5