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中国食品添加剂
China Food Additives试验研究
2015年第6期
芫荽中黄酮类化合物的提取
及其体外抗氧化活性研究
杨洋，朱晓华，李煜彬
（广东药学院食品科学学院，中山 528458）
摘 要：目的：确定芫荽中黄酮类化合物的最佳提取条件，比较芫荽不同部位的抗氧化活性。方法：采用
正交实验确定芫荽中黄酮类化合物提取的最佳方案，以芦丁为对照品，用紫外分光光度计分别测定其根、茎、
叶的黄酮类化合物含量，采用 Fenton反应体系产生 · OH与邻苯三酚自氧化产生 O2-及对 DPPH自由基消除作
用，研究芫荽根、茎、叶提取液对三者的清除作用。结果：最佳提取条件为：乙醇浓度为 70%、温度为 90℃、
提取时间为 2.5h。芫荽根、茎、叶的黄酮类化合物含量分别为：13.00mg/mL、20.00mg/mL、102.00mg/mL。芫
荽根、茎、叶提取液对 · OH、O2-及 DPPH自由基均有清除作用。结论：芫荽的根、茎、叶均具有较强的抗氧
化活性，且芫荽根、茎、叶对 · OH、O2-及 DPPH自由基的消除能力均为：叶＞根＞茎，即根、茎、叶抗氧化
活性的大小为：叶＞根＞茎。
关键词：芫荽；黄酮类化合物；抗氧化性
中图分类号：TS202.1 文献标识码：A 文章编号：1006-2513（2015）06-0114-06
The study on the extraction and antioxidative activity in vitro of
fl avonoids from coriander
YANG Yang，ZHU Xiao-hua，LI Yu-bin
（Food Science School of Guangdong Phamaceutical University，Zhongshan 528458）
Abstract：Objective：To determine the best extracting condition of fl avones from coriander and the antioxidation
capacities of different parts of coriander. Methods：Orthogonal experimental method was applied to optimum the
extraction. The flavones contents from coriander root，stem and leaf were determined by UV spectrophotometer
respectively，rutin was used as the control. The Fenton reaction was carried out for scavenging abilities on the
hydroxyl free base and oxygen free radical. Results：The best technical condition of the extraction was：ethanol 60%，
the temperature 90°and the extracting time 2.5 hours. The flavones content in root，stem and leaf was 13.00mg/
mL、20.00mg/mL、102.00mg/mL respectively. The extracts of coriander root，stem and leaf had strong ability in
clearing both hydroxyl free base and oxygen free radical. Conclusion：Different parts of coriander all have remarkable
antioxidative activities. The scavenging abilities of DPPH free radical for hydroxyl free base and oxygen free radical are
in the order of leaf＞ root＞ stem. In other words，the antioxidation ability of coriander are in the order of：leaf＞
root＞ stem.
Key words：coriander；fl avones；antioxidation
收稿日期：2015-01-28
作者 简介：杨洋（1982-），女，双硕士研究生，博士在读，广东药学院食品科学学院实验中心实验师，研究方向：食品生物工程。
E-mail：youngest_1027@hotmail.com。
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2015年第6期
“芫荽”，由于其特殊的芳香味，所以民间俗
称香菜。近年来，随着对芫荽研究的深入，芫荽
已提取出多种成分与研究其作用。研究发现，芫
荽中黄酮类化合物的含量高于柿叶与花生壳中
的黄酮类化合物［1-3］，其黄酮类化合物的抗氧化
效果接近同浓度下的人工抗氧化剂 BHT、PG及
维生素 C［4］。李峰研究了芫荽籽的黄酮类化合物
含量以及发现在其提取条件中，提取物的添加量
到 0.15%时抗氧化能力超过过 0.02%BHT［5］，进
一步发现了芫荽黄酮类化合物的抗氧化性具有
意义。
自由基是指外层轨道含有未配对电子的原子
或特殊基团，人的体内自由基主要包括氧自由基
与非氧自由基。而与人体最紧密关系的是氧自由
基，其中形成最早的是 O2-。O2-与许多疾病的
起因和老化有很大的关系，也是脂质过氧化的起
因，适度补充外源性抗氧化性剂可清除自由基，
从而阻断脂质过氧化反应。自由基可被抗氧化剂
清除的研究日益受到关注，而黄酮类物质为一类
天然的抗氧化剂引起了人们的注意［6］。芫荽全株
植物皆可食用，但一般日常只吃叶与茎，将根部
丢弃，得不到充分人利用，主要原因是人们对芫
荽根部的了解甚少。本实验不仅是对香菜的未来
发展提供依据，对容易被忽略的根部的发展提供
更多的证明。
1 仪器与试剂
TU-1901 双光束紫外可见分光光度计 （北京
普析通用仪器有限责任公司）；
试 剂（ 及 浓 度 ）：25mmol/L 邻 苯 三 酚，
9mmol/L 水 杨 酸，8mol/L 盐 酸，8.8mmol/L 过
氧化氢，10%硝酸铝，5%亚硝酸钠，50mmol/L
Tris-HCl ，9mmol/L 硫酸亚铁，4%氢氧化钠，
无水乙醇，1.1-二苯基 -2-苦肼基，芦丁标准
品等。
2 实验方法
2.1 芦丁标准品的标准曲线绘制
根据文献［7］，准确秤取芦丁标准品 25mg置
于 100mL的容量瓶中，加入 60%的乙醇溶液配
制成 0.25mg/mL的标准溶液，在分别移取 0.0，
4.0，8.0，12.0，16.0，20.0 和 24.0 mL 于 100mL
的容量瓶中，向其中依次加入 3mL 5%的亚硝酸
钠，摇匀，放置 6min，再加入 3mL 10%的硝酸
铝，摇匀，放置 6min，再加入 40mL 4%的氢氧
化钠溶液，在加水至刻度，摇匀，放置 15min。
以试剂空白为参比溶液，用紫外分光光度计在波
长 510nm下测吸收光度，绘制其标准曲线。
2.2 芫荽中黄酮类化合物提取的正交试验
根据文献［8-10］，影响黄酮类浸提效果的因素
主要有三个：提取试剂、提取时间和提取温度，
本实验采取 L16（43）正交设计进行选择实验。以
提取的黄酮类化合物含量的提取率为指标来确定
最佳提取条件。
2.3 芫荽叶、茎、 根各自黄酮类化合物含量的测
定
新鲜芫荽用蒸馏水洗净，放入干燥箱 50℃烘
干水泽。烘干后的芫荽分开叶、茎、根分别用刀
切碎，称取 5g再加入乙醇溶液按 1∶ 15浸泡于
水浴箱中提取，过滤，滤液备用。然后提取的叶
滤液稀释成 5mg/mL，提取的茎和根滤液均稀释
成 10mg/mL，以蒸馏水做空白，用紫外分光光度
计在 510nm下测量吸光度。根据回归方程算出样
品黄酮类化合物的浓度，按公式（1）计算样品
中的黄酮类化合物的含量，
样品中黄酮类化合物含量 =C×V/m 公式（1）
式中：C—样液中的黄酮含量类化合物含量
（mg/mL）；
V—样液提取体积（mL）；
m—样品质量（g）。
2.4 芫荽乙醇提取液对羟自由基消除作用
参照 Fenton反应原理及陈志红［1］等方法，
取 15支试管，依次加入 2.0mL 9mmol/L FeSO4，
2.0mL提取液（分别取根、茎、叶三种提取液，每
种的浓度分别为：10mg/mL、20mg/mL、30mg/mL、
40mg/mL、50mg/mL），2.0mL 9mmol/L 水 杨 酸
和 2.0mL 8.8mmol/L H2O2。摇均匀后静置反应
30min，以蒸馏水为参照，用紫外分光光度计在
波长 510nm下测吸光值 A1。同时设定空白 A0和
样品空白组 A2。由公式得根、茎、叶黄酮类化合
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物对羟基自由基的清除率。
芫荽提取液对羟自由基消除率计算公式见公
式（2）
1 2
0
I 1 100%
§ ·$$
 u¨ ¸¨ $¹© ␵䲔⦷ 公式（2） 式中：A1—加入不同组黄酮类化合物的吸光 值（Fe2-+样品 +水杨酸 +H2O2）； A2—用蒸馏水代替双氧水的吸光值（Fe2-+样 品 +水杨酸 +H2O）； A0—没有加入黄酮类化合物的吸光值（Fe2-+ 双蒸水 +水杨酸 +H2O2）。 2.5 芫荽乙醇提取液对O2-消除作用 参考文献［11］，取 4.5mL pH=8.2 50mmol/L的 Tris-HCl的缓冲液于 10mL 试管中，放于 25℃ 水浴中预热 20min，分别向其中各加 2.0mL的 提取液（根、茎的浓度为 5 mg/mL、10mg/mL 、 15mg/mL 、20 mg/mL、25 mg/mL，叶的浓度为 1 mg/mL、 3 mg/mL、5 mg/mL、7mg/mL、9 mg/mL 的各梯度），再向其中各加 25mmol/L邻苯三酚 0.4mL，混合后用秒表计时在 25℃水浴条件下反 应 4min，反应后立即向其中加入两滴 8mol/LHCl 终止反应。同时设定空白和样品空白组，用蒸馏 水为参照，用紫外分光光度计在波长 320nm下比 色。 芫荽提取液对 O2-消除率计算公式见公式（3） 1 2 0 I 1 100% § ·$  $ u¨ ¸¨$ ¹©
␵䲔⦷ 公式（3）
式中：A1—加入邻苯三酚与抗氧化物的吸光
值（Tris-HCl+试样 +邻苯三酚 +HCl）；
A2—用抗氧化物但不加邻苯三酚的吸光值
（Tris-HCl+试样 +蒸馏水 +HCl）；
A0—加邻苯三酚不加抗氧化物的吸光值
（Tris-HCl+蒸馏水 +邻苯三酚 +HCl）。
2.6 芫荽乙醇提取液对DPPH自由基清消除作用
参考龙海荣［12］方法，用 70%乙醇溶液配制
0.1mmol/LDPPH溶液 500mL，放于 4℃冰箱里
备用。依次向 10mL的试管中加入 4.0mL DPPH
溶液，0.2mL芫荽的乙醇提取物（根、茎的浓度
为 10 mg/mL、20mg/mL、30mg/mL、40 mg/mL、
50 mg/mL，叶的浓度为 5 mg/mL、 10 mg/mL、15
mg/mL、20mg/mL、25mg/mL的各梯度）。混均
匀后置于暗处放置 30min，测定吸光度值为 A1，
同时用 4.0mL 70%的乙醇代替 DPPH溶液为样品
空白 A2，用 0.2mL 70%的乙醇代替抗氧化物做空
白对照 A0，用 10mL 的比色皿仪蒸馏水为参比于
波长 510nm下比色。
芫荽提取液对 DPPH自由基消除率计算公式
见公式（4）
1 2
0
I 1 100%
§ ·$$
 u¨ ¸¨ $¹© ␵䲔⦷ 公式（4） 式中：A1—加入 DPPH与抗氧化物的吸光值； 　　　A2—加入 70%的乙醇与抗氧化物的吸 光值； 　　　A0—加入DPPH与 70%的乙醇的吸光值。 3 结果与讨论 3.1 芫荽中黄酮类化合物最佳提取工艺 表 1 正交实验结果 试验号 因素 A乙醇浓度 （%） B 浸提温度 （℃） C浸取时间 （h） 提取率 （%） 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 k1 k2 k3 k4 R A1（60%） A1 A1 A1 A2（70%） A2 A2 A2 A3（80%） A3 A3 A3 A4（90%） A4 A4 A4 0.069 0.071 0.045 0.044 0.027 B1（60℃） B2（70℃） B3（80℃） B4（90℃） B1 B2 B3 B4 B1 B2 B3 B4 B1 B2 B3 B4 0.022 0.044 0.066 0.097 0.075 C1 （1.5 h） C2 （2 h） C3 （2.5h） C4 （3 h） C2 C1 C4 C3 C3 C4 C1 C2 C4 C3 C2 C1 0.045 0.048 0.080 0.056 0.035 0.018 0.045 0.110 0.104 0.026 0.050 0.057 0.149 0.023 0.042 0.047 0.068 0.021 0.038 0.051 0.066 117 中国食品添加剂 China Food Additives试验研究 2015年第6期 表 1数据所得出实验结果为黄酮类化合物含 量最高的实验为 A2B4C3，通过以黄酮含量为指 标的极差分析计算，可得出各因素对指标影响的 主要顺序为：B＞ C＞ A，即浸取温度＞浸取 时间＞乙醇浓度；芫荽黄酮类化合物在固液比为 1∶ 15基础上的最佳提取工艺条件为：乙醇浓度 70%，温度 90℃，浸取时间 2.5h，此时香菜黄酮 类化合物提取率最大为 0.149%。 3.2 样品中根、茎、叶的总黄酮类含量的测定 以芦丁浓度（mg/mL）为横坐标，吸光度 为纵坐标，制作标准曲线，见图 1，得回归方程 Y=13.794x+0.0769，R2=0.9936，可知在所配制标 准品浓度范围内，所测得芦丁的浓度内呈良好的 线性关系。用紫外分光光度计在波长 510nm处 测得根、茎、叶样品液的平均吸光度分别为：叶 A1=1.480，茎 A2=0.631，根 A3=0.431， y = 13.794x + 0.0769 R 2 = 0.9936 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 0 0.02 0.04 0.06 0.08 浓度（mg/mL） 吸 光 度 吸光度 线性 (吸光度) 图 1 芦丁标准曲线 Fig. 1 The standard curve of the rutin 代入回归方程式 Y=13.794x+0.0769，计算得 叶样液的黄酮类化合物含量 C=102.00mg/mL，茎 样液的黄酮类化合物含量 C=20.00mg/mL，根样 液的黄酮类化合物含量 C=13.00mg/mL，由以上 三种样液黄酮类化合物含量比较可得，芫荽的叶 中的黄酮类化合物含量远远比茎和根的多，而茎 中的黄酮类化合物含量与根的黄酮含量差别不 大。 3.3 芫荽乙醇提取液对羟自由基消除作用 研究芫荽根、茎、叶不同浓度的提取液对 Fenton体系产生的 · OH的清除作用，结果见 图 2。 由图 2 可以看出，芫荽的根、茎、叶的 黄酮类化合物对羟自由基都具有一定的清除能 力，并呈现明显的量效关系。随着根茎叶三个 部位黄酮类化合物浓度的增加，对羟自由基的 清除作用也增强 .根提取液的线性回归方程为 y=0.9274x+25.15，R2=0.9922.IC50=26.795mg/mL， 茎提取液的线性回归方程为 y=0.8076x+20.456， R2=0.964，IC50=36.582 mg/mL. 叶 提 取 液 的 线 性 回 归 方 程 为 y=1.0687+27.621，R2=0.9877， IC50=20.940 mg/mL. 由以上根茎叶不同部位 IC50 的不同得出，IC50越小其清除率越大，芫荽根茎 叶不同部位的提取液中的黄酮类化合物对羟自由 基的的 IC50的大小为：叶＞根＞茎，则得出其三 个部位对羟自由基的消除能力为：叶＞根＞茎。 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 0 10 20 30 40 50 60 浓度（ mg/mL ） 清 除 率 （ % ） 根清除率 茎清除率 叶清除率 图 2 芫荽根茎叶的黄酮类化合物对羟自由基清除能力 3.4 芫荽乙醇提取液对O2-消除作用 清除 O2-活性的常用方法是邻苯三酚自氧化 法，邻苯三酚在碱性条件下发生自氧化释放 O2-， O2-加速邻苯三酚自氧化速率，同时生产有色中 间产物，在 320nm的有强烈的光吸收，中间产物 的积累在滞后 30～ 40s与实践形成线性关系，一 般维持 4min，随后减慢由于自氧化速度依赖于 O2-的浓度，则清除 O2-就可以抑制自氧化反应， 阻止中间产物的积累，从而评价受试物清除 O2- 的能力［5］。以根、茎、叶三个不同部位的提取液 浓度为横坐标，清除率为纵坐标，结果见图 3。 由图 3可知，芫荽的根、茎、叶黄酮类化 合物对 O2-均具有清除能力，而且其清除能力与 黄酮类类化合物浓度呈正相关关系，根提取液 的线性方程为：y=1.9014x+16.937，R2=0.9924， IC50=17.389 mg/mL，茎提取液的线性方程为： y=1.8662x+14.863，R2=0.9969，IC50=18.828mg/ mL.叶提取液的线性方程为：y=4.32x+14.642， 118 中国食品添加剂 China Food Additives试验研究 2015年第6期 R2=0.9923，IC50=8.185mg/ mL，由上得出根茎叶 的提取液的黄酮类化合物的 IC50的大小为：叶＞ 根＞茎，则根、茎、叶三个不同部位对 O2-的清 除能力分别为：叶＞根＞茎，并明显看出，根提 取液的黄酮类化合物消除能力与茎的相似，而叶 的大于根与茎的。 0 10 20 30 40 50 60 70 0 5 10 15 20 25 30 浓度（mg/mL） 清 除 率 （ % ） 根清除率 茎清除率 叶清除率 图 3 芫荽根茎叶的黄酮类化合物对O2-清除能力 3.5 芫荽乙醇提取液对DDPH自由基消除作用 DPPH法广泛应用于测定植物提取物自由 基清除能力的实验。在乙醇溶液中，DPPH是一 种呈紫红色的稳定自由基，在 510nm处有强吸 收。当溶液中存在抗氧化剂时，抗氧化剂能够给 DPPH自由基提供氢原子使其发生褪色，而吸光 值变小，其颜色变得越浅表明抗氧化剂的抗氧化 能力越强。以根、茎、叶三个不同部位的提取液 浓度为横坐标，清除率为纵坐标，结果见图 4. 0 10 20 30 40 50 60 70 80 0 20 40 60 浓度（mg/mL） 清 除 率 （ % ） 根清除率(%) 茎清除率(%) 叶清除率(%) 图 4 芫荽根茎叶的黄酮类化合物 对DPPH自由基清除能力 通过图 4可以直观地看出，芫荽根、茎、 叶乙醇提取液对 DPPH自由基均有消除能力。 根 提 取 液 的 线 性 方 程 为：y=0.187x+10.682， R2=0.9957，IC50=210.257 mg/mL， 茎 提 取 液 的 线 性 方 程 为：y=0.1855x+1.137，R2=0.975， IC50=263.412mg/mL. 叶提取液的线性方程为： y=2.3008x+13.474，R2=0.9915，IC50=15.875mg/ mL，由上得出根茎叶的提取液的黄酮类化合物 的 IC50的大小为：叶＞根＞茎，则根、茎、叶三 个不同部位对 DPPH自由基的清除能力分别为： 叶＞根＞茎，并明显看出，根提取液的黄酮类化 合物消除能力与茎的相似，而叶的远大于根与 茎的。 本实验检测出来芫荽根、茎、叶的抗氧化 性并非与其黄酮类化合物含量一致，本实验对根 茎叶的抗氧化性的研究得出的结论是：叶的抗氧 化性最大，而茎最小，根与茎相差不大，由此猜 测，或许是茎部位存在某些成分阻碍或抑制了茎 中黄酮类化合物的抗氧化性，但是由于缺少相关 的实验证据，需要进一步研究探索真正原因。 4 结论 在芫荽中的不同部位黄酮类化合物含量差 异，较为明显的是叶与根和茎，香菜黄酮类化合 物含量就高的部位是叶，含量最低的是根，而根 与茎差异不明显。根茎叶三个部位对羟自由基、 O2-及 DPPH自由基都有显著的消除作用，而对 羟自由基、O2-及 DPPH自由基的消除能力均为： 叶＞根＞茎，叶抗氧化性最好，而且与根、茎的 差异较为明显，而根与茎的效果相似。芫荽中的 根茎叶中的黄酮类化合物均具有较强的体外抗氧 化活性，有望作为天然抗氧化剂和功能食品得到 开发，针对芫荽黄酮类成分的开发利用应重点选 择叶片部位，根、茎部中的黄酮类虽然较叶低， 但也具有重要的经济价值，也可作为获取黄酮类 成分的重要材料。 参考文献： ［1］陈志红，徐妹奕 .香菜提取液的体外抗氧化活性 [J]. 食品研 究与开发，2009，30（11）：69-71. ［2］赵喜红，何小维，罗志刚，等 .柿叶黄酮类物质的乙醇提取 工艺及其抗氧化性的研究 [J]. 食品研究与开发，2007，28 （3）：49-53. ［3］芳清，徐卫东 .花生壳中黄酮类化合物的提取及其纯化 [J]. 食品科学，2009，30（8）：101-105. ［4］戴国彪，姜子涛，李荣，等 . 芫荽仔精油抗氧化能力研究 [J]. 食品研究与开发，2010，3（8）：8-11. 119 中国食品添加剂 China Food Additives试验研究 2015年第6期 ［5］李锋 .芫荽籽化学成分分析及其对油脂的抗氧化性的研究 [D]. 新疆：新疆大学，2005. ［6］胡春，丁霄凌 .黄酮类化合物在不同抗氧化体系中的抗氧化 研究 [J]. 食品发酵工业，1996，22（3）：46-53. ［7］焦士蓉，王玲，林玲 . 芦柑皮黄酮类物质的微波炉辅助提 取及其抗氧化活性研究 [J]. 西华大学学报：自然科学报， 2007，26（4）：37-83. ［8］张强，孙玉军，储俊，等 . 洋葱中黄酮类化合物的提取及其 体外抗氧化活性研究 [J]. 中国食品添加剂，2009，3：74-79. ［9］林珊，林梅芳，吴娇瑜，等 . 竹笋壳黄酮类化合物的提取及 其抗氧化活性研究 [J]. 应用化工，2012，41（3）：465-468. ［10］唐津忠，鲁晓翔，陈瑞芳 . 金莲花中黄酮类化合物的提取 及其抗氧化性研究 [J]. 食品科学，2003，24（6）：88-91 ［11］玄红专，桑青，麻建军 . 邻苯三酚自氧化法测定不同蜂产 品抗氧化活性生的研究 [J]. 食品科技，2008，4：137-139. ［12］夏海涛，刘玉芬，沈杨彬，等 . 山麻楂黄酮提取条件的 响应面法优化及不同部位黄酮含量的测定 [J]. 食品科学， 2012，33（24）：137-141. ቛ࠷ں኷ǖေோࣷቛୟ 198 ࡽ Ꭺڧ὘XXX
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