全 文 ：China Pharmacy 2012Vol.23No.15 中国药房 2012年第23卷第15期
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（收稿日期：2011-09-06修回日期：2012-02-03）
􀤃􀤃􀤃􀤃􀤃􀤃􀤃􀤃􀤃􀤃􀤃􀤃􀤃􀤃􀤃􀤃􀤃􀤃􀤃􀤃􀤃􀤃􀤃􀤃􀤃􀤃􀤃􀤃􀤃􀤃􀤃􀤃􀤃􀤃􀤃􀤃􀤃􀤃􀤃􀤃􀤃􀤃􀤃􀤃􀤃􀤃􀤃􀤃􀤃􀤃􀤃􀤃􀤃􀤃􀤃􀤃􀤃􀤃􀤃􀤃􀤃􀤃
Δ 美国国家卫生研究院（NIH）补充替代医学基金资助课题
（5F05AT002013- 2）
＊硕士研究生。研究方向：天然药物活性成分筛选。电话：
020-62789419。E-mail：pharmacology2009@163.com
#通讯作者：教授。研究方向：天然药物活性成分筛选。电话：
020-61648593。E-mail：yxie201203@126.com
过山枫多糖的体外抗补体活性研究Δ
李 强 1＊，佟 丽 2，谢 扬 1#（1.南方医科大学药学院，广州 510515；2.南方医科大学中医药学院，广州
510515）
中图分类号 R285. ；R97 文献标志码 A 文章编号 1001- 408（2012）15-1348-03
DOI 10.6039/j.issn.1001- 408.2012. 5.02
摘 要 目的：研究过山枫多糖的体外抗补体活性。方法：采用水提醇沉法提取、分离过山枫多糖；通过苯酚-硫酸法测定其多糖
含量；红外光谱确定其多糖结构；将过山枫多糖分别与补体溶血试验中的各要素混合，作用一段时间后再加入其他组分，观测体系
的溶血情况，探讨其对补体经典途径激活的作用。结果：分离获得桔红色过山枫多糖，其多糖含量为58.3％。红外光谱显示过山
枫多糖主要由α-吡喃糖构成，含有α-D-Glcp。在经典激活途径中，过山枫多糖与补体预先混合能降低体系的溶血，其半数溶血浓
度（CH50）为302μg·mL－1，低于肝素的CH50值699μg·mL－1。结论：过山枫多糖具有抗补体活性。
关键词 过山枫多糖；抗补体活性；提取分离
In Vitro Anti-complementary Activity of Celastrus aculeatus Polysaccharides
LI Qiang，XIE Yang（School of Pharmacy，Southern Medical University，Guangzhou 510515，China）
TONG Li（College of Traditional Chinese Medicine，Southern Medical University，Guangzhou 510515，China）
ABSTRACT OBJECTIVE：To anti-complementary activity of Celastrus aculeatus polysaccharides. METHODS：C. aculeatus poly-
saccharides were isolated and separated by water extraction and alcohol precipitation method. The contents of polysaccharides were
determined by phenol-sulfuric acid method. The polysaccharide structure by infrared spectroscopy. C. aculeatus polysaccharides
were mixed with the each factor of complement hemolysis test respectively. After a time，other components were added. Hemolysis
of complement system was observed，and the effects of C. aculeatus on complement activation by classical pathway were investigat-
ed. RESULTS：We obtained orange-red polysaccharides from C. aculeatus，which the content of polysaccharides was 58.3％ . IR
spectrum showed C. aculeatus polysaccharides were consisted of α-pyranose，containing α-D-Glcp. In classical pathway，the hemo-
lysis was decreased after pre-incubation of C. aculeatus polysaccharides with complement. CH50value of C. aculeatus polysaccha-
rides was 302μg·mL－1，which was less than heparin CH50value of 699μg·mL－1. CONCLUSION：C. aculeatus polysaccharides
have anti-complementary activity.
KEY WORDS Celastrus aculeatus polysaccharides；Anti-complementary activity；Extraction and isolation
过山枫（Celastrus aculeatus Merr.）为卫矛科南蛇藤属植
物，药用部位为根和藤茎，具有祛风除湿、行气活血、消肿解毒
等功效，我国民间长期使用过山枫来治疗风湿痹痛等证[1]。现
代药理学研究证明，过山枫乙醇提取物具有抗类风湿性关节
炎和免疫调节作用[2，3]。补体系统非正常激活会引起类风湿性
关节炎、系统性红斑狼疮等疾病[4，5]。天然产物中多糖类补体
抑制剂的研究和开发备受到国内、外学者的广泛关注[6]。Zhu
HW等[7]和Xu H等[8]对杜仲、柴胡多糖的研究表明，其具有抗补
体活性作用。目前，国内、外仍未见关于过山枫多糖（CAP）药
理作用研究的报道。本研究首次制备CAP，并对其理化性质
和抗补体活性做初步探讨。
1 仪器与材料
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中国药房 2012年第23卷第15期 China Pharmacy 2012Vol.23No.15
1.1 仪器
Eppendoff 5810R型低温高速离心机（德国 Eppendoff 公
司）；TECAN GENios Pro型多功能酶标仪（瑞士Tecan公司）；
CHB-100型恒温金属浴（杭州博日科技有限公司）；Nicolet
6700型傅里叶变换红外光谱仪（美国赛默飞世尔科技公司）；
TU-1901型双光束紫外-可见分光光度计（北京普析通用仪器
有限公司）。
1.2 试药
过山枫根和藤茎采自广州市增城区，经中国科学院华南
植物研究所叶华谷研究员鉴定为真品，样本保留在中国科学
院华南植物研究所样本馆，编号为10943。抗绵羊红细胞抗体
（溶血素，效价为1∶4000，浙江玉环县南方试剂厂）；肝素钠（广
州斯佳生物科技有限公司，含量：150μg·mg－1）；三蒸水、去离
子水为笔者自制；其余试剂均为分析纯。
1.3 动物与细胞
豚鼠2只，♂，体重500～700g，由南方医科大学实验动物
中心提供（动物生产许可证号：SCXK（粤）2006- 015）。绵羊
红细胞（浙江玉环县南方试剂厂）。
2 方法
2.1 CAP的制备
干燥的过山枫藤茎粉末（200g）依次用丙酮、甲醇索式提
取各12h，脱脂。倒出残留物，于50℃干燥24h。加10倍量水
于干燥的过山枫残留物中，80℃提取3次，每次3h。抽滤，滤
液合并减压浓缩，浓缩液1000r·min－1离心10min，取上清液
加4倍量95％乙醇4℃静置过夜，3000r·min－1离心5min后，
沉淀重复水溶醇沉步骤2次。沉淀用去离子水复溶，用Sevage
试剂（氯仿∶正丁醇＝4∶1，V/V）去蛋白4次，水溶液部分装入透
析袋（截留分子量：3500Da），在去离子水中4℃透析48h，透
析液冷冻、干燥，获得CAP。
2.2 CAP的理化性质
2.2.1 CAP中多糖的含量测定 按苯酚-硫酸法测定，精密称
取无水葡萄糖54mg，溶于去离子水中并定容至500mL，分别
吸取0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9mL，加水稀释至2.0mL
后，依次加入6％苯酚1.0mL和浓硫酸5.0mL。静置10min，
摇匀，室温放置20min后于490nm波长处测定吸光度，取2.0
mL去离子水按同法显色作为空白，以葡萄糖浓度（x，μg·
mL－1）为横坐标，吸光度（y）为纵坐标，制备标准曲线。
精密称取CAP5.8mg，去离子水溶解，并定容至50mL。
取CAP溶液1.0mL，按上述步骤操作，测定其吸光度，以标准
曲线计算多糖含量。
2.2.2 CAP的波谱分析 取CAP2mg，与KBr研磨混合后，经
压片机压成透明薄片，采用傅里叶变换红外光谱仪扫描分析，
以KBr空白片作参比，扫描范围4000～400cm－1。取CAP近
饱和溶液，以蒸馏水为空白对照，于紫外-可见光谱205～400
nm波长区域扫描。
2.3 豚鼠补体效价测定
取一定量豚鼠血清，加入明胶巴比妥（GVB2+）缓冲液制备
成1∶20浓度的溶液，并依次对倍稀释为1∶40～1∶640浓度的
溶液。取稀释好的豚鼠血清0.1mL，与等体积溶血素和绵羊
红细胞混匀，不足部分以GVB2+缓冲液补至0.6mL 。37℃金
属浴30min，4℃下4000r·min－1离心10min，取上清液在570
nm波长处测定吸光度。以0.1mL绵羊红细胞与0.5mL GVB2+
缓冲液组成空白管的吸光度作为0％溶血，以0.1mL绵羊红细
胞与0.5mL三蒸水组成的全溶血管的吸光度作为100％溶血，
计算每管溶血百分率，并制备溶血曲线。根据试验结果确定
豚鼠血清补体效价。选择合适的稀释度的豚鼠血清进行后续
试验。
2.4 CAP的抗补体活性
分别取0.l mL稀释度为1∶2～1∶64的CAP溶液与等体积
的适宜稀释度的豚鼠血清、溶血素和5％绵羊红细胞混合，不
足部分以GVB2+缓冲液补至0.6mL，其余部分按“2.3”项下方
法操作。以肝素溶液为阳性对照。按如下公式计算溶血率，
并绘制溶血曲线：
溶血率＝Ac－（As－Ap）/Ac×100％
式中，As为加多糖样品溶液的溶血体系在570nm波长处
的吸光度；Ap为不同稀释度的CAP与GVB2+缓冲液的对照在
570nm波长处的吸光度；Ac为GVB2+缓冲液、血清和致敏绵羊
红细胞的上清液在570nm波长处的吸光度。
3 结果
3.1 CAP的性状和多糖含量
过山枫经脱脂，水提醇沉，Sevage法去蛋白，冷冻、干燥获
得一种桔红色絮状固体物质，即CAP。用不同浓度的葡萄糖
溶液经苯酚-硫酸法检测其吸光度，获得的回归方程为 y＝
0.016x－0.0038（r＝0.9997）。CAP经苯酚-硫酸法检测其多
糖含量为58.3％。
3.2 CAP的波谱分析
在260nm波长处没有吸收峰，表明CAP中无核酸；而在
280nm波长处有一个肩峰，表明CAP是与蛋白质复合的多
糖。3383.6cm－1处宽而强的吸收峰代表了羟基的伸缩振动；
2933.5cm－1处弱的吸收峰是由于C-H的伸缩振动和弯曲振动
造成的；在1646.8cm－1处为水的振动吸收峰；在1200～
1000cm－1的区域为吡喃环的醚键（C-O-C）和羟基的变角振动
吸收峰；1021.9、 078.8、1154.8cm－1是α-吡喃糖的特征吸收峰，
934.7cm－1处吸收峰为α-D-Glcp的特征吸收峰，847.5cm－1吸
收峰为α-端基差向异构的C-H变角振动[9]。这说明，CAP主要
由α-吡喃糖构成，含有α-D-Glcp。CAP的紫外-可见光谱见
图1；CAP的红外光谱见图2。
3.3 补体效价的测定
在补体稀释浓度为1∶40时，体系基本达到全溶血，在1∶
80时，溶血率开始下降。所以选择补体稀释浓度为1∶40，确保
体系能够全部溶血。不同稀释倍数的补体溶血率曲线见图3。
3.4 CAP对补体的作用
CAP稀释浓度为1∶4时仍能完全抑制溶血，在1∶4～1∶32
（浓度为913～114μg·mL－1）范围内产生突跃达到基本完全溶
血。经计算，不同稀释倍数的补体溶血率曲线的半数溶血浓
2.5
2.0
1.5
1.0
0.5
0.0
吸光
度
210 240 270 300 330 360 390
波长/nm
图1 CAP的紫外-可见光谱
Fig 1 UV visible spectrum of CAP
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度（CH50）为302μg·mL－1，而肝素的CH50为699μg·mL－1。不
同稀释倍数的补体溶血率曲线的抗溶血活性远大于肝素。不
同浓度的CAP和肝素对补体溶血体系的影响见图4。
4 讨论
由于CAP本身具有颜色，造成最终体系的吸光度实际是
由溶血吸光度和CAP吸光度两部分构成。为了消除这一影
响，将不同稀释度的CAP与缓冲液混合，同样金属浴离心测吸
光度作对照。在计算溶血百分率时，先将CAP的吸光度从体
系中扣除然后计算。
类风湿性关节炎等多种自身免疫疾病的发生、传导与补
体过度激活有关，而补体亢进也在许多疾病中作为重要诊断
指标，但目前市场上没有针对补体的抗炎症药物。补体抑制剂
的研究越来越受到关注，大量文献表明，许多天然产物能有效地
阻止补体激活，其成分主要存在于多糖、黄酮类和三萜类中[6]。
其中多糖类生药来源充足，可以从中寻找到无毒或低毒、廉价
的抗补体药物。已报道具有抗补体活性的杜仲多糖EWDS-2
的CH50值为282μg·mL－1[7]，柴胡多糖D3-S1的CH50值为479μ
g·mL－1[8]，而CAP的CH50值介于两者之间，CAP抗溶血作用强
于肝素，是一种潜在的抗补体药物。CAP抗补体作用的位点
和CAP多糖的一级结构表征还有待进一步研究。
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（收稿日期：2011-06-12修回日期：2011-11-07）
170
150
130
110
90
70
50
30
10
0 3000 2000 1000
波长/cm－1
透光
率/％
图2 CAP的红外光谱
Fig 2 IR spectrum of CAP
1.501.651.80 1.95 2.102.25 2.40 2.552.80 2.85 3.00
lgc
100
85
70
55
40
25
10
－5
溶血
率/％
图3 不同稀释倍数的补体溶血率曲线
Fig 3 Hemolysis rate curves of various dilutions of comple-
ment
1.20
1.00
0.80
0.60
0.40
0.20
0.001.50 1.75 2.00 2.25 2.50 2.75 3.00 3.25 3.50
lgc
溶血
率/％
—■—CAP
—▲—肝素
图4 不同浓度的CAP和肝素对补体溶血体系的影响
Fig 4 Effect of various concentrations of CAP and heprin
on hemolysis system of complement
世界卫生组织传统医学国际疾病分类项目（WHO-ICTM）第二次工作会议在上海召开
本刊讯 由国家中医药管理局国际合作司主办、上海市
中医药发展办公室承办的世界卫生组织传统医学国际疾病分
类项目（WHO-ICTM）第二次工作会议于2012年2月23日～
25日在上海召开。本次会议旨在总结、分析前阶段工作情况，
进一步加强和指导项目工作的管理，促进我国的 ICTM顺利开
展。
与会专家对项目的进展给予了充分肯定。大家普遍认
为，ICTM是一项具有开创性、引领性、主导性的工作，在前一
阶段的工作中已经形成了良好的创新机制，获得了进展，取得
了共识。专家们建议，在下一阶段工作中，要充分认识到国际
疾病分类（第11版，ICD-11）是一个整体；要坚持中医药传统理
论的内涵，同时也要遵守相关国际规则和 ICD总的框架；对于
纳入 ICTM的内容，要重视其风险评估；要规范标准的制订工
作，加快国内标准的制订、修订和发布，更好地发挥国内标准
的支撑作用；进一步完善文献工作，在审评系统中增加参考标
准等内容；今后的推广工作需要很大一批专业人员来参与，要
重视提前培养青年人才。
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