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2016 年 6 月 27 日收稿
△基金项目:海南省中药现代化专项———海南黎族特色抗炎止血
药物院内制剂的研究开发(项目编号 ZY201420)
作者简介:谭小玉(1989 －) ，女，本科学士，研究实习员，主要从事
海南黎药质量标准研究方向。E － mail:tan_xiaoyu@ 126． com。
* 通讯作者:谭小玉(1989 －) ，女，本科学士，研究实习员，主要从
事海南黎药质量标准研究方向。E － mail:tan_xiaoyu@ 126． com。
海南黎药毛黄肉楠质量标准的初步研究△
谭小玉*
(海南省药物研究所，海南 海口 570311)
摘 要:目的:初步研究了海南黎药毛黄肉楠的质量标准。方法:对毛黄肉楠进行化学成分预试验，采用紫外 －可见分光光
度法测定毛黄肉楠枝干中总黄酮含量，并对其水分、灰分和浸出物进行测定。结果:初步明确了毛黄肉楠化学成分类型，建
立总黄酮含量测定紫外分光光度法，以芦丁为对照品，测定波长为 506nm，回归方程为 Y = 12． 08580X － 0． 01610(r2 = 0．
9999) ，在 0． 003 ～ 0． 077mg /mL线性关系良好，平均回收率为 100． 16%(ＲSD1． 29%，n = 6) ;并确定了毛黄肉楠枝干水分、
总灰分和浸出物的限量。结论:所建立方法简便、快捷、准确，可为毛黄肉楠药材质量标准的制定提供参考。
关键词:毛黄肉楠;总黄酮;含量测定;质量标准
中图分类号:Ｒ298． 1 文献标识码:B 文章编号:1006 － 6810(2016)11 － 0050 － 03
毛黄肉楠(Actinodaphne pilosa (Lour．)Merr．)系樟科
(Lauraceae)黄肉楠属植物。毛黄肉楠具有净化大气污染
的作用，多作为行道树、绿化树、生态公益林等在城市进行
栽培［1］。在海南，黎族人民将毛黄肉楠枝干作为民间验方
的组成之一，这已经有很长的使用历史。毛黄肉楠又称茶
胶树、刨花、胶木等，文献记载毛黄肉楠具有祛风、消肿、散
瘀、解毒、止咳之效，并能治疮疖，对跌打亦有效［2］。有文
献采用色谱 －质谱联用技术对毛黄肉楠叶片挥发油成分进
行分析，鉴定出 75 种挥发性化合物［3］，而枝干的成分分析
未见报道。目前对毛黄肉楠的研究甚少，尚无其质量标准
研究的文献报道，这极大地限制了毛黄肉楠药材的开发利
用。本文通过查阅相关文献资料，拟从化学成分预试验、总
黄酮含量测定、水分、灰分、浸出物等方面进行分析研究，按
2015 版《中华人民共和国药典》的方法和要求规范制定毛
黄肉楠的质量标准，以促进海南黎药毛黄肉楠的开发使用。
1 仪器与材料
1． 1 仪器:岛津 UV － 2401PC 紫外分光光度计，岛津
AUW220D电子天平，DHG － 9203A 型电热鼓风干燥箱(上
海一恒科学仪器有限公司) ，SXZ － 4 － 10N 型箱式电阻炉
(上海一恒科技有限公司) ，万能电子炉，SK250HP 型超声
波清洗器(上海科导超声仪器有限公司) ，XMTE － 8112 型
电热恒温水浴锅(上海精宏实验设备有限公司)。
1． 2 药材:毛黄肉楠采自海南五指山地区，经海南大学黄
世满教授鉴别为樟科植物毛黄肉楠 Actinodaphne pilosa
(Lour．)Merr．的枝干。
1． 3 试剂:芦丁对照品(批号 100080 － 201408，中国药品
生物制品检定所) ;其余试剂均为分析纯，水为超纯水。
2 方法与结果
2． 1 化学成分预试验［4］
2． 1． 1 水提取液的制备及结果:取毛黄肉楠粉末 2g，置锥
形瓶中，加入 50mL超纯水，于 50 ～ 60℃水浴中温浸 1h，滤
过，滤液供检识备用。经 Molish 反应阳性，表明可能含有
糖、多糖或苷类物质;三氯化铁 －铁氰化钾、明胶 －氯化钠
反应均阳性，表明可能含有鞣质;香草醛 －盐酸反应阳性，
表明可能含有间苯二酚和间苯三酚结构的化合物。
2． 1． 2 石油醚提取液的制备及结果:取 1g毛黄肉楠粉末，
加 10mL石油醚，室温下浸渍提取 2 ～ 3h，滤过，滤液供检识
备用。油斑试验中，滤纸上未留下油斑表明本品可能不含
有油脂或挥发油。
2． 1． 3 乙醇提取液的制备及结果:取毛黄肉楠粉末 0． 5g，精
05 中国民族医药杂志 2016 年 11 月第 11 期
DOI:10.16041/j.cnki.cn15-1175.2016.11.034
密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入 75%乙醇 20mL，超声提取
2次，每次 60min，滤过，合并滤液，水浴蒸干，残渣加适量 75%
乙醇溶解转移至 10mL量瓶中，加 75%乙醇定容至刻度，即得
乙醇提取液，用于黄酮类成分预试验。系列颜色反应结果(见
表 1)均可表明，毛黄肉楠中存在黄酮类化合物。
表 1 黄酮类成分预实验反应结果
试液或反应名称 正反应指标 现象
盐酸 －锌粉试验 溶液变红 (+)
浓硫酸反应 颜色逐渐加深，橙色变成深红色 (+)
盐酸 －镁粉试验 溶液变红 (+)
三氯化铝试验 绿色荧光 (+)
硼酸丙酮枸橼酸丙酮试验 绿色荧光 (+)
氨熏试验 呈橙黄色，后渐渐退去 (+)
三氯化铁反应 溶液墨绿色 (+)
碳酸钠反应 溶液红棕色 (+)
氢氧化钠反应 溶液呈红色，久置褪色 (+)
2． 2 含量测定方法学研究
2． 2． 1 对照品溶液的制备:取干燥的芦丁对照品 12mg，
精密称定，置 50mL量瓶中，加 75%乙醇溶解，并定容至刻
度，摇匀，得质量浓度为 0． 2414mg /mL的芦丁对照品溶液。
2． 2． 2 供试品溶液的制备:取毛黄肉楠粉末 0． 5g，精密称
定，置具塞锥形瓶中，精密加入 75%乙醇 20mL，于水浴中
保持微沸回流提取 2 次，每次 60min，滤过，合并滤液，水浴
蒸干，残渣加适量 75%乙醇溶解转移至 10mL 量瓶中，加
75%乙醇定容至刻度，得待测供试品溶液。
2． 2． 3 显色方法［5］:精密移取待测液 1mL，置 25mL 量瓶
中，加 5% NaNO2 溶液 1mL，摇匀，放置 6min，加 10% Al
(NO3)31mL，摇匀，放置 6min，加 4% NaOH 溶液 4mL，加水
定容至刻度，摇匀，放置 15min，以 75%乙醇溶液 1mL 加显
色剂用水定容为空白，测定。
2． 2． 4 测定波长的选择:取对照品溶液及供试品溶液按
2． 2． 3 项下显色方法加入显色剂，以相应溶剂为空白，于
400 ～ 700nm范围内进行扫描。发现两者最大吸收波长均
在 506nm左右，故选定检测波长为 506nm。
2． 2． 5 线性关系考察:精密量取芦丁对照品溶液 0． 3，0．
5，1． 0，2． 0，4． 0，6． 0，8． 0mL，分别置 25mL量瓶中，按 2． 2． 3
项下显色方法加入显色剂，以相应溶剂为空白，于 506nm
波长处测定。以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准
曲线，得回归方程为 Y = 12． 08580X － 0． 01610(r2 = 0．
9999) ，表明芦丁在 0． 003 ～ 0． 077mg /mL呈良好线性关系。
2． 2． 6 精密度试验:精密量取对照品溶液 4mL，置于
25mL量瓶中，按显色方法加入显色剂，以相应溶剂为空白，
于 506nm处测定吸光度，重复测定 6 次，记录吸光度值，
ＲSD 0． 14%，结果表明该方法精密度良好。
2． 2． 7 显色稳定性试验:精密量取供试品溶液 1mL，置
25mL量瓶中，按显色方法加入显色剂，以相应溶剂为空白，
于 506nm处测定吸光度，每隔 5min 扫描 1 次，记录 30min
内供试品溶液的吸光度值，结果表明该供试品溶液显色后
放置 15min达到稳定，30min内 ＲSD 1． 50%。结果见表 2。
表 2 稳定性试验结果
时间(min) 0 5 10 15 20 25 30 ＲSD%
吸光度值 0． 546 0． 542 0． 541 0． 539 0． 539 0． 533 0． 524 1． 50
2． 2． 8 重复性试验:精密称取同一份样品粉末共 6 份，每
份 0． 5g，精密称定，平行按 2． 2． 2 项下方法制备供试品溶
液，按 2． 2． 3 项下显色方法加入显色剂，在 506nm标准曲线
下测定吸光度，并计算含量和 ＲSD 值。实验结果表明该方
法重复性良好，ＲSD 2． 13%。
2． 2． 9 加样回收率试验:取同一份已知含量的样品粉末
共 6 份，各 0． 25g，精密称定，分别精密加入芦丁对照品 6．
095mg，按 2． 2． 2 项下方法制备供试品溶液，精密移取供试
品溶液 1mL，按 2． 2． 3 项下显色方法加入显色剂，显色后于
506nm标准曲线下测定，记录吸光度值，计算回收率。试验
结果平均回收率为 98． 10%，ＲSD 1． 57%。结果见表 3。
表 3 毛黄肉楠芦丁加样回收率
取样量
(g)
原有量
(mg)
加入量
(mg)
吸光度
测得量
(mg)
回收率
(%)
平均值
(%)
ＲSD
(%)
0． 2635 6． 0495 6． 095 0． 569 12． 1030 99． 32
0． 2622 6． 0197 6． 095 0． 568 12． 0824 99． 47
0． 2628 6． 0334 6． 095 0． 571 12． 1444 100． 26
0． 2638 6． 0564 6． 095 0． 572 12． 1651 100． 23
0． 2629 6． 0357 6． 095 0． 578 12． 2892 102． 60
0． 2614 6． 0013 6． 095 0． 566 12． 0410 99． 09
100． 16 1． 29
3 样品测定
准确称取毛黄肉楠枝干粉末，每个样 3 个重复，按 2．
2． 2 项下方法制备供试品溶液，精密移取供试品溶液 1mL，
按 2． 2． 3 项下显色方法，参照芦丁线性回归方程，测得毛黄
肉楠枝干总黄酮含量。结果见表 4。
表 4 毛黄肉楠总黄酮含量结果
批号 总黄酮含量(mg /g)
1 25． 79
2 21． 81
3 22． 32
4 检查
按《中华人民共和国药典》2015版四部通则 0832第二法
(烘干法)、通则 2302、通则 2201对采集的毛黄肉楠枝干水分、
总灰分和浸出物进行测定。结果如下(表 5):水分测定结果为
10． 31% ～11． 06%;总灰分测定结果为 3． 92% ～5． 03%;水溶性
浸出物的测定结果为 4． 99% ～5． 97%;醇溶性(溶剂为 95%乙
醇)浸出物的测定结果为 3． 49% ～4． 60%。
表 5 毛黄肉楠水分、总灰分、浸出物测定结果(n = 3)
批次 水分 /% 总灰分 /%
水溶性浸
出物 /%
醇溶性浸
出物 /%
1 10． 98 4． 16 5． 54 3． 49
2 11． 06 3． 92 4． 99 4． 60
3 10． 31 5． 03 5． 97 3． 85
5 讨论
5． 1 通过化学成分预试验结果表明，毛黄肉楠中可能含有
糖、多糖或苷类物质、鞣质、间苯二酚和间苯三酚结构的化合
152016 年 11 月第 11 期 中国民族医药杂志
物。根据系列颜色反应表明，毛黄肉楠中存在黄酮类化合物。
5． 2 通过对比冷浸提取法、超声提取法和回流提取法，根
据提取效果，回流法更适宜作为该药材总黄酮含量测定的
提取方法。以芦丁为对照，NaNO2 － Al(NO3)3 － NaOH 显
色反应体系，采用紫外 －可见分光光度法测定毛黄肉楠中
总黄酮的含量，结果表明该方法具有操作简单，测定快速，
对仪器要求不高等优点。
5． 3 Al(NO3)3 比色法常用于总黄酮的含量测定，原理是
在碱性条件下，可与黄酮形成红色螯合物为特征。进行比
色法测量时，要注意考察吸光度值的稳定性，在 NaNO2 － Al
(NO3)3 － NaOH体系中，碱性条件经常会影响试验结果的
准确度和稳定性［6］。根据试验结果，在稳定性试验中，供
试品溶液显色后放置 15min 测定吸光度较稳定，实验中吸
光度值呈减小趋势，可能因黄酮在碱性条件下与铝离子形
成的络合物时间长不稳定，易分解有关，测定过程中应注意
显色后及时测定，避免造成实验误差。
5． 4 根据实验结果，初步拟定拟定毛黄肉楠(枝干)水分不得
超过 13． 0%;总灰分不得超过 6． 0%;水溶性浸出物含量不得
低于 4． 0%，醇溶性(溶剂乙醇)浸出物含量不得低于 3． 0%。
目前，对毛黄肉楠的药用价值探索仍处于初级阶段，更
完善的质量控制方法需要后续进一步的研究。
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2016 年 7 月 6 日收稿
Preliminary Study on Quality Standards of Hainan Li Folk
Medicine Actinodaphne pilosa (Lour．)Merr．
TAN Xiao － yu
Pharmaceutical institute of Hainan Province，Haikou Hainan 570311 China
［Abstract］Objective:To study quality standards for Actinodaphne pilosa (Lour．)Merr． Method:Preliminary
tests for chemical constituents of Actinodaphne pilosa (Lour．)Merr． was performed． Total flavonoids were deter-
mined by ultraviolet spectrophotometry(UV)． Determination of moisture，total ash and extractives were studies
based on Chinese Pharmacopoeia published in 2015． Ｒesult:Its chemical constituents were determined． Limit of
moisture，total ash and extractives in Actinodaphne pilosa (Lour．)Merr． were determined． A quantitative meth-
od for the determination of total flavonoids by UV was established，using rutin as comparison sample，the detec-
tion wave length was set at 506nm． The standard curve of total flavonoids was linear in the range of 0． 003 ～ 0．
077mg /mL (r2 = 0． 9999)and its average recovery ratio was 100． 16 %(ＲSD 1． 29%)． Conclusion:The
method simple，rapid and accurate can be used for the quality standards of Actinodaphne pilosa (Lour．)Merr．
［Key words］Actinodaphne pilosa (Lour．)Merr．;total flavonoids ;quantitative method ;quality standards
(上接第 27 页)主药给予利尿、泻湿热的永瓦 － 4 味汤，祛
肾寒、利尿的苏格木乐 － 10，消“黏”、固精的萨日冲阿，温
肾、利水、消食、燥“协日乌素”的升阳十一味丸，高优 － 9，
阿如日 － 18，吉如顺 － 8 等辨证治疗慢性前列腺炎有效率
达到 98． 06%。总之，采用蒙药治疗该病明显提高临床疗
效，减轻因长期服用西药带来的不良反应;减毒增效，缩短
疗程，减少复发率，提高临床疗效，值得推广。
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25 中国民族医药杂志 2016 年 11 月第 11 期